
Transformedfromhuamnlungcancercellline,A549 bylentiviralsystemwithfireflyluciferase gene.The Luciferase wasundermodifiedCMV promoter. ThePuromycinMarkerwasexpressedunderRsvpromoter.Thecelllinedemonstrateshigh levelofbioluminescence signalviafireflyluciferaseassay.Thefollowingexpresscassettewasintegratedintocellline’sgenome.
Pleaseseedetails in ProductManual.
Soldat: 1vialx(2 x106cells)/vial
Cat#SC043-Luc
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不知道楼主明白没有,意思是说培养基上的癌细胞可能过密,导致营养缺乏,无法满足生长分裂的需要,所以进入G0期,暂时不生长分裂.
3,MHC基因位于第六号染色体上,MHC存在于人类和哺乳动物的细胞表面.根据MHC所编码的分子结构和功能不同而将其分为1,2,3类?.1,2类分子结构相似,主要功能是向T细胞呈递抗原,是被T细胞识别的重要靶分子.1类存在于除红细胞以外的机体所以细胞膜上,2类分子仅存在于成熟B细胞,一些T细胞和抗原呈递细胞膜上,3类分子不具备上述功能,属于血清蛋白.
现在楼主应该明白了,MHC是不参与抗原抗体特异性结合的,是专门用来呈递抗原的.
原代细胞产品专家齐氏生物提醒,原代细胞培养注意事项,供参考:
1、实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验。
2、无菌操作。操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。
3、用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间。
贴块法分离细胞时,注意动作要轻柔,不要伤到细胞组织,组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。
4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
实验室培养的原代猪肺微血管内皮细胞出现了图中黑色线状类似虫子一样的东西的污染,培养基无明显浑浊变化,细胞形态也正常,更换培养基后这种情况仍然存在,求大神告知这些小东西到底是什么,是否会对细胞造成影响
作者:PriCells原生原代
1.原代细胞培养最大优点是:细胞直接来源于机体组织,生物性状尚未发生大的变化,在一定程度上能够反映体内的状态。
2.细胞株和原代细胞不是完全一样。
3.并非每一种组织源性细胞都有相应的细胞株,有些细胞必须养原代,
4.细胞株是来源于原代细胞,原代细胞导入了病毒增殖基因并转变为细胞株,细胞株带有癌变细胞的特点。
5.细胞株的遗传物质已经发生改变,并不再具有接触生长抑制现象。
6.细胞株形态及状态不如原代细胞,相对长时间传代;而原代细胞生长是有限性。
7.细胞株在传代过程中可能发生形态的改变及变异,细胞株没有用原代细胞稳定性。
8.原代细胞的受体能够正确反映体内的生理和病理状态。
9.原代细胞的信号传导信号系统能够正确反映体内的生理和病理状态。
10.原代细胞的蛋白质生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
11.原代细胞的RNA生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
12.原代细胞的DNA生物学和遗传学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
13.原代细胞对外界反应能够正确反映体内的生理和病理状态。
14.原代细胞对体外检测能够正确反映体内的生理和病理状态。
15.原代细胞对毒理和致畸反应能够正确反映体内的生理和病理状态。
16.原代细胞对药物筛选能够正确反映体内的生理和病理状态。
17.原代细胞对个体化药物治疗能够正确反映体内的生理和病理状态。
18.原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上一样,绝对是检测判断、药物治疗最好的实验对象。
19.如在中国进行体外检测和药物研发进行细胞培养,请要用中国人组织源性原代细胞。
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力.因此,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长.大量观测表明,选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法,前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强,容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,且在新生大鼠心肌组织,以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩,细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足,细胞聚集成团,无法分清细胞边界,难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散,使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时,应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触,进而影响细胞对肥大刺激的反应,而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言,应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如,如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测,则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
关于第一问能回答的详细点么?谢谢各位大虾~~

