- Overview
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- Literature/Support
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Overview
Proteoglycans are categoried depending upon the nature of their glycosaminoglycan chains (chondroitin sulfate, dermatan sulfate, heparan sulphate and keratan sullfate) as well as characterized by size.
Aggrecan is a large aggregating proteoglycan of articular cartilage. It is found also in aorta tissue, discs, tendons and in the perineuronal net. It is responsible for hydrating cartilage, giving it compressibility and resiliance during joint loading, thereby playing a major role in the normal function of cartilage. Depletion of glycosaminoglycan bearing aggrecan fragments is one of the earliest events in cartilage destruction.
Data/Specifications
Immunogen: DIPEN synthetic peptide conjugate.
Clone: BC-4
Host: Mouse
Myeloma: x63-Ag8.653
Isotype: IgG1
Light Chain type: kappa
Specificity: Recognizes the N-terminal neoepitope sequence (...DIPEN) generated at the “MMP cleavagesite” after MMP catabolism in the interglobular domain of aggrecan between amino acids..PEN341 and 342FFG.
Cross-reactivity: This antibody cross-reacts with human, Rat, guinea pig, horse, and Pig.
Purity: Affinity purified on protein G
Form: Liquid, 1 mL/vial
Concentration: 0.1 mg/mL
Storage: -20° C
Literature/Support
Aggrecan Antibody, clone BC4 Insert (PDF, 332 KB)
Joint Disease and Aggrecan (blog post)
References/Citations:
Dupuis, L. E., Nelson, E. L., Hozik, B., Porto, S. C., Rogers-DeCotes, A., Fosang, A., & Kern, C. B. (2019). Adamts5−/− mice exhibit altered aggrecan proteolytic profiles that correlate with ascending aortic anomalies.Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology,39(10), 2067-2081.
| References/Citations: | How the Aggrecan N-terminal Neoepitope Antibody was used: |
Recapitulation of endochondrial bone formation using human adult mesenchymal stem cells as a paradigm for developmental engineering Celeste Scotti et al., PNAS, April 2010; 107:7251-7256. (Supporting Literature: Supporting Literature ) | Immunohistochemistry analysis to characterize the extracellular matrix of late hypertrophic cartilage implants harvested from mice. |
| Identification of a Novel HtrA1-susceptible Cleavage Site in Human Aggrecan: EVIDENCE FOR THE INVOLVEMENT OF HtrA1 IN AGGRECAN PROTEOLYSIS IN VIVO Angela Chamberland et al., J. Biol. Chem., Oct 2009; 284: 27352 - 27359. | Western blot analysis to detect the N-terminal neoepitope-DIPEN cleavage site of purified full-length human aggrecan, after digestion with MMP-13.This was visualized at ~50 kDa. |
How To Use
Applications:
- Western-Blotting -Suggested dilution: 1:100Detects a a band of approximately 60 kDa
- ELISA
- IHC
Technical Notes:
This antibody should work in IHC on formalin- or paraformaldehyde-fixed paraffin embedded
sections as well as either alcohol-fixed frozen sections or un-fixed snap-frozen sections.
Samples are usually deglycosylated using 0.01 Units Chondroitinase ABC (Sigma), 0.01
Units Keratanase (Seikagaku) and 0.0001 Units Keratanase II (Seikagaku) per 10μg S-GAG
of non-deglycosylated aggrecan for optimal epitope recognition in SDS-PAGE and immunohistochemistry
(1, 2).
Related Products
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生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合,形成的生物素衍生物,不仅保持了大分子物质的原有生物活性,而且比恬度高,具多价性。此外,每个亲和素分子有四个生物素结合部位,可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此,BAS具有多级放大作用,使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力,其反应呈高度专一性。因此,BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时,并不增加非特异性干扰。而且,BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响,使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性
亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍,二者结合形成复合物的解离常数很小,呈不可逆反应性;而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此,BAS在实际应用中,产物的稳定性高,从而可降低操作误差,提高测定的精确度。
普适性
生物素-结合素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法。例如对于某待测分子,已经得到了对于该分子的生物素标记抗原,那么配合结合亲和素的胶体金可以在电镜下观测,配合结合荧光标记的亲和素可以使用流式细胞仪筛选,配合连接到酶的亲和素可以进行ELISA等免疫组化实验。
亲和素(avidin,AV)亦称抗生物素蛋白、卵白素,是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白,分子量为68kD,等电点pI=10.5;耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用.尤其是与生物素结合后,稳定性更好。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用,亲和常数(K)为1015mol/L,比抗原与抗体间的亲和力(K=10.5~11L/mol)至少高1万倍。并且,二者的结合稳定性好专一性强,不受试剂浓度,PH环境,抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素,这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此,BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究,亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。
亲和素由于带有一个糖链侧链,导致容易和细胞表面的多糖发生非特异性亲和。因此,链霉亲和素被开发出来。
链霉亲和素(streptavidin,SA)是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质,分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成,其中每条肽链都能结合一个生物素,并且不带任何糖基,因此与亲和素一样,一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子,二者亲和常数(K)亦为1015mol/L。链霉亲和素的适用范围比亲和素更为广泛。向左转|向右转
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
BAS用于检测的基本方法可分为三大类。
第一类是标记亲和素连接生物化大分子反应体系,称BA法,或标记亲和素生物素法(LAB)。
第二类以亲和素两端分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素,称为桥联亲和素-生物素法(BRAB)。
第三类是将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物,再与生物素化的抗抗体接触时,将抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体,称为ABC法。这一方法可以将微量抗原的信号放大成千上万倍,以便于检测。 亲和层析是将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液, 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
生物素-亲和素系统可以与亲和层析的方法结合,大大提高纯化蛋白质的纯度,或者为已知配体寻找受体。步骤是首先将生物素共价结合到配体蛋白上,再将生物素化后的配体蛋白加入含有受体蛋白的混合物,然后将此混合物通过预先固定了亲和素的层析柱,这时配体受体复合物就通过生物素-亲和素系统停留在层析柱上,最后通过选择性洗脱获得此受体配体蛋白复合物或者仅有受体。这一方法被广泛运用于药物研发行业,当人们发现某种药物分子具有疗效但是又不清楚它具体作用于哪种蛋白质时,可以将其生物素化然后把靶蛋白从成千上万种蛋白质中“抓”出来。
生物素-亲和素系统还可以用相似的方法分离DNA.方法是在DNA探针的一端挂上生物素,然后用其获得目的DNA片段,再利用固定化的亲和素回收这些DNA。
传统的基因探针是由带放射性的磷酸碱基合成的,我们可以用被生物素标记的磷酸碱基合成基因探针,避免了实验过程中放射性物质可能造成的伤害。

