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Tebu-Bio/BPS/2x Inhibitor Tolerant qPCR Mix/100 ml/221MDX013-100
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Tebu-Bio/BPS/2x Inhibitor Tolerant qPCR Mix/100 ml/221MDX013-100
品牌 / 
Tebu
货号 / 
221MDX013-100
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Productname
2xInhibitorTolerantqPCRMix
Catalognumber
MDX013-100(100ml)
Description
Source
MeridianLifeScience
Productcategory
Genomics
Productsubcategory
PCR
Shipmentinfo
DryIce
NacresCodification
NA.55
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荧光定量PCR详细流程和问题解析123
我就是大仙儿2021-07-28
前一段时间在百度中搜索,发现多年前写的一个关于荧光定量PCR技术的PPT有很多人看过或引用过,考虑到自己作荧光定量PCR工作已经了五年了,做的实验以及解决的问题远比五年前多了,因此利用过年的时间,写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想,无论对错,都是希望对相关的人员有些参考价值。
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。

普通PCR与荧光定量PCR技术区别?
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。

前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。

SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?

从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。

如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。

另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法.
鼓励性加分
实时荧光定量PCR(qPCR)用什么试剂盒比较好加入荧光标记探针,巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起,借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数,做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数,CT值越小,模版DNA的起始拷贝数越小。因此,利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
很想看看他们公司成熟的技术到底是什么样子的,不知道哪里可以看到呢?
有谁知道国内H-FABP试剂盒的生产厂家?
新研发出一个科研用试剂盒,但不清楚需要怎样做才能够生产和销售。只知道该试剂盒不应用于临床,所以不需要CFDA审批。了解相关内容的,请详细说明。另外,政府的哪个部门可以咨询相关信息?
请问有没有必要常规进行HPV检测,如果要检测,用那种试剂盒比较好呢?

荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。

普通PCR与荧光定量PCR技术区别?

简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。

前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。

SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?

从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。

如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。

另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法.


做基因检测多少钱?就是想知道有什么问题要怎么做。
genesig q16便携式实时荧光定量PCR仪是Primerdesign公司设计的一款革命性实时荧光定量PCR仪器,专为Primerdesign的genesig系列的多达超过400种病原体检测试剂盒或食品安全检测试剂盒产品打造。这款仪器可以同时检测16个样品,设计它的目的就是要做到价位超低,让任何机构和个人都可以负担起,操作超简单,任何机构和个人都能使用。
迪澳生物的沙门氏菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)是不是只能在恒温荧光检测仪上使用?
多重荧光pcr 最多标准 123
挥剑7012021-07-31
这个看你自己的设置。qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道。理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照。那么可以做94*4=376个。当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等。具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个试剂盒可以同时检测54种突变。
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