
QuantiChrom™ Copper Assay Kit
- Product Overview
- Product FAQ
- Product Citations
- Assay Service
Application
- For quantitative determination of copper(II) ion and evaluation of drug effects on Cu metabolism.
Key Features
- Sensitive and accurate. Linear detection range 7 μg/dL (1.0 μM) to 300 μg/dL (47 μM) copper in 96-well plate assay.
- Simple and high-throughput. The simple procedure can be readily automated as a high-throughput assay in 96-well plates for thousands of samples per day.
- Improved reagent stability and versatility. The optimized formulation has greatly enhanced reagent and signal stability. Cuvet or 96-well plate assay.
Method
- OD359nm
Samples
- Biological, environment, food and beverage
Species
- All
Size
- 250 tests
Detection Limit
- 7 μg/dL (1.0 μM)
Shelf Life
- 12 months
More Details
- Copperis an essential trace element. Copper-containing enzymes play important roles in iron and catecholamine metabolism, free radical scavenging, and in the synthesis of hemoglobin, elastin and collagen. Copper is mainly present in caeruloplasmin in the liver. Low levels of copper have been associated with mental retardation, depigmentation, anaemia, hypotonia and scorbutic changes in bone. Levels of copper are key diagnostic indicator of diseases such as Wilson’s disease, microcytic hypochromic anaemia and bone disease due to reduced collagen synthesis. Simple, direct and automation-ready procedures for measuring copper concentrations find wide applications in research, drug discovery and environmental monitoring. BioAssay Systems copper assay kit is designed to measure copper with no or minimal sample treatment. The improved method utilizes a chromogen that forms a colored complex specifically with copper ions. The intensity of the color, measured at 359nm, is directly proportional to copper concentration in the sample. The optimized formulation substantially reduces interference by substances in the raw samples.
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请大神前辈指点指点,已经研三了,实验很不顺利,再这样都要延期的节奏了。请问最近急性分离出来的大鼠心肌细胞很不耐钙,做膜片钳封接不上可能是什么原因造成的?谢谢了!
方式:真核生物的分裂依据过程不同有三种方式,有有丝分裂,无丝分裂,减数分裂。其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种最为普遍的分裂方式,是真核细胞增殖的主要方式。减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。向左转|向右转
有几个疑问
1:荧光标记到细胞是标记到细胞表面还是细胞质内?
2:荧光应该随着细胞的分化和增殖逐渐消失?是不是分化增殖越快,荧光消失速度越快?
3:有哪些容易操作,成本便宜的荧光物质?
谢谢各位战友
细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。检测
1.MTT。
MTT法检测原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan),而死细胞无此功能。用DMSO溶解甲臜后在490nm波长处测定其吸光度值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
MTT法检测细胞增殖算是比较常用的方法了,价格便宜,不过其甲瓒产物不溶于水,需有机溶剂溶解后方可检测,其增加了工作量,同时对结果的准确性产生影响,重复性较差吧。
2.CCK8
CCK8检测原理:CCK8中的主要成分WST®-8能被细胞内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜,生成甲臜的量与细胞数成正比,可间接测定活细胞数量。
相比较于MTT而言,CCK8的灵敏度要更高,其生成的甲瓒产物溶于水,重复性和准确性上要优于MTT法,对于细胞的毒性较小,不过价格也是相比MTT要贵一截。
3.通过标记DNA检测细胞增殖的常用的大概是Brdu和EDU用的比较多。
Brdu是一种胸腺嘧啶核甘类似物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)参入正在复制的DNA中,之后我们通过抗Brdu的抗体与荧光二抗快速检测细胞的DNA复制活性。EDU也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性,类似于一种化学反应吧,而无需抗原抗体结合。
相比较而言,Brdu或者edu更适合用于siRNA、miRNA、小分子化合物及其药物筛选等。同时Brdu或者EDU也适用于小鼠,大鼠及其他动物模型的各种组织器官(血管除外)的细胞增殖检测。关于Brdu和EDU的各自优缺点可以参考下帖。具体问题具体分析吧,目前来看EDU检测越来越普遍吧。关于Brdu检测细胞增殖,一种可以使用免疫荧光通过Brdu-FITC与DAPI双染判断细胞的增殖情况。
一般对于细胞来说都是免疫荧光的常规步骤吧,只是需要一步盐酸进行变性DNA和中和。
1.细胞铺板24孔板或者6孔板。可以进行加药处理细胞
2.加入一定终溶度的BrdU继续培养一定的时间。随后弃去孔内溶液,PBS润洗3次。
3.4%多聚甲醛固定细胞30min,PBS再润洗3次
4.0.1%TritonX-100处理细胞15min后,接着PBS润洗3次
4。接着2MHCl处理30min,再加入0.1M的硼酸中和10min,PBS润洗3次。
5.滴加5%BSA室温封闭30min,弃去液体,滴加1:200稀释的BrdU一抗,4℃孵育过夜。
6.次日,弃去一抗,PBS润洗5次,在避光条件下,滴加1:50稀释FITC标记二抗,室温孵育1h后,PBS再润洗5次。
7.pbs洗5遍,滴加DAPI溶液,室温孵育5到10分钟,PBS洗5遍。
8.荧光显微镜观察。拍照。只是需要注意的是细胞固定这一块吧,如果细胞固定不好的话,细胞容易连在一起而无法分清S期和M期等。同时容易造成细胞碎片吧。
附张失败的图片。
文献中完美的图片:
图片来源:EthanolinducescytostasisofcorticalbasalProgenitors
4.关于EDU,目前一般都是拿试剂盒做的,操作简单方便。步骤相比Brdu而言,少了DNA变性,无需抗体孵育等环节。
如题。以及下面问题:
要检测转基因小鼠(不知道)和正常鼠细胞免疫的改变(T细胞)需要做那些实验?
比利时研究人员发现了一个在癌症转移中的关键步骤。他们的研究显示,可以通过调节巨噬细胞的代谢来阻止癌细胞扩散,而这种调节的关键在于诱导巨噬细胞从形成癌细胞血管的细胞中"偷取"糖分。造成癌细胞周围血管结构更加紧密,由此阻挡癌细胞向其他器官扩散。
这项研究结果发表在了国际顶尖学术期刊《细胞代谢》(CellMetabolism)上。
巨噬细胞属于白细胞的一种,负责清除入侵机体的微生物和有害物质,是免疫系统的重要组成结构。然而,巨噬细胞在癌症发展中却具有一定的推动作用。肿瘤组织具有一群特异性巨噬细胞,在肿瘤血管的形成中起到决定性的作用。通过这种特异性巨噬细胞的作用,导致肿瘤血管通常结构混乱,癌细胞更容易穿过血管间隙逃逸,进入血液,最终入侵其他器官。
研究人员阻断了巨噬细胞中REDD1基因的表达,刺激细胞的糖酵解作用,使得细胞内更多的糖被转化为能量。"肿瘤的葡萄糖供给对人体会形成危害。具体来说,形成血管的细胞由于葡萄糖供应过剩导致生长失控,最终形成一个混乱且不规则的典型肿瘤血管网络。"文章的作者之一MassimilianoMazzone教授说。
"通过改变巨噬细胞的代谢,我们建立起了巨噬细胞和肿瘤血管之间的葡萄糖竞争。最终,肿瘤血管因为失去了葡萄糖过剩的刺激,在肿瘤周围形成更加架构化的屏障,阻挡肿瘤细胞扩散。"
此外,研究人员还试图将这项研究拓展到其他抗癌药物的应用中。"在小鼠中,能抑制癌细胞生长的药物mTOR抑制剂有时会因为阻断了巨噬细胞的糖酵解作用而加速癌细胞扩散。我们希望能利用我们的研究结果来准确预测那些患者对mTOR抑制剂具有抗性。"MassimilianoMazzone教授说。

