哪位前辈可以上传一下C57小鼠骨髓间充质干细胞的具体培养步骤
2017-08-27
问题描述：
我是个实验新手，看了很多园子里关于小鼠骨髓间充质干细胞的帖子，好多人都说不好养，希望哪位仁兄能上传一下具体实验步骤，真的万分感谢
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晴天娃娃9607
用户
主要有几个问题想问：1，c57小鼠的周龄选多少合适2，冲洗骨髓腔用的是什么？用多少冲？充多少次？我看有人用Pbs，有人用培养基，有人用专门的液冲？不知哪种好3，全骨髓培养法：用离心吗？4，培养基的配方5，长成百分之多少消化6，消化液的配方，消化时间，步骤？7，传到几代就比较纯了希望哪个高手指点一下，谢谢
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guan9107
用户1.我们用的6-8周的小鼠2.用完全培养基冲就可以3.冲完以后不要离心，拿注射器吹散均匀后就可以
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晴天娃娃9607
用户guan91071.我们用的6-8周的小鼠2.用完全培养基冲就可以3.冲完以后不要离心，拿注射器吹散均匀后就可以谢谢你的指导，请问你们养小鼠骨髓间充质干细胞用的是专门养干细胞的培养基，还是自己配的呢？我这几天看文献，用什么的都有，不知道准备买什么还？还有就是细胞消化时用加EDTA吗？消化时间多少？你们的细胞好养吗？我看园子里都说不好养，还没完全开始，就有点信心不足了
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guan9107
用户展开引用dxy_whlyd493谢谢你的指导，请问你们养小鼠骨髓间充质干细胞用的是专门养干细胞的培养基，还是自己配的呢？我这几天看文献，用什么的都有，不知道准备买什么还？还有就是细胞消化时用加EDTA吗？消化时间多少？你们的细胞好养吗？我看园子里都说不好养，还没完全开始，就有点信心不足了......没用专门的培养基，就是自己配的α培养基加10%sigma的FBS加1%双抗。用0.25%的胰酶消化，消化3分钟，原代可能不好消化下来，就用细胞刮轻轻刮下来。可能是因为有个经验很丰富的师兄一直带着的原因，我感觉没什么特别难养的
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晴天娃娃9607
用户guan9107没用专门的培养基，就是自己配的α培养基加10%sigma的FBS加1%双抗。用0.25%的胰酶消化，消化3分钟，原代可能不好消化下来，就用细胞刮轻轻刮下来。可能是因为有个经验很丰富的师兄一直带着的原因，我感觉没什么特别难养的非常感谢
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晴天娃娃9607
用户dxy_whlyd493非常感谢还想问您一下，首次换液的时间是多少比较合适呢？还有细胞接种密度多少合适？冻存液，用百分之10的FBS百分之10的DMSO百分之八十的DMEM可以吗
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guan9107
用户dxy_whlyd493还想问您一下，首次换液的时间是多少比较合适呢？还有细胞接种密度多少合适？冻存液，用百分之10的FBS百分之10的DMSO百分之八十的DMEM可以吗我们一般是四天的时候半换液，7天全换。冻存液我们一般是按dmso：血清:培养基1:2:7的比例配。接种密度的话我们是按一只小鼠的两条腿接种一个大的培养瓶
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晴天娃娃9607
用户guan9107我们一般是四天的时候半换液，7天全换。冻存液我们一般是按dmso：血清:培养基1:2:7的比例配。接种密度的话我们是按一只小鼠的两条腿接种一个大的培养瓶谢谢你能这么仔细的给我讲解，真的真的特别感谢。
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