求问腺病毒感染慢病毒构建的稳转细胞株，为什么感染不上呢？原来未构建以前效果很好的？

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2021-08-08

问题描述：

我用腺病毒感染稳转细胞株，用到50微升的量都感染不起来，荧光不表达，PCR验证不出来？求问如果用polybrene该怎么加，转染之前预处理还是加病毒的时候加进去？

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Ucell

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首先建议战友实验前做个预实验，感染量做个梯度，摸下最适浓度；如果需要加polybrene，按千分之一加即可，感染时加入到体系中即可。

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dxy_tzto6ule

用户

1.慢病毒感染⑴第一天按实验需要将细胞铺板（比如24孔板）。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃培养过夜。⑵第二天感染前，从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化，参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。注意：轻轻混匀，不要使用振荡器。⑶吸去细胞原有培养基，将按照MOI稀释好的病毒液+培养基+Polybrene（对于293细胞，终浓度6μg/ml）加入细胞中，轻轻摇匀。37℃培养过夜注：病毒液-培养基-Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm培养皿3ml），37°C预热；②加入病毒轻轻混匀；③加入Polybrene至终浓度为2μg-12μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI高于20时，我们建议客户添加Polybrene（终浓度2~12μg/ml，浓度因不同的细胞而异，具体的请参考相关文献）来提高病毒的感染效率。详情情可以去http://www.hanbio.net/cn/products/item/12094看看

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