【求助】乳腺癌细胞株SKBR3细胞的冻存方法

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2021-08-01

问题描述：

我养的乳腺癌细胞株SKBR3状态不佳，细胞内含大量粗大颗粒，急死了。重新复苏细胞，结果全军覆灭。几十只都无法复苏成功。着急死了。故在此请教各位老师关于该细胞的冻存方法，是不是有什么特别的？我的冻存方法如下：常规消化离心细胞。冻存液即配即用：培养基：FBS：DMSO=7：2：1。4度放30分钟，-20度2小时，然后放到-80度。我养的另一只乳腺癌细胞MCF-7在此条件下可以成功复苏。复苏时温度38度左右，摇1分钟左右。请问我需要怎么改进？谢谢！如果您有养这株细胞的经验，请指教一二，包括我目前情况的处理方法，谢谢！

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hudingrong

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今天听同学说冻存液不能现配现用，因为DMSO和FBS加在一起要产热。不知是不是这样子？我复苏后培养液中有很多颗粒，因为都漂浮着，我也没分清楚这种颗粒似的东西自己会不会动，反正只有极少极少细胞贴壁，大多数没多久自己就碎了。这种颗粒通过换液就可以减少到几乎没有，所以我觉得不像是污染。怎么都没人回帖呢？是我说得不够清楚，还是真的很少人养过这株细胞？急切盼望您的指导，谢谢！

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forest22939

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血清9：DMSO1，最简单的冻存方法，但是要温度逐渐降低。

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hudingrong

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我们实验室达不到这种要求。只能4度—-20度—-80度。

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cindyr0625

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hudingrong我们实验室达不到这种要求。只能4度—-20度—-80度。这样冻应该也没问题，原来我们也这么冻过，没问题的，不过我们-80度后放入液氮中。如果复苏没有活细胞，再排除了复苏方法错误后，要看看当时冻存时细胞状态怎么样，有些细胞在冻存时状态已经不好了，这样复苏的存活率必然很低