实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosys-terns公司推出。与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR产物污染、自动化程度高、能对起始模板进行准确定量等特点。
实时荧光定量PCR的反应原理:实时荧光定量PCR反应是在常规PCR的-对引物之外,加入-个两端带有荧光标记的寡核什酸探针。在探针完好的状态下,5‘端报告荧光基团的激发光被3‘端的淬灭荧光基团所抑制。PCR反应过程中,随养链的延伸,Tao酶沿养DNA模板移动到荧光标记探针的结合位置,发挥它的5'-3‘外切核酸酶活性,将荧光探针切断,释放出报告荧光基团的荧光信号,每合成-个模板,-个报告基团的信号释放,被释放的报告荧光基团的数目和PCR产物是-对-的关系。通过定量PCR仪定时动态监测每-循环,可以得到样品实际扩增曲线,找到PCR扩增的对数期。软件通过标准品和待测品的对数期比较,得到每-样品模板DNA的起始拷贝数。
金思德生物:实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)的反应原理网址:http://www.genesd.net.cn/hynews/128.html