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yangea
用户
稳定转染并已进行过至少一轮的单克隆化操作的细胞株在维持培养时可以不加G418，但一段时间后要用刚筛选出的维持浓度的G418压一压该细胞，培养个几代吧，使那些已回复的野生型细胞死光，否则再经一段时间后野生型细胞肯定会有生长优势而压过转染的细胞的（这个经验是听在美国的一位老师说的，她们实验室对于稳转株都是这样操作）。我们实验室对于构建的稳转株是一直拿G418压着的。因为细胞尤其是肿瘤细胞在生长过程中都更加倾向于轻装前进，把本身不属于自己的东西（随机整合在染色体上的外源基因）外排。还有对于一直用G418压着的稳转株就不会回复吗？就我们的经验来看并不是这样，随着传代的继续，可能有的细胞已经排出了外源基因，但诱发了G418抗性，所以依然成活，这样实际上就等于混进了杂细胞。所以为什么一段时间后通过报告基因等手段检测该细胞一些指标会发生变化。我们稳转的一个细胞现在已经养了4年多了，从荧光素酶报告基因的表达量来看，的确下降了不少。这种情况下可以再进行一轮或多轮的单克隆化操作来优选细胞。多多交流！
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lifengna
用户收获不少，谢谢yangea！
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