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| Application | Cell Proliferation Test |
|---|---|
| Cytotoxicity Test |
This homogeneous assay involves simply adding a single reagent, the CellCount -Blue reagent, to the cell culture and measuring the fluorescence intensity (excitation wavelength = 530-570 nm, emission wavelength = 590-620 nm after an incubation step. The CellCount-Blue reagent, utilizes the redox dye resazurin whichis not fluorescent, but upon reduction by metabolically active cells is converted into a highly fluorescent product (resorufin). Living cells can readily reduce this non-toxic reagent and the resulting increase in fluorescence intensity can be conveniently monitored using a luorescence specturophotometer or plate reader. Nonviable cells have no metabolic capacity and, thus, will not reduce the dye. Therefore, the fluorescence intensity observed in this assay is a true measure of the viable cells. The CellCount-Blue reagent has been optimized for maximum sensitivity, reproducibility and long shelf-life. The homogeneou cell-based assay can be performed in multi-well plates.
The reagent is comparible with all culture media and with all liquid handling systems for high-throughput screening applications in 96-well and 384 -well plates. Appli -cations include cell proliferation, cytotoxicity and apoptosis.
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2021-07-21
技术文章AMV和M-MuLV在应用上的区别更多逆转录酶文章请点击：http://www.e1617.com/nizhuanlumei-2191/... 查看更多
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2021-07-16
技术文章AMV和M-MuLV在应用上的区别更多逆转录酶文章请点击：http://www.e1617.com/nizhuanlumei-2191/... 查看更多
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2021-08-31
普洛麦格（北京）生物技术有限公司在发布的AMV 逆转录酶供应信息，浏览与AMV 逆转录酶相关的产品或在搜索更多与AMV 逆转录酶相关的内容。 查看更多
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2020-01-11
TaqMan™ MicroRNA Reverse Transcription Kit Applied Biosystems™ Applied Biosystems® TaqMan® MicroRNA反转录试剂盒提供最佳性能的基于TaqMan® MicroRNAAs... 查看更多
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2021-08-06
15联呼吸道病毒荧光标记PCR检测试剂盒，是一种用来检测疾病的诊断试剂。... 查看更多
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2021-07-17
技术文章AMV和M-MuLV在应用上的区别更多逆转录酶文章请点击：http://www.e1617.com/nizhuanlumei-2191/... 查看更多
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2021-08-15
北京百泰克生物技术有限公司在发布的Thermo OneStep RT-PCR Kit一步法试剂盒供应信息，浏览与Thermo OneStep RT-PCR Kit一步法试剂盒相关的产品或在搜索更多与Thermo OneStep RT-PCR Kit一步法试剂盒相关的内容。 查看更多
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2021-08-13
逆转录酶是由陕西脉元生物科技有限公司代理或销售的MYbiotetch品牌的试剂，产品来源于国产。陕西脉元生物科技有限公司是中国最权威的逆转录酶试剂销售服务商之一，在西安等地方销售逆转录酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业逆转录酶仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的逆转录酶产品 查看更多
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2021-07-29
AMV逆转录酶来自禽成骨髓细胞白血病病毒，引物延伸反应通常用AMV，AMV性能更好，用AMV的延伸温度可达55℃, 以消除次级结构。 M-MLV逆转录酶来自莫洛尼鼠白血病病毒，M-MLV的最适温度为37℃，在更高温度下，M-MLV不稳定，但MMLV可合成更长的产物(12KB)，这一特点对引物延伸反应不适用，因为引物延伸反应所得的产物一般较短，为100-500个核苷酸。 总之，AMV逆转录与M-MLV逆转录酶相比有更好的热稳定性与高度的... 查看更多
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2021-09-18
货号：A0010GQ 查看更多
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逆转录和反转录有什么区别?123
悠然の翼2017-10-02
听老师说这两个不一样
【求助】mRNA逆转录后得到的cDNA是单链还是双链 核酸基因技术...123
风吹的纱2017-10-06
是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：一、cDNA第二链的合成:1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul 10mM dNTP(自己配制)xul dd H2O1ul RNase H(2U/ul)10ul DNA Polymerase I(10U/ul)总体系为200ul;2. 混匀后,16℃反应2.5小时;3. 70℃灭活10分钟;4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。二、双链cDNA末端补平:1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):6ul 10mM dNTP2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul) 2ul BSA(10mg/ml)2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程：1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。3．加入spin column中，13000rpm离心1min。4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。5．13000rpm，再离心1min。6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。7．13000rpm离心2min。8．加入30ul buffer EB，静置10min。9．13000rpm离心2min。10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。
【求助】小鼠逆转录可以用Thermo 的试剂盒吗 核酸基因技术 丁香 ...123
xiayu7909212021-08-01
近期要做小鼠的RNA纯化、逆转录，临做了才想起来小鼠可以用我们常用的试剂盒吗，ThermoScientificRevertAidHMinusFirstStrandCDNASynthesisKit,试剂盒中的引物Oligo（dT)Primer可以用于小鼠吗？
invitrog逆转录试剂盒说明书 123
你欠我钱喲硜U2021-07-20
是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：
一、cDNA第二链的合成:
1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):
20ul 10×DNA Polymerase I buffer
6ul10mM dNTP(自己配制)
xuldd H2O
1ulRNase H(2U/ul)
10ul DNA Polymerase I(10U/ul)
总体系为200ul;
2. 混匀后,16℃反应2.5小时;
3. 70℃灭活10分钟;
4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;
5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。
注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。
二、双链cDNA末端补平:
1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):
6ul 10mM dNTP
2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul)
2ul BSA(10mg/ml)
2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;
3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;
4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;
5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;
6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;
7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;
8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.
注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。
PCR纯化试剂盒操作流程：
1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。
2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。
3．加入spin column中，13000rpm离心1min。
4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。
5．13000rpm，再离心1min。
6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。
7．13000rpm离心2min。
8．加入30ul buffer EB，静置10min。
9．13000rpm离心2min。
10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。
一、cDNA第二链的合成:
1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):
20ul 10×DNA Polymerase I buffer
6ul10mM dNTP(自己配制)
xuldd H2O
1ulRNase H(2U/ul)
10ul DNA Polymerase I(10U/ul)
总体系为200ul;
2. 混匀后,16℃反应2.5小时;
3. 70℃灭活10分钟;
4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;
5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。
注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。
二、双链cDNA末端补平:
1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):
6ul 10mM dNTP
2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul)
2ul BSA(10mg/ml)
2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;
3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;
4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;
5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;
6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;
7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;
8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.
注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。
PCR纯化试剂盒操作流程：
1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。
2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。
3．加入spin column中，13000rpm离心1min。
4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。
5．13000rpm，再离心1min。
6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。
7．13000rpm离心2min。
8．加入30ul buffer EB，静置10min。
9．13000rpm离心2min。
10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。
...哪些公司的miRNA提取试剂盒和逆转录试剂盒比较好 核酸基因技术讨论...123
liuhua2021-08-07
13楼
加尾法是采用加A酶先对mirna进行加尾，然后再用带oligodt的引物反转录，他的反转录引物是通用的，一次反转录可以获得所有miRNA的cdna，效率高。茎环法是采用特异性反转录引物序列+颈环结构作为反转录引物进行反转录的，一次反转录只能获得一种mirna的cdna，可能有几种一起反转录的，这个我不太清楚一起反转录的效果。然后茎环法的经典即ABI的探针法定量试剂盒。我用过茎环法反转录+染料法定量的，下游引物为通用引物，结果不太好，就现在用的这家的他采用的是双向引物都是特异性的，效果还可以。不知道我说的清楚不，希望能对你有帮助。
加尾法是采用加A酶先对mirna进行加尾，然后再用带oligodt的引物反转录，他的反转录引物是通用的，一次反转录可以获得所有miRNA的cdna，效率高。茎环法是采用特异性反转录引物序列+颈环结构作为反转录引物进行反转录的，一次反转录只能获得一种mirna的cdna，可能有几种一起反转录的，这个我不太清楚一起反转录的效果。然后茎环法的经典即ABI的探针法定量试剂盒。我用过茎环法反转录+染料法定量的，下游引物为通用引物，结果不太好，就现在用的这家的他采用的是双向引物都是特异性的，效果还可以。不知道我说的清楚不，希望能对你有帮助。
天根的逆转录和premega逆转录试剂盒哪个好用123
办护2021-08-02
trizol法提取大小RNA，trizol买invitrogen公司的。 逆转录用promega公司的M-MLV
【求助】大家miRNA逆转录和qPCR的试剂盒用的是那个公司的啊,求...123
tufeiwujuncheng2021-08-03
大家miRNA逆转录和qPCR的试剂盒用的是那个公司的啊，求推荐！
Fermentas (MBI)反转录试剂盒K1622说明书123
wings_0082021-07-21
有一款RevertAid™FirstStrandCDNASynthesisKit
和RevertAid™HMinusFirstStrandcDNASynthesisKit，FirstStrandcDNASynthesisKit
大家又没有用过，这个公司的酶据说很好啊。
和RevertAid™HMinusFirstStrandcDNASynthesisKit，FirstStrandcDNASynthesisKit
大家又没有用过，这个公司的酶据说很好啊。
【求助】请问做microRNA的逆转录和PCR,能用普通的试剂盒吗? ...123
琳大小姐3042021-08-16
一般都是用针对miRNA的试剂盒，普通的逆转录方法我这里也做过，但是结果不是很稳定，你懂得！
癫痫患儿外周血CD19^+B,CD20^+B淋巴细胞和自然杀伤细胞的检测及...123
萿酱2017-10-01
逆转录一般用罗氏的，目前天根的全式金的也挺好用，还方便。
如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。不需要特别的试剂盒、
如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。不需要特别的试剂盒、
【求助】miRNA逆转录试剂盒 核酸基因技术论坛123
我爱res2021-08-10
求用过QIAgen plasmid Maxi Kit 试剂盒的大神,有几个问题请教一下...123
胜胜6e處D2021-08-09
qiagen有体外转录试剂盒么
转录的只是插入的片断，怎么会跟模板一样大呢，一般情况下应该比模板小多了。我都是跑电泳，严格来说应该跑变性的；嫌麻烦可以非变性，快速（防止RNA降解）十分钟即可；抛出来的带会有两条，上面大的是模板，下面一条比较亮的是RNA，那么你的转录就 成功了。
PCR第一个步骤如果没记错的话应该叫“变性”， PCR的话是不需要解旋酶的，直接利用DNA的高温变性特性，在高温下，使氢键断开，DNA双链恢复为单链。 （还有解旋酶好像是解除双螺旋的结构，是一种拓扑异构酶，对于氢键的打开没有贡献吧
转录的只是插入的片断，怎么会跟模板一样大呢，一般情况下应该比模板小多了。我都是跑电泳，严格来说应该跑变性的；嫌麻烦可以非变性，快速（防止RNA降解）十分钟即可；抛出来的带会有两条，上面大的是模板，下面一条比较亮的是RNA，那么你的转录就 成功了。
PCR第一个步骤如果没记错的话应该叫“变性”， PCR的话是不需要解旋酶的，直接利用DNA的高温变性特性，在高温下，使氢键断开，DNA双链恢复为单链。 （还有解旋酶好像是解除双螺旋的结构，是一种拓扑异构酶，对于氢键的打开没有贡献吧
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