T4DNALigaseisaligationenzymethatcanbeusedtojoinDNAfragmentsbycatalyzingtheformationofphosphodiesterbondsbetweenjuxtaposed5"phosphateand3"hydroxylterminiindouble-strandedDNAusingATPasacoenzyme.BothbluntandcohesiveendDNAligation,aswellassingle-strandednickrepairofDNA,RNAandDNA/RNA,arepossIBLeusingtheT4DNAligase.
美国AdvancedBioMatrix(简称ABM) www.advancedbiomatrix.comAdvancedBioMatrix(简称ABM)是美国一家著名的生物公司,获得了AllerganInc的授权(Allergan用25年时间不断完善胶原蛋白相关的产品的生产工艺),将Allergan的专业和技术用于蛋白生产与检测,致力于为组织工程、细胞分析及细胞增殖等研究领域提供优质稳定的产品。AdvancedBioMatrix不断丰富已有产品线,目前可为三维细胞培养提供各种胶原蛋白、纤连蛋白、玻连蛋白、水性凝胶、不同粘度与分子量的透明质酸以及低代成纤维细胞等。在美国全部产品授权Sigma销售。AdvancedBioMatrix是组织培养,细胞分析和细胞增殖三维(3D)应用的生命科学领域的领导者。我们的产品被公认为纯度,功能性和一致性的标准。我们在生产,分离,纯化,冷冻干燥,细胞培养和蛋白质测试,粘附肽,附着因子,底物刚性和其他3D矩阵产品方面拥有丰富的专业知识。我们的专业技术和知识正在被用来确保我们的产品质量最高,批次之间一致且易于为我们的研究客户使用。
美国AdvancedBioMatrix是3D组织培养、细胞检测和细胞增殖等领域实验解决方案的佼佼者。AdvancedBioMatrix在分离、纯化、冻干、细胞培养和蛋白检测、多肽粘附、附着因子、基质硬度和其他3Dmatrix 产品开发方面有着丰富的经验。AdvancedBioMatrix的研发经验和专业知识确保其产品可达到最佳质量,并保证产品之间一致性,方便研究客户使用。以下为AdvancedBioMatrix3DMatrices 产品竞争优势:1. 提供高纯度和成分确定的胞外基质;2. 超过1000余篇文献引用PureCol产品,品质非常均一;3. 在3D培养基领域可提供最全面的产品线;4. 唯一可提供特异性刚性有机硅基板的公司(CytoSoft);5. 唯一可提供可溶性丝纤蛋白的供应商(可运用于多种3D培养);6. 如果客户首次接触3D胶原凝胶,AdvancedBioMatrix还是唯一的预制胶原蛋白(PureColEZGel)供应商;
以下产品为AdvancedBioMatrix全球畅销品:1.PureCol 牛源I型胶原蛋白 3mg/ml#5005-100ML2.Nutragen牛源I型胶原蛋白 6mg/ml#5010-50ML3.FibriCol 牛源I型胶原蛋白 10mg/ml#5133-20ML4.VitroCol 人源I型胶原蛋白 #5007-20ML5. 弹性蛋白原 #5052-1MG6.ECMSelectArraykitUltra-36#5170-1EA7.CytoSoft(刚性可变的基底,AdvancedBioMatrix最新添加产品5190-7EA)8. 人III型胶原蛋白 #5021-10MG9. 人IV型胶原蛋白 #5022-5MG10.SilkFibroin溶液 #5154-20ML11.Fibronectin#5080-5MG12.Vitronectin#5051-0.1MG
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
转录的只是插入的片断,怎么会跟模板一样大呢,一般情况下应该比模板小多了。我都是跑电泳,严格来说应该跑变性的;嫌麻烦可以非变性,快速(防止RNA降解)十分钟即可;抛出来的带会有两条,上面大的是模板,下面一条比较亮的是RNA,那么你的转录就 成功了。
PCR第一个步骤如果没记错的话应该叫“变性”, PCR的话是不需要解旋酶的,直接利用DNA的高温变性特性,在高温下,使氢键断开,DNA双链恢复为单链。 (还有解旋酶好像是解除双螺旋的结构,是一种拓扑异构酶,对于氢键的打开没有贡献吧
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBRGreenMix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBRGreen,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBRGreen还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了。推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高。TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度为37℃,对于大多数试验来讲是满足要求的。HaiGene的D0401操作要多一个步骤,但其反转录温度是55℃(耐高温的反转录酶),提高了反转录温度使得高GC含量、复杂模板、长mRNA的模板都能有效反转录,因此其反转录效率更高,更能够获得样本中基因的真实表达量。如果后续试验是RealTime PCR、ORF克隆、高GC含量、或者你的待研究基因结构复杂程度未知,还是选用耐高温的反转录酶更理想。对于反转录高手来说,直接购买反转录酶、再购买Rnase Inhibitor自己配制反转录体系就可以了。对于样本量大的课题组来讲,相对还是比较经济的。选择反转录酶时仅需要考虑是否需要耐高温的酶,来克服目的基因的复杂结构就可以了。PROMEGA、TAKARA、HaiGene、 TRANSGEN等品牌的反转录酶性价比还都是不错的。Life、NEB的也不错,不过性价比一般,不一一解释了。
首先,不否认它比大多数国产的试剂盒做得好,提取的纯度、方便度和量,都还很不错。
其次,它是日本的。so我觉得实验室用用天根的,就非常好了。拒绝日货,从实验室做起。