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稳转细胞株的筛选
2021-07-28
问题描述:

1、请教各位老师,转染质粒DNA的HepG2及HUH7细胞,如何筛选稳转细胞株
2、有限稀释法有没有protocol?

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yizhe2011
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质粒转染后质粒会有某种抗性,直接相应的抗生素筛选即可
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l小呆
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yizhe2011质粒转染后质粒会有某种抗性,直接相应的抗生素筛选即可谢谢回复可能我没说清楚,我是lipo3000转染,G418筛选,G418筛选浓度已摸索出但是在筛选过程中阴性细胞会掺杂,我想知道大家都是怎么筛选的,具体的有限稀释法又是怎么做的?谢谢!
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yizhe2011
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你细胞数少一点,成单个的克隆,然后挑选单克隆细胞扩大培养你,这样就纯了
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l小呆
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yizhe2011你细胞数少一点,成单个的克隆,然后挑选单克隆细胞扩大培养你,这样就纯了谢谢您的回复,扩大培养的话,您一般怎么做,会不会细胞长不起来?
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yizhe2011
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l小呆谢谢您的回复,扩大培养的话,您一般怎么做,会不会细胞长不起来?就是时间的问题,张久一点可以的
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kangaroo0513
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不如直接用慢病毒转。。。转上去的几乎都是稳定株。。。普通的质粒转染,整合效率极低,并且筛选周期超级长。。。等单克隆长出来都差不多1个多月了
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l小呆
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kangaroo0513不如直接用慢病毒转。。。转上去的几乎都是稳定株。。。普通的质粒转染,整合效率极低,并且筛选周期超级长。。。等单克隆长出来都差不多1个多月了谢谢您的回复,慢病毒暂时没条件做,只能脂质体转染。
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kangaroo0513
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l小呆谢谢您的回复,慢病毒暂时没条件做,只能脂质体转染。那就用piggybac转座子系统,通过脂质体稳转。。这个做稳转株效率比直接转染高得多的多的多。
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