
Overview:
c-KIT (T670E) is the human homolog of the proto-oncogene c-kit which was first identified as the cellular homolog of the feline sarcoma viral oncogene v-kit. c-KIT (T670E) is a type 3 transmembrane receptor for MGF (mast cell growth factor, also known as stem cell factor). c-KIT (T670E) function in hematopoiesis, melanogenesis, and gametogenesis (1) and mutations in this gene are associated with gastrointestinal stromal tumors, mast cell disease, acute myelogenous lukemia, and piebaldism. c-KIT (T670E) signaling is involved in human skin pigmentation and that this signaling pathway is regulated by sKIT (2). It is also help in regulating primordial germ cell growth.
Gene Aliases:
PBT, SCFR, CD117
Genbank Number:
NM_000222
References:
1. Rothschild, G. et.al: A role for Kit receptor signaling in Leydig cell steroidogenesis. Biol. Reprod. 69: 925-932, 2003.2. Kasamatsu, S. et.al: Production of the soluble form of KIT, s-KIT, abolishes stem cell factor-induced melanogenesis in human melanocytes. J. Invest. Derm. 128: 1763-1772, 2008.
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转录的只是插入的片断,怎么会跟模板一样大呢,一般情况下应该比模板小多了。我都是跑电泳,严格来说应该跑变性的;嫌麻烦可以非变性,快速(防止RNA降解)十分钟即可;抛出来的带会有两条,上面大的是模板,下面一条比较亮的是RNA,那么你的转录就 成功了。
PCR第一个步骤如果没记错的话应该叫“变性”, PCR的话是不需要解旋酶的,直接利用DNA的高温变性特性,在高温下,使氢键断开,DNA双链恢复为单链。 (还有解旋酶好像是解除双螺旋的结构,是一种拓扑异构酶,对于氢键的打开没有贡献吧
对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了。推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高。TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度为37℃,对于大多数试验来讲是满足要求的。HaiGene的D0401操作要多一个步骤,但其反转录温度是55℃(耐高温的反转录酶),提高了反转录温度使得高GC含量、复杂模板、长mRNA的模板都能有效反转录,因此其反转录效率更高,更能够获得样本中基因的真实表达量。如果后续试验是RealTime PCR、ORF克隆、高GC含量、或者你的待研究基因结构复杂程度未知,还是选用耐高温的反转录酶更理想。对于反转录高手来说,直接购买反转录酶、再购买Rnase Inhibitor自己配制反转录体系就可以了。对于样本量大的课题组来讲,相对还是比较经济的。选择反转录酶时仅需要考虑是否需要耐高温的酶,来克服目的基因的复杂结构就可以了。PROMEGA、TAKARA、HaiGene、 TRANSGEN等品牌的反转录酶性价比还都是不错的。Life、NEB的也不错,不过性价比一般,不一一解释了。
首先,不否认它比大多数国产的试剂盒做得好,提取的纯度、方便度和量,都还很不错。
其次,它是日本的。so我觉得实验室用用天根的,就非常好了。拒绝日货,从实验室做起。

