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Biorbyt/Rat CD133 Human Cells Transfected Lysate (positive control) (denatured)/orb174679
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Biorbyt/Rat CD133 Human Cells Transfected Lysate (positive control) (denatured)/orb174679
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Biorbyt
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Rat CD133 Human Cells Transfected Lysate (positive control) (denatured)

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Catalog Number: orb174679

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Datasheet
Product Overview
Product Name Rat CD133 Human Cells Transfected Lysate (positive control) (denatured)
Catalog Number orb174679
Hazard InformationNon-Toxic
Target Rat CD133
Product Properties
Form/Appearance 50 mM Tris-HCl pH 6.8, 12.5% glycerol, 1% sodium dodecylsulfate, 0.01% bromophenol blue
Storage Store at -80°C. Aliquot to avoid repeated freezing and thawing
Note For research use only.
Biological Origin Human Cells
Product Description

Human Cells transfected lysate in which Rat CD133/PROM1/Prominin 1 has been over-expressed. The whole cell lysate is provided in 1X Sample Buffer.

Application Notes
Application Notes Cell lysate was prepared by homogenization in ice-cold modified RIPA Lysis Buffer with cocktail of protease inhibitors (Sigma). Cell debris was removed by centrifugation. Protein concentration was determined with Bradford assay (Bio-Rad protein assay, Microplate Standard assay). The cell lysate was boiled for 5 minutes in 1 x SDS sample buffer (50 mM Tris-HCl pH 6.8, 12.5% glycerol, 1% sodium dodecylsulfate, 0.01% bromophenol blue) containing 5% b-mercaptoethanol
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2021-07-22
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2021-07-23
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实验原理       稳定转染就是将外源基因DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。        瞬时转染/感染的特点:外源DNA不整合到宿主的染色体中,一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数,产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天);外源基因的表达水平不... 查看更多>
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稳转细胞系常用的方法有脂质体转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,脂质体法筛单克隆时间耗时长,假阳性高,且效率低,大概只有1%。病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐。
如果经费充足的话可以找公司包装病毒,如武汉的普健可以提供各种载体的构建及细胞株构建的技术服务。
行阶梯形矩阵_123
zf30272021-08-07
如题,我用PIRES2-EGFP(带/不带目的基因)转染HCT-116,G418筛选,筛选浓度为800µg/ml,两周后发现克隆要么不带荧光,要么荧光很淡,几乎看不出细胞的轮廓,估计挑出来也没用,请问这是什么原因,我下一步该怎么办?
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大,如果经费充足可以直接找公司包毒的。
请问细胞转染质粒后想获得稳定细胞系,是先用流式细胞仪筛选后再用抗性培养基筛选吗?一般是转染后多久开始进行筛选
真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体,在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。 腺病毒载体携带外源基因较大,可瞬时高表达。 慢病毒载体携带外源基因较小些,但可以重组入细胞基因组,稳定高表达。
1.将外源基因插入慢病毒载体
2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合,共转染靶细胞
3.收集病毒液
4.用病毒液感染靶细胞
5.用载体上带的抗生素进行筛选,如果没有,可以用无限稀释法
6.获得稳转株
转染或PEI转染293的细胞后,一种方式加筛选压力(puromycinorhygromycin),筛选后少量细胞存活,扩大培养后,发现没有阳性,另一种方式,转染后分单克隆,扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%,大部分可能是瞬转,但不会一个都没有整合到基因组吧,以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株,但是最近一段时间都失败,有遇到类似情况的吗?想和大家交流交流
如题,需要对一株肝癌细胞构建稳转细胞株成默其中的一个基因,上海有哪家公司做这个效果比较好的呢?有知道的站友麻烦推荐一下谢谢。
稳定细胞株筛选123
流苏紫光2021-07-22
转染人MGC803细胞,用嘌呤霉素筛选,已经筛选几个月了,每次都失败告终,时间有限,是在是着急。各位大神,有人做稳转的求指导。**!
转入目的基因但为什么不表达mRNA
先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.

最近因工作需要,欲购进一些生产用的细胞株和瞬转、稳转质粒,大家有什么推荐的品系和公司或网站,谢谢!!!

主要需求:

1.生产或生物制药用的,稳定细胞株如CHO-K1、GS和HEK293/HEK293T,以及与之对应的瞬转、稳转(重组整合)质粒(需详细图谱)。

2.原始或改造细胞株,以及对应质粒,改造细胞株请详述细节,原因,优缺点,安全性等。

3.希望大家积极推荐,实验用、生产用均可,原核、真核都行,网站或品系名称也行,只要大家觉得常用、稳定、安全、高产就行。

4.请有意向的同仁回帖或将详细资料发至我163邮箱:wangqiang23mars@163.com,万分感谢。

稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒。