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怎样用流式细胞仪对细胞计数
来自 : mayitao

PCRMasterMix说明书

索莱宝公司生产的PCRMasterMix包含三种酶(TaqPfuTaqplus),每种酶对应着两种PCRMasterMix(含染料和不含染料),一共六种PCRMasterMix

Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,其扩增速度约为1-2kb/min。扩增碱基出错率为10-5左右。其产物未端带有A,可直接用于TA克隆。

Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。其扩增速度约为500bp/min左右。其产物为平未端,须加A后才可用于TA克隆。

TaqPlusTaqPfu的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。其扩增速度约为1000bp/min左右。其产物未端带有A,可直接用于TA克隆。 含染料PCRMasterMix反应完后可以直接电泳检测。不含染料的PCRMasterMix反应完后加入上样缓冲液后电泳检测。

货号: 名称:规格:
PC11202×TaqPCRMasterMix(含染料)1ml/1ml×5
PC11502×TaqPCRMasterMix(不含染料)1ml/1ml×5
PC13202×PfuPCRMasterMix(含染料)1ml/1ml×5
PC13502×PfuPCRMasterMix(不含染料)1ml/1ml×5
PC12202×TaqPlusMasterMix(含染料)1ml/1ml×5
PC12502×TaqPlusMasterMix(不含染料)1ml/1ml×5

保存:-20℃保存,有效期12个月,4℃短期保存一周,避免反复冻融。产品简介:索莱宝公司生产的PCRMasterMix包含三种酶(Taq,Pfu,Taqplus),每种酶对应着两种PCRMasterMix(含染料和不含染料),一共六种PCRMasterMix。Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,其扩增速度约为1-2kb/min。扩增碱基出错率为10-5左右。其产物未端带有A,可直接用于TA克隆。Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。其扩增速度约为500bp/min左右。其产物为平未端,须加A后才可用于TA克隆。TaqPlus:Taq和Pfu的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。其扩增速度约为1000bp/min左右。其产物未端带有A,可直接用于TA克隆。含染料PCRMasterMix反应完后可以直接电泳检测。不含染料的PCRMasterMix反应完后加入上样缓冲液后电泳检测。产品组成(2×):20mMTris-HCl(pH8.3)100mMKCl3mMMgCl2500uMdNTPeach0.1UPolymerase/ulddH2O其它稳定剂和增强剂应用举例:1、按下面配制50ulPCR反应体系

Template<1ug 
Primer1(10uM)2ul
Primer2(10uM)2ul
2×MasterMix25ul
ddH2O upto50ul

    2、PCR反应循环设置

94℃3min
94℃30sec(30cycles)
55℃30sec(30cycles)
72℃500-2000bp/1min(30cycles)
72℃5min

3、结果检测:反应结束后,取5ul反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。

 
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