Storage and Rehydration: Store freeze-dried solid at 2-8°C. Rehydrate with the indicated volume of dH2O (see product specification sheet) and centrifuge if not clear. Prepare working dilution on day of use. Product is stable for about 6 weeks at 2-8°C as an undiluted liquid.Extended Storage after Rehydration: Aliquot and freeze at -70°C or below. Avoid repeated freezing and thawing. Alternatively, add an equal volume of glycerol (ACS grade or better) for a final concentration of 50%, and store at -20°C as a liquid. Expiration date: one year from date of rehydration. The expiration date may be extended if test results are acceptable for the intended use.
Buffer: 0.01M Sodium Phosphate, 0.25M NaCl, pH 7.6 Stabilizer:15 mg/ml Bovine Serum Albumin (IgG-Free, Protease-Free) Preservative:0.05% Sodium Azide Suggested Working Concentration or Dilution Range:Western Blot:- 0.5-2 µg / mlHisto-/Cyto-Chemistry:-0.5-2 µg / mlDilution factors are presented in the form of a range because the optimal dilution is a function of many factors, such as antigen density, permeability, etc. The actual dilution used must be determined empirically.ConjugateAlexa Fluor® 488
Amax: 493Emax: 519nmAlexa Fluor® 488-conjugated antibodies absorb light maximally at 493 nm and fluoresce with a peak around 519 nm. In aqueous mounting media they are brighter than FITC, Cy2, and DyLight 488. Alexa Fluor® 488 conjugates are recommended for maximum sensitivity for all immunofluorescence procedures requiring a green-fluorescing dye, except for protocols that include mounting in plastic mounting media.
Images & ReferencesThis product is for in vitro research use only. It is not a medical device and it is not intended for diagnostic or therapeutic purposes.
This product is provided under an agreement between Life Technologies Corporation and Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc, and the manufacture, use, sale or import of this product is sold pursuant to a license from Life Technologies Corporation for use of its fluorescent dye technology. The sale of this product is expressly conditioned on the buyer not using the product or its components (1) in manufacturing; (2) to provide a service, information, or data to an unaffiliated third party for payment; (3) for therapeutic, diagnostic or prophylactic purposes; (4) to resell, sell or otherwise transfer this product or its components to any third party, or for any other commercial purposes. For information on purchasing a license to this product for purposes other than research, contact Life Technologies Corporation, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 or outlicensing@lifetech.com.
Jackson总部位于美国宾夕法尼的兰卡斯特，距离费城大概有40英里。Jackson在1982年由科学家展开了包括在细胞生物学，蛋白质化学，微生物学，免疫学及产品开发实验研究。我们的目标是为世界各地的研究者能最大选择的提供最高质量的科学试剂以及最棒的技术支持和售后服务。蚂蚁淘向您提醒的是，Jackson产品仅用于研究，不用于诊断或治疗用途。作为美国著名的各种二抗生产公司之一，Jackson在全世界各国设有几十家代理。由于其产品效价高、种类全、价格低廉，因而成为全球各大药厂、试剂盒生产厂、大型实验室采购此类试剂的首选。其产品主要包括：各种纯化的二抗、标记的二抗（AMCA、Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记）、金标试剂等。
Jackson二抗产品选购简介
为便于客户选购Jackson公司的各种二抗，特将选购时的注意事项摘译如下：
JacksonImmunoResearch的抗体产品线完全，有全球最大的二抗产品库，能提供多种应用类型和需要的二抗产品，其二抗产品本身也具有极高的产品质量和稳定性。以上述产品为例，其HRP酶标山羊抗小鼠二抗，WB实验的应用稀释比率为1:10000-1:200000，也就是说，购买的2ml二抗，实际应用时相当于20L-400L的最终使用液。另外，一次购买大包装，避免了不同批次之前的差异，降低了实验条件本身的误差。作为多家著名品牌的代理商，蚂蚁淘根据国内科研的现实需求，为客户选择最具性价比的二抗及血清产品免疫学解决方案。如果您对Jackson的产品感兴趣，请致电027-84454412到蚂蚁淘科技有限公司问询您所感兴趣的产品类型。
JacksonImmunoResearchLaboratories,INC.专业致力于亲和纯化的二抗和免疫球蛋白的生产及偶联。产品主要销往世界各地的大学和科研院所。该公司位于宾夕法尼亚州费城以西约40英里，始建于1982年，经过40年左右的发展，Jackson的二抗以种类丰富（物种齐全，标记多样，应用广泛）、性价比高、供货迅捷而受到更多科研学者和工业客户的青睐。
Jackson的产品主要有酶标二抗、荧光标记二抗、生物素标记二抗、胶体金标记二抗、封闭血清等等，其中JacksonHRP标记羊抗兔/羊抗鼠二抗，更是很多生产厂家的重要物料之一。苏州蚂蚁淘生物科技有限公司作为Jackson在中国的代理商，备有大量二抗现货，并能提供专业的售前咨询和完善的售后服务。
JacksonImmunoResearchLaboratories,INC.专业致力于亲和纯化的二抗和免疫球蛋白的生产及偶联。产品主要销往世界各地的大学和科研院所。该公司位于宾夕法尼亚州费城以西约40英里，始建于1982年，经过40年左右的发展，Jackson二抗以种类丰富（物种齐全，标记多样，应用广泛）、性价比高、供货迅捷而受到更多科研学者和工业客户的青睐。
Jackson的所有产品均具有极高的纯度和高超的品质，大部分二抗产品以冻干粉形式存在，易于保存和运输；作为二抗的实际生产商（非OEM商），产品的性价比也是非常高的，很多大厂家诸如T.F等也会从JacksonOEM产品。另外厂家完善的库存和供应体系以及高效稳定的纯化技术，保证了大部分二抗产品均能现货形式供应，不同批次的产品质量的稳定性也非常高。
Jackson的产品主要有酶标二抗、荧光标记二抗、生物素标记二抗、胶体金标记二抗、封闭血清等等，其中JacksonHRP标记羊抗兔/羊抗鼠二抗，更是很多生产厂家的重要物料之一。苏州蚂蚁淘生物科技有限公司作为Jackson在中国代理商，备有大量二抗现货，并能提供专业的售前咨询和完善的售后服务。
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生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性
亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。
普适性
生物素-结合素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法。例如对于某待测分子，已经得到了对于该分子的生物素标记抗原，那么配合结合亲和素的胶体金可以在电镜下观测，配合结合荧光标记的亲和素可以使用流式细胞仪筛选，配合连接到酶的亲和素可以进行ELISA等免疫组化实验。
Eli-spot分析是设计用于在单细胞悬液中计数分泌细胞因子的细胞数量的方法。这个方法的优点在于只需在体外进行很少的处理从而使细胞因子产生的分析尽可能接近于体内状况。这个技术用于测定在给予一定刺激的情况下细胞因子产生细胞的数目，以及在某种处理或病理条件下的细胞因子产生细胞的数量。
2主要原理
细胞刺激后，原位产生的细胞因子被一种特异的单抗捕获，在细胞溶解后，捕获的细胞因子与第二种生物素化的检测性抗体结合，后者进一步通过与连接碱性磷酸酶的链亲和素结合被识别。PVDF包被孔的板之后与BCIP/NBT底物作用，紫色的斑点提示单个细胞产生的细胞因子。
35×96孔试剂盒的内容物
▲捕获抗体（0.52ml），置于4℃。
▲生物素化检测抗体（冻干，重悬于0.55ml水中）。
▲抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶结合物，置于4℃。
▲牛血清白蛋白（1g），置于4℃。
▲撇去的干牛奶（1g），放于室温。
▲备用底物溶液（50ml），置于4℃。
▲96孔PVDF包被板。
▲96孔PVDF-包被板
▲细胞培养基
▲CO2孵箱
▲70%乙醇
▲Tween20
▲碱性磷酸盐缓冲液
5直接或间接Eli-spot
细胞可以在抗体包被孔中直接刺激（直接）或者首先在24孔板或细颈瓶中刺激，收获，然后种于包被孔中（间接）。
方法根据：1）被分析的细胞类型；2）预期的细胞密度。如果细胞因子产生细胞的数量很少，建议用直接法实验，但是如果细胞因子产生细胞的数量很多，最好用间接的方法。无论采用直接或间接的方法，所有刺激以后的步骤是相同的。
主要步骤：
1）96孔PVDF板首先以70%乙醇处理，然后以捕获抗体包被。
2）将细胞放入抗体包被过的含有抗原/丝裂原的微孔中，在间接法中细胞被预刺激。
3）细胞用倒置平板法去除，与生物素标记的抗体共育。
4）与结合于碱性磷酸盐的链霉亲和素反应。
5）BCIP/NTB斑点形成。
◆刺激步骤：
小鼠脾细胞在PMA和lonomycin刺激下产生IFN-γ。人的IFN-γ由PBMC在PMA和lonomycin的刺激下产生。
建议步骤：
小鼠1）分离脾细胞，ficoll。间期收获细胞。用PBS洗三次，去除ficoll。2）用培养基稀释细胞（RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清）含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10（4）—5×10（4）细胞到抗体包被的PVDF包被板，在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同，根据细胞因子产生细胞的密度，优化条件。
人用培养基稀释细胞（RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清）含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10（4）—5×10（4）细胞到抗体包被的PVDF包被板，在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同，根据细胞因子产生细胞的密度，优化条件。
●试剂准备
●检测抗体用0.55ml蒸馏水溶解冻干抗体，轻轻混匀溶液并等到所有冻干抗体溶解。
●抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶用含1%BSA的PBS稀释（1/1000）
●碱性磷酸盐缓冲液（10×浓缩液）
1L溶液：80gNaCL；2gKH2PO4;14.4gNa2HPO42H2O;2gKCL，加蒸馏水至1升。检查PH在7.2-7.4之间，此溶液在用之前稀释为1×溶液。
●含2%脱脂干奶粉的PBS一块板溶0.2g干粉于10ml1×PBS。
●含1%BSA的PBS一块板溶0.2g干粉于20ml1×PBS。
●含0.1%Tween的PBS一块板溶100μlTween20于100ml1×PBS。
●70%乙醇一块板以3ml蒸馏水和7ml乙醇混匀。
★试剂保存
1）如果短时间内不用，溶解的检测抗体应分装和保存于—20℃，在这种条件下，试剂可稳定保存至少一年。
2）底物缓冲液保存于4℃。
3）链霉亲和素-碱性磷酸酶保存于4℃。
Eli-spot步骤
1PVDF包被板用100ul70%乙醇室温下处理10分钟。
2倒空孔并以100ulPBS洗3次。
3将100ul捕获抗体加到10mlPBS中，混合并分至每孔中100ul，盖上板盖，放至4℃过夜。
4倒空每孔，用100ulPBS洗一次。
5每孔加100ul含2%脱脂干牛奶的PBS，盖板，室温2小时。
6在洗涤槽上轻弹板子倒空液体，并在吸水纸上吸干。
7用PBS洗一次。
8分配每孔100ul细胞悬液（含合适的细胞数和合适的刺激物浓度），细胞可以在体外预刺激（间接Eli-spot）。盖上板，放细胞于37℃CO2孵箱，合适的时间15-20小时。（在此期间不要摇动或平移平板。）
9在洗涤槽上轻弹板子倒空液体，并在吸水纸上吸干。
10每孔加100ul含0.1%Tween20的PBS，4℃放置10分钟。
11用含0.1%Tween20的PBS洗板三次。
12每一块板，稀释100ul检测抗体到10ml含1%BSA的PBS中，每孔加100ul，封闭扳子放于37℃1小时30分钟。
13倒空扳子并用含0.1%Tween20的PBS洗三次。
14每一块板，稀释10ul链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物到10ml含1%BSA的PBS中，每孔加100ul，封闭扳子放于37℃1小时。
15倒空，用含0.1%Tween20的PBS洗三遍，反复用吸水纸吸以去尽所有残存的液体。
16每孔加100ul备用BCIP/NBT溶液。
17让反应在室温进行5-20分钟。肉眼可见小斑点形成。
18用蒸馏水洗三次。
19干燥每孔。计数斑点。注意斑点在4℃过夜后可能会变得明显，放置扳子于室温，避免直接光照。
yyj5028
生物素和亲和素的结合部位是咪唑酮环
已修改~
下面开始更新2016的
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
BAS用于检测的基本方法可分为三大类。
第一类是标记亲和素连接生物化大分子反应体系，称BA法，或标记亲和素生物素法(LAB)。
第二类以亲和素两端分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素，称为桥联亲和素-生物素法(BRAB)。
第三类是将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，再与生物素化的抗抗体接触时，将抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体，称为ABC法。这一方法可以将微量抗原的信号放大成千上万倍，以便于检测。 亲和层析是将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
生物素-亲和素系统可以与亲和层析的方法结合，大大提高纯化蛋白质的纯度，或者为已知配体寻找受体。步骤是首先将生物素共价结合到配体蛋白上，再将生物素化后的配体蛋白加入含有受体蛋白的混合物，然后将此混合物通过预先固定了亲和素的层析柱，这时配体受体复合物就通过生物素-亲和素系统停留在层析柱上，最后通过选择性洗脱获得此受体配体蛋白复合物或者仅有受体。这一方法被广泛运用于药物研发行业，当人们发现某种药物分子具有疗效但是又不清楚它具体作用于哪种蛋白质时，可以将其生物素化然后把靶蛋白从成千上万种蛋白质中“抓”出来。
生物素-亲和素系统还可以用相似的方法分离DNA.方法是在DNA探针的一端挂上生物素，然后用其获得目的DNA片段，再利用固定化的亲和素回收这些DNA。
传统的基因探针是由带放射性的磷酸碱基合成的，我们可以用被生物素标记的磷酸碱基合成基因探针，避免了实验过程中放射性物质可能造成的伤害。
1.avidin
英 ['ævɪdɪn]美 ['ævədɪn]
n. [生化] 抗生物素蛋白；[生化] 卵白素；亲和素
2.streptavidin
[s,trep'tævidin]
n. 链霉亲和素；抗生蛋白链菌素
亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用，亲和常数（K）为1015mol/L，比抗原与抗体间的亲和力（K=10.5～11L/mol）至少高1万倍。并且，二者的结合稳定性好专一性强，不受试剂浓度，PH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此，BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。
亲和素由于带有一个糖链侧链，导致容易和细胞表面的多糖发生非特异性亲和。因此，链霉亲和素被开发出来。
链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素，并且不带任何糖基，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015mol/L。链霉亲和素的适用范围比亲和素更为广泛。向左转|向右转
