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Gentarget
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SC043-Cas9-Puro
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ThisA549/Cas9 StableCellLineistransformedfromtheA549humanlungcancer cellline,stablyexpressingthenuclearpenetratinghumanizedwild-typeCas9endonuclease.TheCas9enzymeisdrivenbyourengineeredsuperstrongCMVpromoter(suCMV).It alsocontainsthePuromycin antibioticselectionundertheRSVpromoter.seetheexpressioncassettebelowthatintegratedintocellline’sgenome.

SC034-cas9-puro-map

This CRISPRready(Cas9expression)stablecelllinesmakethegenomiceditingeasierthaneverinA549cells.YousimplydeliverthetargetspecificgRNAintotheCRISPRreadycelllineandselecttheknock-outorknock-incellsforyourdesiredtarget.Noneedtodocas9containingCRISPRcloning,andnoworryaboutthehard-to-deliveredCas9constructs.Youonlyneedtogeneratethemucheasierincloning,andmuchsmallerinsizeofthetarget-gRNAconstructs.Gentargetalsoprovideservicestogenerateyourtargetspecific,ready-to-usegRNAlentivirus.PleasecontactusifyouneedtheCRISPRgRNAlentivirusservices.

Soldat: 1vialx(2 x106cells)/vial 

ProductManual.

Cat#SC043-Cas9-Puro

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原代细胞的培养与建系 细胞的来源多样,培养方法也各不相同,凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞 查看更多>
威斯腾生物在发布的CCK8/XTT检测(原代细胞培养、细胞培养、细胞鉴定、RTCA检测 、CCK8/MTT检测、细胞划痕实验、流式分选、Transwell迁移、侵袭实验、细胞克隆、细胞周期/凋亡检测等整体服务) 威斯腾生物,让科研更简单!供应信息,浏览与CCK8/XTT检测(原代细胞培养、细胞培养、细胞鉴定、RTCA检测 、CCK8/MTT检测、细胞划痕实验、流式分选、Transwell迁移、侵袭实验、细胞克隆、细胞周期/凋亡检测等整体服务) 威斯腾生物,让科研更简单!相关的产品或在搜索更多与CCK8/X 查看更多>
                                                            应上海交通大学新华医院博导、中华肝病学会脂肪肝和酒精性肝病学组组长——范建高教授课题组诚挚邀请,齐氏培训团——8年细胞培养工程师,于10.19下午,走进新华医院与部分科研工作者聊了聊细胞培养那些事。                                                           ... 查看更多>
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原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
细胞系(cell line) 是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系,不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。

我目前培养大鼠原代食管上皮细胞,虽然已经分离出来(细胞量很少),但是后期细胞不增殖,3-4天细胞就死掉了。
我用的培养是基础培养基添加一些细胞因子
请问是培养基的问题,还是操作的问题?
如果是培养基的问题,应该添加哪些细胞因子,或者购买哪个牌子的培养基?
在线等,急!!!

细胞很微小,接种进去,都是随机的,我们看不见。有可能两个细胞黏在一起,也有可能分离的很开。

就好像撒一撮芝麻在培养基那么大的地方上,我们不能知道它会怎么落。
原代心肌细胞培养 123
玖柒殷儿00282021-08-06
原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型,被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试,摸索出了一些行之有效的方法,并积累了一些经验,现总结如下:

1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力.因此,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长.大量观测表明,选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.

2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法,前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强,容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,且在新生大鼠心肌组织,以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.

3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩,细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足,细胞聚集成团,无法分清细胞边界,难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散,使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时,应停止消化.

4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触,进而影响细胞对肥大刺激的反应,而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言,应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如,如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测,则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基;
2.关键还是生长因子等的浓度;
3.如果需要的话,需要明胶包被.
动物细胞培养有什么特点?_123
钩距黄堇662017-10-01
原代培养离体时间短,遗传性状和体内细胞相似,适于做细胞形态、功能和分化等研究。一般动物和人的所有组织都可以用于培养,但幼体组织和细胞(如胚胎组织、幼仔的脏器等)更容易进行原代培养。
1,细胞已经分化但不处于生长分裂期的这个阶段称为G0期.癌细胞虽不属于分化细胞,但在密度过大,营养缺乏的条件下也可转入G0期,在一定条件下,又开始增殖.
不知道楼主明白没有,意思是说培养基上的癌细胞可能过密,导致营养缺乏,无法满足生长分裂的需要,所以进入G0期,暂时不生长分裂.
3,MHC基因位于第六号染色体上,MHC存在于人类和哺乳动物的细胞表面.根据MHC所编码的分子结构和功能不同而将其分为1,2,3类?.1,2类分子结构相似,主要功能是向T细胞呈递抗原,是被T细胞识别的重要靶分子.1类存在于除红细胞以外的机体所以细胞膜上,2类分子仅存在于成熟B细胞,一些T细胞和抗原呈递细胞膜上,3类分子不具备上述功能,属于血清蛋白.
现在楼主应该明白了,MHC是不参与抗原抗体特异性结合的,是专门用来呈递抗原的.
原代细胞和细胞系哪个认可度更高
细胞系是不断生长,分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能.体外生长的细胞系用于医疗或科研.实际上,连续细胞系可以用大量次培养基

实验室培养的原代猪肺微血管内皮细胞出现了图中黑色线状类似虫子一样的东西的污染,培养基无明显浑浊变化,细胞形态也正常,更换培养基后这种情况仍然存在,求大神告知这些小东西到底是什么,是否会对细胞造成影响


最近导师给了一个任务,要做关于原代细胞、细胞系课题研究。之前买过中科院的细胞,不仅价格死贵,而且还没得售后服务,真是坑死人,哪家生产细胞的公司在这方面技术比较过硬?
原代培养出来的细胞是原代细胞吧,我们都是直接购买的原代细胞。原代细胞是不能传太多代的,我用的ScienCell原代细胞只传了两代,就迅速做实验了,效果很好呢。
从接种的第一天细胞就是脏脏的~培养液里也是老有黑点~用了双抗,还有两性和泰乐~~~细胞一直在长…但是今天突然发现这种黑色东西,跟细胞不在一个层面~肉眼看皿也没有黑色脏东西~液体也澄清