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Description
Numeroustechniqueshavebeendevelopedtoprepareimmunoliposomesbasedonthenucleophilicreactivityoffreeaminegroupsofproteinsorpeptides.OneofthemostpopularandcommonlyusedmethodsistocovalentlycouplefreecarboxylicgroupstoprimaryaminesthroughactivationofthecarboxylgroupswithEDC(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide).EDC,whichisaso-calledzero-lengthcrosslinkingagent,reactswiththecarboxyltoformanaminereactiveintermediate(O-acylisourea).TheproducedO-acylisoureacanbeeasilydisplacedbynucleophilicattackfromtheprimaryaminogroupsinthereactionmixture.However,thisintermediateisunstableandhydrolyzedinaqueoussolutions.Inordertopreventtheintermediatehydrolysis,sulfo-NHS(N-hydroxysulfosuccinimide)isaddedtoEDCtoproduceasignificantlymorestableandmoresolubleactiveintermediate(NHSester).
Consequently,theimmunoliposomesarepreparedbyatwo-stepcouplingprocedure:first,activatingthefreecarboxylgroupofthelinkerlipidincorporatedintheliposomeswithEDCandsulfo-NHS,andthencovalentlyconjugatingtheantibodiestothelipidsthroughdisplacementofsulfo-NHSgroupsbyantibodyamines,asdepictedbelow.EDC/sulfo-NHScouplingreactionsarehighlyselectiveandhighlyefficient,andtheBIOLOGicalactivityoftheproteinorpeptideispreserved.
Immunodox®-CarboxylicAcidisaPEGylatedproduct.Forotheraminereactive(PEGylatedandnon-PEGyalatedproducts)andalsoImmunodox®productssuitableforothertypesconjugationmethodsseehere.
FormulationInformation
Immunodox®-CarboxylicAcid(PEGylated)
| LipidComposition | Concentration(mg/ml) | Concentration(mM) | MolarRatioPercentage |
|---|---|---|---|
| Total | 15.89mg/ml | 21.58mM | 100 |
| HydrogenatedSoyPC | 9.58 | 12.22 | 57 |
| Cholesterol | 3.19 | 8.25 | 38 |
| DSPE-PEG(2000) | 2.5 | 0.89 | 4 |
DSPE-PEG(2000)-CarboxylicAcid | 0.62 | 0.22 | 1 |
| Buffer,LiposomeSizeandEncapsulatedDrugConcentration | Specification |
|---|---|
| Buffer | PhosphateBufferedSaline |
| pH | 6* |
| LiposomeSize | 100nm |
| EncapsulatedDoxorubicin | 2mg/ml(3.45mM) |
| *InordertohavehighlyefficientactivationreactionwithEDCandSulfo-NHS,pHofPBSbufferwasadjustedto6. | |
ConjugationProtocol
MaterialsandEquipment
Inordertoconjugatetheamineonyourantibody, proteinorpeptidetoImmunodox®-CarboxylicAcid(PEGylated)liposomesyouwillneed:
- EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride).Thesolutionshouldbemadefreshmomentsbeforeuse.
- Sulfo-NHS(N-hydroxysulfosuccinimide).Thesolutionshouldbemadefreshmomentsbeforeuse.
- Sephadex®spincolumn.SephadexsizeexclusionspincolumncanbeusedforseparationofliposomesformfreeEDC(MW:191.70).SinceEDCisbeingseparatedfromlargeliposomeparticlesthenanysizesofSephadex®spincolumnsuchasG-10,G-15,G-25,G50canbeused.However,keepinmindthatyouwilllosealargepercentageofyourliposomesonthespincolumn.Alternatively,insteadofremovingtheEDCbyspincolumnyoucanquenchitbyusing2-mercaptoethanol.
- 2-Mercaptoethanol.ToquenchtheunreactedEDC,2-mercaptoethanolisaddedtoformastablecomplexwiththeremainingcarbodiimide.The2-mercaptoethanolmightnotbenecessaryifyouprefertocleanupyourliposomefromfreeEDCusingaspincolumn.
- Float-A-Lyzer®withaproperMWCOthateasilyallowsthecleanupofyourliposomeconjugatedligandfromfreeandnon-conjugatedprotein,peptideorantibody.YouneedtomakesurethattheMWCOisbelow1,000,000dalton.At1,000,000dalton,theporesizeonthedialysismembranegetscloseto100nmandthereforeyourliposomescanbedialyzedout.Youcannotusedialysiscassettesblindly.Pleaseunderstandthetechniquebeforeusingeitherspincolumnordialysiscassette.IfyoudonotusethecorrectMWCO,youcanloseyourentireprep.Forthisprotocol,werecommendMWCOof300,000dalton.
PreparationMethod
Thetwo-stepprotocolincludestheactivationofcarboxylgroup-containingliposomeswithEDC/sulfo-NHS,andsubsequentconjugationwiththeaminegroupontheproteins,peptidesorantibodies:
- Inordertoactivatethecarboxylgroupsontheliposomes,EDCandsulfo-NHSshouldbeaddedtotheliposomes.ThetotallipidconcentrationinImmunodox®-CarboxylicAcid(PEGylated)is22.45mM.1%molofthelipidinliposomescontainsPEG-COOHgroupandonlyhalfofthemareexposedtotheoutsideoftheliposomes,whichisequalto0.11mMofreactiveconjugablelipid.For2mlvolumeliposomethisisequalto2.20×10-7 mol,andfor5mlvolumeliposome,thisisequalto5.50×10-7 molofPEG-COOH.Add10-foldmolarexcessofEDCand25-foldmolarexcessofsulfo-NHStoImmunodox®-CarboxylicAcid(PEGylated).Toaidinaliquotingthecorrectamountofthesereagents,theymaybequicklydissolvedinthePBSbufferatahigherconcentration,andthenapropervolumeimmediatelyPipettedintotheproteinsolutiontoobtainthepropermolarquantities. Mixwellandallowthereactiontoproceedfor15minatroomtemperature.
- Beforeaddingtheprotein,peptideorantibody,removetheexcessEDCeitherusingasizeexclusionspincolumn,suchas Sephadex®spincolumn orthroughquenchingby2-mercaptoethanolata20mMfinalconcentration.Additionof2-mercaptoethanolwillnotimpacttheliposomes.
- Dissolvetheprotein,peptideorantibodyat1-10mg/ml,dependingontheantibody,proteinorpeptide,inPBSorotheramine-free,carboxylatefreebuffer,pH7-8.
- Addtheprotein,peptideorantibodytotheEDC/Sulfo-NHSactivatedImmundox®-CarboxylicAcid(PEGylated)liposomes.Themolarratioofthereactivecarboxyllipidtoprotein,peptideorantibodyispreferedtobearound10:1.Thetotallipidconcentrationinourliposomesis22.45mM.1%molofthelipidinliposomescontainsPEG-COOHgroupandonlyhalfofthemareexposedtotheoutsideoftheliposomes,whichisequalto0.11mMofreactiveconjugablelipid.Fora2mlvolumeliposomethisisequalto2.20×10-7 molandfor5mlvolumeliposomesthisisequalof5.50×10-7 molofPEG-COOH.Youwillneedtocalculatethetotalmolofyourpeptide,proteinorligandinyoursolutionandadd1:10molarratioofligandtolipid. Mixwellandallowtoreactfor2hatroomtemperature.
- Removethenon-conjugatedprotein,peptideorantibodyfromtheimmunoliposomesbydialysis.Wepreferdialysistosizeexclusioncolumns.Dialysisisamuchslowerprocessbuttherewillbeminimumlossofimmunoliposomesaftertheprepiscleanedfromnon-conjugatedprotein/peptide/ligand.Spincolumnsaremuchfaster;however,youcaneasilyloseover50%oftheliposomesonthespincolumn.Werecommendusing Float-A-Lyzer® dialysiscassettefromSpectrumLabs.YouwillneedtochooseacassettewithproperMWCOdependingontheMWofyourprotein,peptide,antibodyorantibodyfragment. NOTE: Ifyoudecidetouseadialysiscassette,youwillneedtomakesurethattheMWCOisbelow1,000,000dalton.At1,000,000dalton,theporesizeonthedialysismembranegetscloseto100nmandtherefore,yourliposomescanbedialyzedout.Youcannotusedialysiscassettesandspincolumnsblindly.Theycomeinvarioussizesandyouneedtochoosethecorrectsizewisely.Dialyzetheimmunoliposomesolutionin1literofPBSatpH7.4for8hours.Changethedialysisbufferwithafresh1literofPBSandletisdialyzeforanother8hours.Afterthisstep,yourcleanedupimmunoliposomeisreadytobeused.
LiposomeParticleCalculator
Immunodox®liposomesareunilamellarandsizedto100nm.Themolarconcentrationofliposomeis21.58mM.Byhaving liposomediameter(nm)andlipidconcentration(µM),youcancalculatethetotalnumberofthelipidsinoneliposomeandthenumberoftheliposomesinonemilliliteroftheliposomesolution.Tousethecalculatorclick here.
TechnicalNotes
- Doxorubicinisafluorescentmoleculewithλex470nmandλem585nm.Ifyouareusingafluorescenttagonyourantibodyorligand,youneedtomakesurethattheywillnotinterferewitheachother.
- EDCandsulfo-NHSshouldbepreparedimmediatelybeforeuseandkeptatroomtemperature.
- TheactivationreactionwithEDCandSulfo-NHSismostefficientatpH4.5-7.2,andEDCreactionsareoftenperformedinatpH4.7-6.0.Forthisreason,wehaveformulatedtheliposomesinPBSbufferandadjustedthepHto6.
- ReactionofSulfo-NHS-activatedmoleculeswithprimaryaminesismostefficientatpH7-8,andSulfo-NHS-esterreactionsareusuallyperformedinphosphate-bufferedsaline(PBS)atpH7.2-7.5.
- Trisbuffershouldneverbeusedinanystepoftheprocesssinceitcontainsamine.
- IfyouareusingaligandorpeptidethatishydrophobicthenitisrecommendedtosolubilizeitinDMSOorDMFandthenaddthebuffertoit.Itisrecommendednottousemorethan5%volumeofDMSOorDMFinthesolution.DMFandDMSOarebothcompatIBLewithliposomesandtheyarealsomiscibleinwater.Otherorganicsolventsuchasethanolandchloroformarenotcompatiblewithliposomesandwillcausetheliposomestolyse.IfyouendupusingDMSOorDMFthenaftertheconjugationreactionisdone,youneedtoremoveDMSOandDMFfromtheliposomes.InordertodothatyouneedtouseadialysiscassettethatismadefromREGENERATEDCELLULOSEMEMBRANE.NOTE:NotallmembranesarecompatiblewithDMFandDMSO.WerecommendusingaSlide-A-Lyzer™MINIDialysisDevicewithMWCOof2KmadefromregeneratedcellulosemembranemanufacturedbyThermofisher.AfterDMSOorDMFisremoved,youcanuseFloat-A-Lyzer®dialysisdeviceforthefinalstepofcleaninguptheprep.
- Liposomesshouldbekeptat4°CandNEVERbefrozen.
Database
Directlinktothedatabasepageforeasynavigation:ImmunoliposomesConjugationDatabase
Appearance
Immunodox®-CarboxylicAcidisaredtranslucentliquidmadeofnanosizeunilamellarliposomes.Usuallyduetothesmallsizeofliposomesnosettlingwilloccurinthebottomofthevial.Theliposomesarepackagedinanambervial.
EducationalVideo
Ordering/ShippingInformation
- Allliposomebasedformulationsareshippedonblueiceat4°Cininsulatedpackagesusingovernightshippingorinternationalexpressshipping.
- LiposomesshouldNEVERbefrozen.Icecrystalsthatforminthelipidmembranecanrupturethemembrane,changethesizeoftheliposomesandcausetheencapsulateddrugtoleakout.Liposomesinliquidformshouldalwaysbekeptintherefrigerator.
- ClientswhoorderfromoutsideoftheUnitedStatesofAmericaareresponsiblefortheirgovernmentimporttaxesandcustomspaperwork.EncapsulaNanoSciencesisNOTresponsibleforimportationfeestocountriesoutsideoftheUnitedStatesofAmerica.
- WestronglyencouragetheclientsinJapan,Korea,TaiwanandChinatoorderviaadistributor.Toughcustomsclearanceregulationsinthesecountrieswillcausedelayincustomclearanceoftheseperishableformulationsifordereddirectlythroughus.Distributorscaneasilyclearthepackagesfromcustoms.Toseethelistofthedistributorsclickhere.
- ClientsorderingfromuniversitiesandresearchinstitutesinAustraliashouldkeepinmindthattheliposomeformulationsaremadefromsyntheticmaterialandtheformulationsdonotrequirea“permittoimportquarantinematerial”.LiposomesareNOTbiologicalproducts.
- Ifyouwouldlikeyourinstitute’sFedExorDHLaccounttobechargedforshipping,thenpleaseprovidetheaccountnumberatthetimeofordering.
- EncapsulaNanoScienceshasnocontroloverdelaysduetoinclementweatherorcustomsclearancedelays.YouwillreceiveaFedExorDHLtrackingnumberonceyourorderisconfirmed.ContactFedExorDHLinadvanceandmakesurethatthepaperworkforcustomsisdoneontime. AllsubsequentshippinginquiriesshouldbedirectedtoFederalExpressorDHL.
StorageandShelfLife
Storage
Immunodox®productsshouldalwaysbestoredatinthedarkat4°C,exceptwhenbroughttoroomtemperatureforbriefperiodspriortoanimaldosing.DONOTFREEZE.IfthesUSPensionisfrozen,theencapsulateddrugcanbereleasedfromtheliposomesthuslimitingitseffectiveness.Inaddition,thesizeoftheliposomeswillalsochangeuponfreezingandthawing.
ShelfLife
Immunodox®-CarboxylicAcidismadeondailybasis.Thebatchthatisshippedismanufacturedonthesameday.Itisadvisedtousetheproductswithin4monthsofthemanufacturingdate.
ReferencesandbackgroundreADIng
1.HermansonGT.Bioconjugatetechniques.Academicpress;2013Jul25.
2.TorchilinV,WeissigV,editors.Liposomes:apracticalapproach.OxfordUniversityPress;2003Jun5.
3.GrabarekZ,GergelyJ.Zero-lengthcrosslinkingprocedurewiththeuseofactiveesters.Analyticalbiochemistry.1990Feb15;185(1):131-5.
4.YanL,CraytonSH,ThawaniJP,AmirshaghaghiA,TsourkasA,ChengZ.ApH‐ResponsiveDrug‐DeliveryPlatformBasedonGlycolChitosan–CoatedLiposomes.Small.2015Oct1;11(37):4870-4.
5. Silva-LópezEI,EdensLE,BardenAO,KellerDJ,BrozikJA.ConditionsforliposomeadsorptionandbilayerformationonBSApassivatedsolidsupports.Chemistryandphysicsoflipids.2014Oct31;183:91-9.
6.HazraM,SinghSK,andRayS.SurfaceModificationofLiposomalVaccinesbyPeptideConjugation.JournalofPharmaSciTech,2011;1(1):41-47.
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2021-08-07
【正品直销，售后保障】（用于体外RNA合成T7逆转录试剂盒）T7 High Yield RNA Transcription Kit是由南京诺唯赞生物科技有限公司代理或销售的Vazyme品牌的试剂，产品来源于南京。南京诺唯赞生物科技有限公司是中国最权威的【正品直销，售后保障】（用于体外RNA合成T7逆转录试剂盒）T7 High Yield RNA Transcription Kit试剂销售服务商之一，在南京等地方销售【正品直销，售后保障】（用于体外RNA合成T7逆转录试剂盒）T7 High Yield RN 查看更多
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2021-07-28
AMV逆转录酶从鸟类成髓细胞白血病病毒（amv）中分离出来的，它拥有双重活性：1.5 > 3依赖引物的聚合酶活性，可以以RNA或DNA作为模板；2.具有3 > 5Rase H 活性，可以降解RNA/DNA杂合体中的RNA，它需要Mg2+或Mn2+激活。它可用于双脱氧法测定DNA或RNA的序列和以短的RNA为模板合成cDNA。AMV 逆转录酶在37℃-55℃的温度范围内有活性，最适温度为41℃-45℃，在以Tobacco Ve... 查看更多
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2021-09-02
amv逆转录酶,逆转录酶病毒,逆转录酶抑制剂,核苷类逆转录酶抑制剂,m-mlv逆转录酶,端粒酶逆转录酶,hiv逆转录酶,逆转录酶价格,人端粒酶逆转录酶,逆转录酶活性 查看更多
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2020-01-11
TaqMan™ MicroRNA Reverse Transcription Kit Applied Biosystems™ Applied Biosystems® TaqMan® MicroRNA反转录试剂盒提供最佳性能的基于TaqMan® MicroRNAAs... 查看更多
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2021-08-18
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2019-10-18
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15联呼吸道病毒荧光标记PCR检测试剂盒，是一种用来检测疾病的诊断试剂。... 查看更多
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2021-09-20
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【求助】哪些公司的miRNA提取试剂盒和逆转录试剂盒比较好 核酸...123
奈落060762021-07-28
我用的是Fermentas公司的RevertAid First strand cdna synthesis kit,效果很好，逆转录效率也比较一致。100次打折也就1000多
【求助】推荐一下好而不贵逆转录和PCR试剂盒 核酸基因技术 丁香 ...123
sueyvone2021-08-17
本人新手，要做RT-PCR，打算是两步法，不知道怎么选择适合的逆转录试剂盒和PCR盒，求推荐性价比高的盒子，谢谢各位前辈的指导~
有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗123
★啡咖★952017-10-06
对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的，买一个kit看看说明书操作就可以了。推荐两款kit TAKARA和HaiGene，这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除，因此对RNA质量的要求不高。TAKARA的RR047A操作方便，反转录温度为37℃，对于大多数试验来讲是满足要求的。HaiGene的D0401操作要多一个步骤，但其反转录温度是55℃（耐高温的反转录酶），提高了反转录温度使得高GC含量、复杂模板、长mRNA的模板都能有效反转录，因此其反转录效率更高，更能够获得样本中基因的真实表达量。如果后续试验是RealTime PCR、ORF克隆、高GC含量、或者你的待研究基因结构复杂程度未知，还是选用耐高温的反转录酶更理想。对于反转录高手来说，直接购买反转录酶、再购买Rnase Inhibitor自己配制反转录体系就可以了。对于样本量大的课题组来讲，相对还是比较经济的。选择反转录酶时仅需要考虑是否需要耐高温的酶，来克服目的基因的复杂结构就可以了。PROMEGA、TAKARA、HaiGene、 TRANSGEN等品牌的反转录酶性价比还都是不错的。Life、NEB的也不错，银子足的也可考虑，不一一解释了。
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癫痫患儿外周血CD19^+B,CD20^+B淋巴细胞和自然杀伤细胞的检测及...123
萿酱2017-10-01
逆转录一般用罗氏的，目前天根的全式金的也挺好用，还方便。
如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。不需要特别的试剂盒、
如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。不需要特别的试剂盒、
逆转录试剂盒逆转录出来的cDNA是单链还是双链 核酸基因技术...123
列刖2017-10-06
氯仿/，混匀,常温下13000g离心5分钟，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega).离心完毕.离心完毕,剧烈振荡后,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀. 第二日,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;ul) 2ul BSA(10mg/. 吸取上清至另一eppendof管,将昨日沉淀物在4℃;10体积3M的NaAc: 1：一链，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替，同保存的一链产物一起电泳鉴定。 6．将spin column放入一新的离心管中,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存。 8．加入30ul buffer EB;异戊醇： 1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇. 在第二链反应体系中. 反应完成后;10V3M NaAc(PH5.5倍体积无水乙醇; 5，再离心1min是单链cDNA。 3．加入spin column中.2)和2，混匀，加入50ul buffer EB,得到200ul cDNA第二链反应体系。 2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB. 第一链反应完成后; 3;ml) 2,将此体系置于冰上。 PCR纯化试剂盒操作流程; 5．取2ul二链产物,然后75℃灭活10分钟：第3; 4。同时上1kb ladder、cDNA第二链的合成. 加入等体积酚/。二，想合成双链cDNA需要另外操作.5V预冷的无水乙醇: 6ul 10mM dNTP 2ul T4 DNA Polymerase(8,加入等体积氯仿. 离心后。 9．13000rpm离心2min, 37℃反应至少30分钟,干燥沉淀至无乙醇气味,弃上清. 70℃灭活10分钟. 混匀后，待电泳检测，混匀,顺序加入下列试剂(promega)，且二链稍比一链大一些. 稍微离心混匀反应物，13000rpm离心1min，确定双链的大小范围：一,常温下13000g离心5分钟,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA.5小时，静置10min，－20℃沉淀过夜: 1;ul) 总体系为200ul;ul) 10ul DNA Polymerase I(10U/.75ml buffer PE。其余的产物合并,混匀，静置10min: 20ul 10×DNA Polymerase I buffer 6ul 10mM dNTP(自己配制) xul dd H2O 1ul RNase H(2U/,常温下13000g离心5分钟,吸取上清于另一1,加入1/. 注; 8; 2; 7,弃上清,16℃反应2。注; 3。 10．加入1/。 4．加入0，2、双链cDNA末端补平.7U/ 4。 5．13000rpm,上下颠倒几次混匀后。 7．13000rpm离心2min，二链的电泳图是smear.5ml eppendof管中; 6，13000rpm离心1min
pcr试剂盒怎么判别好坏?123
喝马一枝花2021-08-04
如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
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3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
的总RNA提取试剂盒怎么样? 生物科学 论坛学术...123
小King芝2021-07-23
索来宝要用
Fermentas (MBI)反转录试剂盒K1622说明书123
wings_0082021-07-21
有一款RevertAid™FirstStrandCDNASynthesisKit
和RevertAid™HMinusFirstStrandcDNASynthesisKit，FirstStrandcDNASynthesisKit
大家又没有用过，这个公司的酶据说很好啊。
和RevertAid™HMinusFirstStrandcDNASynthesisKit，FirstStrandcDNASynthesisKit
大家又没有用过，这个公司的酶据说很好啊。
逆转录PCR的实验步骤3_丫丫123
夏兮颜01282017-10-06
一、实验器具与材料：1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）7、量筒：50ml、250ml、500ml8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml9、试管架：5ml、1.5ml、20μl10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水11、铝制饭盒：4个12、塑料小饭盒：1个13、大瓷缸：2个14、锡泊纸：一卷15、卷纸：2卷16、三角烧瓶：带盖，稍大二、实验器具的处理与准备1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）（洗净后先泡1‰DEPC过夜，再烤干）3、匀浆器：（包括剪刀、镊子）先洗净后，再高压（不需要泡DEPC）三、试剂配制：1、DEPC水：吸出1ml放在1000ml双蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中静置4小时备用。2、75%乙醇：用无水乙醇DEPC水配，然后放-20℃保存（其中DEPC水需先高压）3、异丙醇：放入棕色瓶中4、氯仿：放入棕色瓶中5、琼脂糖仅供参考
逆转录实验(RT,实验简介,所需材料,操作步骤)范德生物科技公司123
疯子呛诽22021-08-19
人体体温为37度，保持酶活性
逆转录和反转录有什么区别?123
2021-08-12
两者是同一生理过程的不同提法,没有本质的区别,都是遗传信息流动的方向是从RNA到DNA。
逆转录（reverse transcription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。此过程中，核酸合成与转录（DNA到RNA）过程与遗传信息的流动方向（RNA到DNA）相反，故称为逆转录。逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一，需逆转录酶的催化。 逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。人们通过体外模拟该过程，以样本中提取的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成出互补的cDNA，构建cDNA文库，并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一。
逆转录（reverse transcription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。此过程中，核酸合成与转录（DNA到RNA）过程与遗传信息的流动方向（RNA到DNA）相反，故称为逆转录。逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一，需逆转录酶的催化。 逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。人们通过体外模拟该过程，以样本中提取的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成出互补的cDNA，构建cDNA文库，并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一。
...哪些公司的miRNA提取试剂盒和逆转录试剂盒比较好 核酸基因技术讨论...123
liuhua2021-08-07
13楼
加尾法是采用加A酶先对mirna进行加尾，然后再用带oligodt的引物反转录，他的反转录引物是通用的，一次反转录可以获得所有miRNA的cdna，效率高。茎环法是采用特异性反转录引物序列+颈环结构作为反转录引物进行反转录的，一次反转录只能获得一种mirna的cdna，可能有几种一起反转录的，这个我不太清楚一起反转录的效果。然后茎环法的经典即ABI的探针法定量试剂盒。我用过茎环法反转录+染料法定量的，下游引物为通用引物，结果不太好，就现在用的这家的他采用的是双向引物都是特异性的，效果还可以。不知道我说的清楚不，希望能对你有帮助。
加尾法是采用加A酶先对mirna进行加尾，然后再用带oligodt的引物反转录，他的反转录引物是通用的，一次反转录可以获得所有miRNA的cdna，效率高。茎环法是采用特异性反转录引物序列+颈环结构作为反转录引物进行反转录的，一次反转录只能获得一种mirna的cdna，可能有几种一起反转录的，这个我不太清楚一起反转录的效果。然后茎环法的经典即ABI的探针法定量试剂盒。我用过茎环法反转录+染料法定量的，下游引物为通用引物，结果不太好，就现在用的这家的他采用的是双向引物都是特异性的，效果还可以。不知道我说的清楚不，希望能对你有帮助。
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