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细胞代谢的主要场所是细胞质基质。
解析：1.细胞质基质（也叫胞质溶胶）是指除细胞器外细胞质的其余部分。细胞质基质是活细胞进行新陈代谢的主要场所。
2.细胞新陈代谢的次要场所是：细胞核、线粒体基质、叶绿体基质等基质。

本人新开展实验，想把荧光标记到细胞上，观察损伤后细胞到损伤部位的转移情况，但目前刚接触实验不明白。
有几个疑问
1：荧光标记到细胞是标记到细胞表面还是细胞质内？
2：荧光应该随着细胞的分化和增殖逐渐消失？是不是分化增殖越快，荧光消失速度越快？
3：有哪些容易操作，成本便宜的荧光物质？
谢谢各位战友

台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。

最近分离肝脏原代细胞，发现分出来的都是细胞碎片，请问最可能的问题出在哪里呢？求指教

相关疾病：卒中一项雷射显微镜技术可替神经科学家解决脑部细胞如何处理能量的纷争﹐并且能解释出脑部在正子造影系统（PET,positronemissiontomography）所出现的影像﹐提供给医师较佳的方式来观察中风(stroke)或阿兹海默症(Alzheimer’sdisease)等脑部损害。

康乃尔大学应用暨工程物理学（AppliedEngineeringPhysics）副教授KarlA.Kasischke等人成功利用多光子显微技术发现脑部神经细胞（neurons）和星状细胞(astrocytes)之间的如何地交互作用来燃烧氧气和葡萄糖进行糖解作用(glycosis)﹐以达到脑部特别能量的需求。其结果已发表于今年七月的《科学》（Science）杂志上。

该研究团队表示﹐他们根据大脑代谢的辅?烟碱醯胺腺嘌呤双核甘酸（NADH,nicotinamideadeninedinucleotide）两种不同能源状态的影像﹐将最具争议性脑细胞能量代谢的星状细胞—神经元乳酸穿梭（theastrocyte-neuronlactateshuttle）假设作确认与再定义。

KarlA.Kasischke说道﹐在过去十年当中﹐科学家们激烈争议讨论﹐被激活的大脑究竟是进行有氧代谢把葡萄糖彻底分解成水？还是进行无氧状态的糖解作用产生乳酸（lactate）？他表示﹐他们的研究已经发现星状细胞糖解作用伴随着神经活化引发神经性氧化代谢（NeuronalOxidativeMetabolism）将这两种目前对立的说法产生一致性并造成两派双赢的局面。由于他们所使用的多光子显微镜可以让NADH产生内生性荧光影像﹐显示出脑神经内早期氧化代谢终究是持续的﹐并且在约10秒后让星状细胞—神经元乳酸穿梭（theastrocyte-neuronlactateshuttle）作脑细胞晚期的活化作用。神经细胞甚至在休息的时候是不断代谢葡萄糖﹐并且当讯号开始穿越神经细胞时﹐代谢葡萄糖的现象会持续表达﹐然后星状细胞会将代谢葡萄糖所得到的乳酸﹐提供出来做为燃料。

目前医师所使用的脑神经影像技术﹐例如功能性磁共振影像（fMRI,functionalmagneticresonanceimaging）和正子造影系统（PET；positronemissiontomography）虽然可分别探测血流和血氧变化﹐提供医师了解大脑功能变化﹐但是在时间和空间的分辨率却无法满足研究人员的需求。而相较之下﹐多光子显微技术却能提供中枢神经系统（CNS；centralnervoussystem）高分辨率﹐3D立体的组织影像﹐强力地帮助研究人员探讨脑细胞代谢途径。

这场十多年来的争论﹐看来各持己见的双方都没有输。不过﹐最重要的意义是﹐多光子显微技术足以提供大脑代谢等研究功能性方面的应用﹐并且提供给医师较佳的方式来观察中风或阿兹海默症等脑部损害。

全文链接：http://www.sciencemag.org/cgi/reprint/305/5680/50.pdf

http://www.proteinlounge.com/Default.aspx
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通常指神经胶质细胞.
神经胶质细胞（neuroglia cell）简称神经胶质（neuroglia ）,广泛分布于中枢和周围神经系统.普通染色只能显示胞核,用特殊银染方法才能显示神经胶质细胞整体形态.神经胶质细胞一般较神经细胞小,突起多而不规则,数量约为神经细胞的十倍.多分布在神经元胞体、突起以及中枢神经毛细血管的周围.神经胶质细胞具有支持.一营养、保护、髓鞘形成及绝缘,并有分裂增殖与再生修复等多种作用.
（－）中枢神经系统的神经胶质细胞
1．星形胶质细胞（astrocyte）是胶质细胞中最大的一种,胞体呈星形,核大呈圆形或椭圆形,染色较浅.胞质内有交织走行的神经胶质丝（neuroglial filament）.由胞体伸出许多呈放射状走行的突起,部分突起末端膨大形成脚板（end foot）,附着在毛细血管基膜上,或伸到脑和脊髓的表面形成胶质界膜（gliolimitan）.星形胶质细胞约占全部胶质细胞的20％.星形
胶质细胞依其分布及结构又可分为两种.
（1）原浆性星形胶质细胞（protoplasmie astrocyte）:分布于中枢神经系统的灰质内,位于神经细胞体及其突起的周围.原浆性星形胶质细胞的突起不规则,分支多而短曲,表面不光滑.胞质内的神经胶质丝少.
（2）纤维性星形胶质细胞（fibrous astrocyte）:分布于白质内,位于神经纤维之间.其突起呈放射状,细长而直,分支少,表面光滑.胞质内有许多交织排列的原纤维,其超微结构是一种中间丝,称神经胶质丝,其内含有胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein GFAP）,用免疫细胞化学染色技术能特异性地显示出这类细胞.
星形胶质细胞含有高浓度的K+,并能摄取某些神经递质（如γ-氨基丁酸）.它通过调节细胞间隙的K+和神经递质浓度,来影响神经元的功能活动.因此,星形胶质细胞对维持神经细胞微环境的稳定和调节代谢过程起重要作用.当中枢神经系统损伤时,星形胶质细胞迅速分裂增殖,以形成胶质瘢痕形式进行修复.

微核是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式，游离于主核之外，大小应在主核三分之一到二十分之一。微核实验：用一定浓度的待测物培养液来培养蚕豆根尖，另外以蒸馏水培养蚕豆根尖做对照。然后用根尖分生区分别做装片，观察各装片的细胞，计算微核率微核率（MCN‰）=某测试样点（或对照组）观察到的MCN数／某测试样点（或对照组）观察到的细胞数×1000‰

heck293细胞，铺完板后，一共七块24孔板。发现有两块板的其中两个孔变黄，然后用脂质体试剂转染质粒（质粒浓度1600ng/ul）后细胞，溶液没有变黄。（一般正常情况下都会变黄）没变黄的孔里的细胞都没了。。。什么原因呢

激素作为信号分子,调节细胞代谢方式主要有：
1.有些激素的受体在细胞膜上，这些激素作用于细胞膜后可以改变细胞膜的通透性。
2.有些激素的受体位于细胞核或者细胞质，通过影响基因的表达来影响靶细胞内酶的活性或酶的数量来调节细胞代谢。

影响转染试验的因素：

1转染试剂跟细胞系不匹配

转染试剂跟细胞系也是讲究配合默契的，使用同一种试剂，不同细胞系转染效率通常不同。但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。

2细胞状态变化

因为有些细胞系是不稳定的，可能随着培养时间的改变，培养条件的不同，不同的选择压力，可能引起不同的克隆选择。因此就算是同一个细胞系，在不同条件下转染能力的差异可能会

很大

（1）转染试剂与细胞不匹配

细胞转染最适合的不是原代细胞，也不是传代很多次的细胞。这是因为细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到对数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。

（2）把握时机

没错！转染也有适当的时机，相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前一天种板。

同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态，如癌细胞数量过多，互相叠加，营养物质耗竭，代谢废物积聚，转染率低下也是很正常的！

因此，一定要在最适细胞密度时转染，才能获得较高的转染率。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。

（3）微生物来捣乱

培养物可被细菌、酵母、真菌、病毒、支原体、甚至其他细胞种类所污染。各种污染都会导致产生错误的结果。

（4）交叉污染

如果同一个实验室同时培养不同种类的细胞，很同意发生“细胞串门”的现象，造成交叉污染。

3转染方法

不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。

（1）血清

转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候，最好不要换液，不要打扰细胞，让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话，会引起未转染的细胞疯狂生长。那么，什么是最佳时机呢？在20%的细胞变圆的时候，就是加血清的最佳时机。

不过要特别注意：血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物，对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响细胞生长，因此也会影响转染效率。新加培养基的预热对细胞转染很有帮助。

（2）DNA质量

DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术（如脂质体等）基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。

4载体构建

转染载体的构建（病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结果。因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

所以转染用的质粒首先要保证数量，一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质，也会影响转染效率。这个时候，就应该对质粒进行纯化和浓缩。

以上就是细胞转染率低的主要原因了，在实验过程中有没有遇到什么棘手的问题呢，欢迎留言讨论

腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低产出，(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5)，排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中，rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外，有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。