BellBrook Labs 的 PRMT4 证明敏感甲基转移酶检测成功 / 星期四，2018 年 10 月 11 日 / HTS 检测发表在《表观遗传学》上 组蛋白甲基转移酶 (HMT) 在许多疾病中发挥着关键作用。组蛋白甲基化失调和随后的表观遗传状态改变可导致基因表达模式，从而驱动多种癌症、[1] 子宫内膜异位症、[2] 骨质疏松症、[3] 骨关节炎和类风湿性关节炎、[4] 心血管疾病、[5]和自闭症，[6] 仅举几例。有鉴于此，高通量药物发现筛选需要一种不限于检测单一甲基化底物的 HMT 活性全局测定方法。这可以通过检测 S-腺苷-L-高半胱氨酸 (SAH) 来实现，SAH 是在 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 在 HMT 催化反应中充当甲基供体时产生的。 [7]但存在技术障碍。检测必须足够具体以区分 SAH 和 SAM，并且方法必须足够灵敏gh 以适应 HMT 的缓慢反应性。最近，BellBrook Laboratories 的科学家将 AptaFluor® 甲基转移酶测定法与其他两种市售测定法进行了比较，以研究 HMT 蛋白精氨酸 N-甲基转移酶-4 (PRMT4)，也称为辅激活剂相关精氨酸甲基转移酶 1 (CARM1)。最近的几项研究表明，PRMT4 通过上调并与癌症相关转录调节蛋白 NAC1 相互作用，在卵巢癌的进展中发挥重要作用。[8],[9]AptaFluor 甲基转移酶检测使用 SAH 感应 RNA 适体，或\"核糖开关”，以纳摩尔亲和力和精细的选择性结合SAH。通过工程化的分裂适体传感器可以进行检测，该传感器将 SAH 结合转导为正时间分辨福斯特共振能量转移 (TR-FRET) 信号。改良的 SAH 核糖开关可区分 SAH 和相关核苷酸，包括 SAM，从而可以明确检测 SAH 和相关核苷酸。SAH 可能在存在过量 SAM 的情况下发生。用于比较的另外两种高通量筛选兼容测定法使用带有 HTRF® 读数的免疫检测或带有发光读数的偶联酶测定。虽然所有三种测定法均检测到 PRMT4 活性，但在 2-使用 200 nM SAM 进行小时反应，只有 AptaFluor 检测能够使用显着更少的 PRMT4 (EC50 = 2.8 nM) 进行检测，因为与其他两种方法相比，其灵敏度高 20 倍。在涉及高容量筛选和高亲和力抑制剂剂量反应测量的工作中，需要较少量的酶具有相当大的价值。这种更高的灵敏度还支持在低 (200 nM) 和高 (2 μM) SAM 浓度下较低的输入酶需求。PRMT4 抑制剂筛选的意义很有趣。最近的一项定量质谱研究分析了乳腺癌细胞系中的 PRMT4 底物，鉴定出 130 多种底物，其中许多已知有助于但对癌症的发生和进展有影响。[10]显然，识别和评估 PRMT4/CARM1 抑制剂的能力需要灵敏、稳健且可重复的检测策略。根据美国癌症协会的数据，晚期（IV 期）浸润性上皮性卵巢癌的 5 年生存率目前非常低，仅为 19%。 [11]面对如此严峻的统计数据，对能够加速药物发现的技术的需求是显而易见的。-Robyn M. Perrin 博士在此处查看海报：使用生理 SAM 和 AptaFluor 甲基转移酶检测对 PRMT4 进行灵敏检测参考文献[1] Ma F，张春. 2016.组蛋白修饰酶：新型疾病生物标志物和检测开发。专家修订分子诊断。 6（3）：297-306.[2] Colón-Caraballo M 等人。 2018.组蛋白甲基转移酶抑制对子宫内膜异位症的影响。生物再现。 99(2):293-307.[3]高Y，葛文.2018。组蛋白甲基转移酶DOT1L抑制破骨细胞生成并预防骨质疏松是。细胞死亡疾病。 9(2):33.[4]何D，等人。 2018. OA 和 RA 患者滑膜活检中 DOT1L 增加。临床风湿病。 37（5）：1327-1332.[5]江德斯，等。 2017.有前景的心脏病治疗药物：组蛋白甲基转移酶抑制剂。国际心脏杂志。 239:6。[6] Katoh M. 2016。具有典型 SET 结构域的组蛋白甲基转移酶的突变谱和 EZH2 靶向治疗。表观基因组学。 8(2):285-305.[7] Zeng H, Xu W. 2015。组蛋白甲基转移酶的酶法测定。见：表观遗传技术应用，学术出版社，333-361。[8]中山 N 等人。 2018.癌症相关转录调节蛋白 NAC1 与 CARM1 形成蛋白复合物，促进卵巢癌进展。肿瘤靶标。 9(47):28408-28420.[9]张 R、Fukumoto T、Magno E. 2018。卵巢癌中的 SWI/SNF 复合物：机制见解和治疗意义。摩尔癌症研究中心。 [印刷前的 Epub][10] Shishkova E 等人。 2017. CARM1 底物的全局图谱定义了酶我的特异性和底物识别。纳特·康姆. 8：15571。[11]按阶段划分的卵巢癌生存率，美国癌症协会，2018 年 10 月 8 日访问。 https://www.cancer.org/cancer/ovarian-cancer/detection-diagnosis-staging/survival-rates.html 标记为：AptaFluor SAH甲基转移酶测定，甲基转移酶接下来您可以阅读的内容网络研讨会：靶向参与先天免疫反应的激酶网络研讨会音频/幻灯片：筛选染色质修饰酶的工具[网络研讨会]使用 Transcreener ADPR® 检测靶向 DNA 损伤修复以进行药物发现类别公司新兴目标表观遗传学 HTS 检测先天免疫神经退行性疾病新闻产品资源Suc cess Stories未分类最近的帖子Transcreener ADP2 检测有助于揭示致癌 PIK3CA 突变的机制PIK3CA 基因编码 110 kDa 催化...靶向 DDX5 抑制剂来对抗癌症和病毒感染DDX5（Dead-Box 5 或 p68）是家族成员...[网络研讨会]目标使用 Transcreener ADPR® 检测进行 DNA 损伤修复以进行药物发现对博士的 DNA 损伤修复途径感兴趣...Transcreener® ADP2 检测可精确测量功能性 MAPK14 停留时间图宾根大学的研究人员使用 T...DDX1：一种多功能 RNA HelicaseDDX1 (Dead-Box Helicase 1) 属于 DEAD-...ArchivesSelect 月份 2023年6月 2023年5月 2023年4月 2023年2月 2023年2月 2023年1月 2022年11月 2022年10月 2022年9月 2022年8月 2022年7月 2022年6月 2022年5月 2022年4月 2022年3月2022年是如此2020年 2020年3月 2020年2月 2020年1月 2019年12月2019年11月 2019年10月 2019年9月 2019年8月 2019年7月 2019年6月 2019年5月 2019年4月2019年3月 2019年1月 2018年12月 2018年11月 2018年10月 2018年9月 2018年8月 2018年5月 2018年3月 2018年2月 2018年1月 2017年12月 2017年11月 2017年10月 2017年9月 2017年8月 2017年6月 2017年5月 2017年5月 2017年3月2017年 2017年2月 2017年1月 2016年12月 2016年11月2016年10月 2016年9月 2016年8月 2016年6月 2016年5月 2016年4月 2016年3月 2016年2月 2016年1月 2015年12月 2015年10月 2015年9月 2015年8月 2015年7月 2015年6月 2015年4月 2015年4月 2015年3月 2015年1月2015年 11月 2014年10月 2014年8月 2014年7月2014年6月 2014年5月 2014年4月 2014年3月 2014年2月 2014年1月 2013年12月 2013年11月 2013年10月 2013年8月 2013年5月 2013年4月 2013年1月 2012年10月 2012年9月 2012年5月 2012年5月 2012年4月 2012年3月 2012年1月2012年10月 2011年6月 2011年4月 2010年12月2009年11月2009年7月 2009年6月 2008年8月 2008年8月 2008年7月 2008年5月 2008年2月 2007年12月 2007年11月 2007年9月 2007年1月 2007年12月 2006年12月 2006年10月 2006年3月 2005年7月 2005年4月 2005年7月 2004年5月 2004年1月2004 贝尔布鲁克实验室 1232 Fourier Drive, Suite 115 麦迪逊,威斯康星州 53717 美国(608) 443-2400info@bellbrooklabs.com 版权所有 © 2023 BellBrook Labs |保留所有权利 |隐私政策 |使用条款 | FCOI |网站地图