D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐
版本号：20140520
D-Luciferin,SodiumSaltD-荧光素钠盐
荧光素（Luciferin）是常见生物性发光报告基因荧光素酶（luciferase）在体内成像的底物。作用原理是荧光素酶在Mg2+和O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光(bioluminomescence)。然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10mg/ml）和DMSO（50mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够
非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。
应用：
1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；
2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；
结构式：
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货号：GM-040611-100mg,GM-040611-500mg,GM-040611-1g,GM-040611-5g,GM-040611-10g
CASNo：103404-75-7
分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O
分子量：320.32
化学名称：(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic
acidsodiumsalt;D-Luciferinfirefly,sodiumsaltmonohydrate;
纯度：R99%
外观：淡黄色的粉末
溶解：溶于水（高达100mg/ml）
保存：-20℃避光保存
使用方法：
1体外生物发光检测
1）1g的D-LuciferinFirefly,freeacid溶解入33.3ml的无菌水中，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后用0.2µm滤膜过滤，然后立即使用或分装于-80℃避光保存，避免反复冻融，冻存的储存液可保存1年。
注：D-LuciferinFirefly,freeacid储存液也可用弱碱（如NaOH，KOH溶液）或DMSO溶解，用碱性pH溶液去溶解本品，如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新?酸性溶液来中和，调整至所需的pH环境。
2）用完全培养基将储存液按1:200稀释（储存液：完全培养基1:200），配制成工作液（终浓度150µg/ml）。
3）成像前，去除培Luciferase表达细胞中的培养基，加入1×荧光素工作液37℃孵育5min,然后进行图像分析。
4）工作液应在使用后丢弃。
2体内活体成像检测
1）1g的D-LuciferinFirefly,freeacid用66.6ml的DPBS(,w/oMg2+和Ca2+)配制D-荧光素工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-80℃避光保存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光，冻存的储存液可保存1年。
注：D-LuciferinFirefly,freeacid储存液也可用弱碱或DMSO（w/oMg2+）配置。
2）每只老鼠的注射量取决于老鼠的体重：150mg/Kg。
3）注射入体内10-15min后，进行成像分析。
注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。
注意事项：
1）本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后，-80℃分装保存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。
2）注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。
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