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美国Biotium EvaGreen Dye染料 20X in water 31000_中国教育装备采购网

2025-11-20

返回突出显示的引文一种新的酶促寡核苷酸合成方法分享文章与同事分享这篇文章。复制链接发送电子邮件加州大学伯克利分校的研究人员在自然生物技术中描述了一种新的酶促寡核苷酸合成方法研究和治疗中使用的大多数寡核苷酸都是使用亚磷酰胺方法合成的。然而，由于这种方法合成的DNA长度限制在~200nt/oligo，而且还会产生有害废物，多年来人们一直在尝试开发一种酶促DNA合成方法。在最近一期的 Nature Biotechnology 中，Palluk 等人。来自加州大学伯克利分校的 Keasling 实验室对一种新方法进行了概念验证研究，该方法涉及将核苷酸可逆地束缚到聚合酶末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 上。TdT 是一种聚合酶，可以将 dNTP 添加到核苷酸的 3\' 端寡核苷酸序列独立的方式。这里的技巧是使用它通过物理束缚 t 在每一轮合成中仅包含一个 dNTP他对核苷酸的酶，阻止另一个核苷酸的添加。他们制造的第一个 TdT-核苷酸偶联物使用了一个 PEG 接头和一个可以用 2-巯基乙醇破坏的二硫键，并且能够将 DNA 引物延伸约 1 个核苷酸。对于下一个版本，他们使用了炔丙基氨基 dNTP 和带有光可裂解键的接头，裂解后在掺入的核苷酸上留下较小的疤痕。他们通过使用 One-Step Lumitein™ UV 对蛋白质和 DNA 进行 FAM 染色凝胶来证明酶-DNA 复合物的形成；光切割复合物后，重叠信号恢复为单独的条带。使用这种类型的缀合物，他们证明可以执行 10 个循环的添加和切割以获得感兴趣的寡核苷酸序列，并且以这种方式合成的 DNA 是可行的PCR 和 NGS 等下游应用。但是，还需要进一步优化以提高错误率和反应时间以便此方法可用于长寡核苷酸的合成。了解有关 One-Step Lumitein™ UV 和其他安全、灵敏的蛋白质凝胶染料的更多信息。返回突出显示的引文淬火 IF 背景允许检测骨髓中罕见的播散性肿瘤细胞 (DTC) 分享文章与同事分享这篇文章。复制链接发送电子邮件努力开发早期检测肿瘤转移的诊断方法，重点是准确检测血液和骨骼中的单个肿瘤细胞骨髓。免疫荧光染色在检测血液中的循环肿瘤细胞 (CTC) 和骨髓中的播散性肿瘤细胞 (DTC) 方面具有重要优势，可对极其罕见的细胞进行多重靶点检测和细胞形态分析。然而，血液和组织中的非特异性荧光背景阻碍了肿瘤细胞的特异性检测，尤其是在含有多种自体荧光细胞类型和组织成分的骨髓中。在最近的一份出版物中，来自约翰霍普金斯大学的 Axelrod 及其同事将组织自发荧光和荧光二抗的非特异性结合确定为主要 s人类骨髓的背景来源。通过使用 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 减少自发荧光，以及 Image-iT® FX 背景抑制剂减少荧光二抗的非特异性结合，他们能够增强染色的特异性，足以检测人骨髓中的罕见模型 DTC使用自动成像软件。人体组织中的脂褐素颗粒具有明亮的广谱自发荧光，在绿色、红色和远红色通道（左）的合并图像中呈现白色。 TrueBlack® 处理淬灭脂褐素荧光（右）。详细了解 Biotium 的 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂和用于阻断非特异性二抗结合的 TrueBlack® IF 背景抑制系统。完整引用 Axelrod, H. D., Pienta, K. J., & Valkenburg, K. C. (2018) ).骨髓播散性肿瘤细胞免疫荧光检测的优化。生物程序行，20(1)，13。https://doi.org/10.1186/s12575-018-0078-5 $\"美国Biotium$ EvaGreen 是一种用于实时定量 PCR （ qPCR ）的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性， EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。首先， EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时， EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号（图 1）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了染料重分布的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 4 ）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到。第二， EvaGreen 的稳定性极强。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反， SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强。 EvaGreen 降低了细胞膜透性，因而比 SYBR Green 1 更加安全（图 6 ）。独立实验室的测试结果显示， EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性。相反，虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制，使其有诱变增强作用。考虑到 PCR 的广泛使用，其安全性应该足够重视。