- Specification
- Product Description:
- Fluorescent dye derived from trimethine cyanine. Zwitterion, slightly soluble in water and forms stable amide bond with primary amines via carbodiimide activation.
- Storage Instruction:
- Store in the dark at -20°C.
- Note:
- Maximum Excitation/Emission wavelength: 550/566 nm (in CH3OH)
- Chemical Name:
- 2-((1E,3E)-3-(1-(5-carboxypentyl)-3,3-dimethylindolin-2-ylidene)prop-1-enyl)-1-ethyl-3,3-dimethyl-3H-indolium-5-sulfonate
- Chemical Formula:
- C31H38N2O5S
- MW:
- 550.71 g/mol
- Molar Extinction Coefficient:
- 150000 M-1cm-1 (CH3OH)
- Excitation (Max):
- 550 nm (CH3OH)
- Emission (Max):
- 566 nm (CH3OH)
- Recommended Excitation:
- 532 nm Nd:YAG, 532 nm green diode and 543 nm green HeNe.
- Recommended Filter Sets:
- TRITC
- Solubility:
- Dichloromethane, methanol, DMSO, DMF and acetonitrile.Slightly in water.
- Purity:
- ≥ 95%
- Regulation Status:
- For research use only (RUO)
- Datasheet:
Download
- Applications
- Conjugation
- Application Image
- Conjugation
ebiomall.com
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细胞凋亡是细胞程序化死亡的一种，是指细胞在凋亡因子刺激下发生的受基因调控的细胞自杀性行为。本文威正翔禹/缔一生物为您分析什么是细胞凋亡？它与细胞坏死有什么区别？
细胞凋亡存在于正常生理情况下，是在个体发育、多细胞生物体平衡和疾病发生中起重要作用的一种细胞死亡形式。细胞凋亡有别于细胞死亡的另一种方式——细胞坏死(necrosis)。
细胞坏死与细胞凋亡的区别首先在于外观形态上变化不同，坏死的细胞表现为体积胀大，细胞膜失去了完整性，易被染料（如台盼蓝）所透过;而凋亡的细胞则表现为细胞体积变小。
细胞凋亡是一个受基因严密调控的生物过程，而细胞坏死则通常是偶然因素，如受热和药物损伤等引起溶酶体的颗粒内容物释放失控引起;坏死细胞会引发炎症初期的免疫反应，而凋亡细胞在通常情况下并不诱导抗炎症反应。然而，细胞坏死和细胞凋亡的区别也不是绝对的，同一种诱导因素（如局部缺血、H202)可能引发凋亡或坏死，取决于诱导因素的强弱和损伤的严重性。
威正翔禹生物（缔一生物）科技有限公司十多年来（viansaga.com）始终专注于生物医疗、细胞培养、生物制药等方面的技术支持及产品引进开发，是目前国内此领域最为专业的代理公司。主要代理产品澳洲进口AuSBIan血清，支原体污染防治，液体培养基，支原体祛除检测剂，微生物培养基，细胞培养试剂，细胞分离液，动物细胞培养，DNA污染防治，微生物工业品，疫苗检测，生物科研试剂等。
本文转自：威正翔禹/缔一生物官方网站：http://www.viansaga.com/h-col-124.html
细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。检测
1.MTT。
MTT法检测原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan），而死细胞无此功能。用DMSO溶解甲臜后在490nm波长处测定其吸光度值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
MTT法检测细胞增殖算是比较常用的方法了，价格便宜，不过其甲瓒产物不溶于水，需有机溶剂溶解后方可检测，其增加了工作量，同时对结果的准确性产生影响，重复性较差吧。
2.CCK8
CCK8检测原理：CCK8中的主要成分WST®-8能被细胞内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜，生成甲臜的量与细胞数成正比，可间接测定活细胞数量。
相比较于MTT而言，CCK8的灵敏度要更高，其生成的甲瓒产物溶于水，重复性和准确性上要优于MTT法，对于细胞的毒性较小，不过价格也是相比MTT要贵一截。
3.通过标记DNA检测细胞增殖的常用的大概是Brdu和EDU用的比较多。
Brdu是一种胸腺嘧啶核甘类似物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期）参入正在复制的DNA中，之后我们通过抗Brdu的抗体与荧光二抗快速检测细胞的DNA复制活性。EDU也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，类似于一种化学反应吧，而无需抗原抗体结合。
相比较而言，Brdu或者edu更适合用于siRNA、miRNA、小分子化合物及其药物筛选等。同时Brdu或者EDU也适用于小鼠，大鼠及其他动物模型的各种组织器官(血管除外)的细胞增殖检测。关于Brdu和EDU的各自优缺点可以参考下帖。具体问题具体分析吧，目前来看EDU检测越来越普遍吧。关于Brdu检测细胞增殖，一种可以使用免疫荧光通过Brdu-FITC与DAPI双染判断细胞的增殖情况。
一般对于细胞来说都是免疫荧光的常规步骤吧，只是需要一步盐酸进行变性DNA和中和。
1.细胞铺板24孔板或者6孔板。可以进行加药处理细胞
2.加入一定终溶度的BrdU继续培养一定的时间。随后弃去孔内溶液，PBS润洗3次。
3.4％多聚甲醛固定细胞30min，PBS再润洗3次
4.0.1％TritonX-100处理细胞15min后，接着PBS润洗3次
4。接着2MHCl处理30min，再加入0.1M的硼酸中和10min，PBS润洗3次。
5.滴加5％BSA室温封闭30min，弃去液体，滴加1:200稀释的BrdU一抗，4℃孵育过夜。
6.次日，弃去一抗，PBS润洗5次，在避光条件下，滴加1:50稀释FITC标记二抗，室温孵育1h后，PBS再润洗5次。
7.pbs洗5遍，滴加DAPI溶液，室温孵育5到10分钟，PBS洗5遍。
8.荧光显微镜观察。拍照。只是需要注意的是细胞固定这一块吧，如果细胞固定不好的话，细胞容易连在一起而无法分清S期和M期等。同时容易造成细胞碎片吧。
附张失败的图片。
文献中完美的图片：
图片来源：EthanolinducescytostasisofcorticalbasalProgenitors
4.关于EDU，目前一般都是拿试剂盒做的，操作简单方便。步骤相比Brdu而言，少了DNA变性，无需抗体孵育等环节。
不破坏细胞结构，同步动态侦测细胞有氧呼吸，糖酵解OCR/ECA(总或乳酸ECA)；
i.过氧敏感荧光素（或pH敏感荧光素）,Ex340-380/535/Em630-680nm，实时测量线粒体/胞内/胞外重要代谢指标，荧光素为非结构性结合可逆转改变；
ii.可同时或单个测量OCR/ECA或其他参数，不会做成浪费，可采用时间分辨荧光技术可加强系统信噪比
iii.通过两个加药口，可对检测细胞加入适当抑制剂/刺激实时监测细胞对不同毒素作用
【2】信号：信号是数据的电磁编码或电子编码。和数据一样，信号也分为模拟信号和数字信号。模拟信号是指电信号的参量是连续取值的，其特点是幅度连续。常见的模拟信号有电话、传真和电视信号等。数字信号是离散的，从一个值到另一个值的改变是瞬时的，就像开启和关闭电源一样。数字信号的特点是幅度被限制在有限个数值之内。常见的数字信号有电报符号、数字数据等。信号是运载消息的工具，是消息的载体。从广义上讲，它包含光信号、声信号和电信号等。
科学家早在数十年前就已经发现了基础基因密码的存在，即细胞通过转化一串DNA碱基使之成为一个蛋白质的氨基酸。但10多年来，科学家一直在尝试**组蛋白密码——这是一组更加复杂的密码，内嵌在有机体的基因组中。组蛋白是一种DNA环绕在染色体上的蛋白质，通过化学手段调整组蛋白可以调节基因的活动。例如，细胞可以通过将3组甲基原子团附着在一种名为H3的组蛋白的特定位置上，从而关闭基因功能。
但是，若将3组甲基原子团附着在H3的其他位置上，则会产生完全不同的效果，科学家将这种转化称为H3K4me3。细胞通常只会将H3K4me3标记附着在基因组中很短的一段上，但研究者注意到，H3K4me3有时会极大地延展开，进而影响到更多的组蛋白。
为了弄清这些携带H3K4me3标记的组蛋白是否蕴涵某些组蛋白密码，美国斯坦福大学分子遗传学家AnneBrunet和同事追踪研究了20多种细胞类型。他们发现，在不同细胞中，延展后的H3K4me3标记会指向不同位置。研究者可以只依据H3K4me3标记在染色体上的位置辨别细胞的类别，例如肌肉细胞或者肾脏细胞。此外，他们还注意到，H3K4me3标记所指向的通常是对细胞的功能或特性十分关键的基因。
研究者进一步表示，H3K4me3标记之所以能够将各种细胞区别开，实际上是通过一种名为RNA干扰（RNAi）的手段干扰神经前体细胞的运转，而后者可以转化成任意形式的脑细胞。研究者发现RNAi会损害细胞复制和产生神经元的能力，但如果不给基因注入H3K4me3标记或只注入很短片段的H3K4me3标记，则神经前体细胞仍可以正常分解。换句话说，延展后的H3K4me3标记能够长期保持细胞特性。研究者将这一结果在线发表于近日的《细胞》杂志。Brunet指出，找到H3K4me3标记很容易，因此可以很快将之应用于实践，例如癌症诊断。（来源：中国科学报段歆涔）
科学家早在数十年前就已经发现了基础基因密码的存在，即细胞通过转化一串DNA碱基使之成为一个蛋白质的氨基酸。但10多年来，科学家一直在尝试**组蛋白密码——这是一组更加复杂的密码，内嵌在有机体的基因组中。组蛋白是一种DNA环绕在染色体上的蛋白质，通过化学手段调整组蛋白可以调节基因的活动。例如，细胞可以通过将3组甲基原子团附着在一种名为H3的组蛋白的特定位置上，从而关闭基因功能。
但是，若将3组甲基原子团附着在H3的其他位置上，则会产生完全不同的效果，科学家将这种转化称为H3K4me3。细胞通常只会将H3K4me3标记附着在基因组中很短的一段上，但研究者注意到，H3K4me3有时会极大地延展开，进而影响到更多的组蛋白。
为了弄清这些携带H3K4me3标记的组蛋白是否蕴涵某些组蛋白密码，美国斯坦福大学分子遗传学家AnneBrunet和同事追踪研究了20多种细胞类型。他们发现，在不同细胞中，延展后的H3K4me3标记会指向不同位置。研究者可以只依据H3K4me3标记在染色体上的位置辨别细胞的类别，例如肌肉细胞或者肾脏细胞。此外，他们还注意到，H3K4me3标记所指向的通常是对细胞的功能或特性十分关键的基因。
研究者进一步表示，H3K4me3标记之所以能够将各种细胞区别开，实际上是通过一种名为RNA干扰（RNAi）的手段干扰神经前体细胞的运转，而后者可以转化成任意形式的脑细胞。研究者发现RNAi会损害细胞复制和产生神经元的能力，但如果不给基因注入H3K4me3标记或只注入很短片段的H3K4me3标记，则神经前体细胞仍可以正常分解。换句话说，延展后的H3K4me3标记能够长期保持细胞特性。研究者将这一结果在线发表于近日的《细胞》杂志。Brunet指出，找到H3K4me3标记很容易，因此可以很快将之应用于实践，例如癌症诊断。（来源：中国科学报段歆涔）
我转的是7901、7901/DDP两种细胞，前者7901细胞很容易就转上，并且转后，状态良好，可是7901/DDP一转就死，我用的是吉玛慢病毒，转24小时后换液，刚开始一两天，没有异常，但后来细胞慢慢就死了，并且不是漂浮的，很多是贴着壁死，像是瓦解了一样
这是未转时细胞的样子
这是细胞转后，死亡的样子
并且即使是有些细胞未死，细胞后来也变得很脏，感觉有很破碎的细胞碎片
本人实验小白，**园子里大神指点，急，实在不知道怎么回事
