高麦芽糖浆生产工艺研究--《西部粮油科技》1994年01期
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脂质体或许大家更熟悉,它的历史已超过20年,是最受欢迎的体外导入载体。脂质体结合或包围核酸,进而被细胞吸收。Invitrogen公司的脂质体Lipofectin、Lipofectamine、Lipofectamine 2000已畅销十余年。脂质体还是携带小分子RNA进入细胞的有力武器。Ambion(现属于生命科技公司)就开发出siRNA转染试剂-siPORT NeoFX,Invitrogen也修改了阳离子脂质体的配方,专门为小分子RNA推出RNAiMAX。当然,转染不仅仅限于细胞系,许多研究人员将他们的目光投向体内转染。一些生物公司如Polyplus-transfection、Altogen Biosystems等利用脂质体或可生物降解的聚合物作为载体,将DNA片段或siRNA导入体内。然而,它们都不是理想的载体。脂质体的导入效果虽比聚合物要持久,但它可能引起更多的免疫反应,这也不是研究人员所期望的。也正是这些不足,导致了近几年纳米颗粒的出现。2007年,Sigma-Aldrich推出了N-TER纳米颗粒siRNA转染试剂,让siRNA结合在纳米颗粒的表面,通过N-TER肽段导入体内。在RNAi研究领域,越来越多的研究人员开始对高通量的筛选感兴趣。瑞典Cellectricon公司也注意到这一点,他们认识到转染是RNAi筛选中的主要瓶颈之一,急需一种高通量的转染方法。于是他们花了两年的时间,开发出第一台全自动的转染系统-Cellaxess HT电穿孔仪。这台仪器能够自动移液,自动在细胞中加入siRNA,自动将移液吸头转换成电穿孔元件,并进行电穿孔,最后加入细胞培养基进行复苏。Cellaxess HT每天能转染50000个孔。蚂蚁淘之前介绍过的Nucleofector核转染系统也是类似的电穿孔仪器,它能够对96孔板进行转染。说到底,转染的目标其实很简单,就是用最少量的DNA或RNA去转染最多的细胞。当然,还要尽量减少或避免对细胞的毒性、脱靶效应和免疫反应。别看这个目标简单,实现起来还真不容易。无论是试剂还是仪器,都有需要改进的地方,同时,新技术也在不断萌芽。也许在不久的将来,转染将不再是实验中的瓶颈,轻轻松松就能实现。Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。 Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。 Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN ®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。 PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学\"杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒:公司:www.altogen.com
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