蛋白质浓度测定（双缩脲法）
实验原理
测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有凯氏定氮法；比色法主要包括双缩脲法、Folin-酚试剂法及 染料结合法；紫外分光光度法等
双缩脲(Biuret)法：在碱性溶液中，双缩脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO—NH2)，或与此相似的基团[如—CH2—NH2，—CS—NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO—NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。与同样处理的蛋白标准液比较，经计算或查标准曲线即可求出血清总蛋白质含量。
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实验试剂
1．6mol/L氢氧化钠溶液
称取氢氧化钠(NaOH，优级纯)240g，用新鲜蒸馏水配制成1L，置室温贮存在密封的聚乙烯瓶里。
2．双缩脲试剂
称取未失结晶水的硫酸铜(CuSQ·5H20) 3.0g，溶于500m1新鲜蒸馏水中，加酒石酸钾钠(NaKC4H4O6.4H2O)9.0g，碘化钾(KI)5.0g，待安全
溶解后，加入6mol/L氢氧化钠溶液100ml，zui后加蒸馏水至1L。室温贮存在密闭的聚乙烯瓶里，约稳定6个月。
3．蛋白标准液
可用商品血清蛋白标准液或定值质控血清为标准。亦可收集混合新鲜血清，用凯氏定氮法标定后，加叠氮钠防腐(叠氮钠的终浓0.5~1.0g/L)，冰冻
保存。
实验设备
恒温水浴箱、722（721）分光光度计、吸管、试管、坐标纸
实验步骤
1. 配制20g／L蛋白标准液如蛋白标准液浓度为70g／L，则取此液2m1，加入新鲜蒸馏水5ml，混匀即成。
2. 按表操作
| 加入物（ml） |
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