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| Amount : | Non Profit |
The GATA3 Leeporter™ Luciferase Reporter cell line is a stably transfected HEK 293 cell line which expresses Renilla luciferase reporter gene under the transcriptional control of the GATA3 response element, so that the cell line is designed to measure the transcriptional activity of GATA3. As a zinc-finger transcription factor, GATA3 (GATA-binding protein 3) plays a critical role in early and late T cell differentiation, which regulates Th1/Th2 differentiation. GATA3 has been shown to induce Th2 differentiation and repress Th1 differentiation. GATA3 is also known to promote the secretion of IL-4, IL-5 and IL-13 from Th2 cells. The GATA3 induction by phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) is shown in Figure 1.
| Content : | Each vial contains 2 ~ 3 x 10^6 cells in 1 ml of 90% FBS + 10% DMSO. |
| Storage condition : | Immediately upon receipt, store in liquid nitrogen. |
Application:
- Monitor the GATA3 signaling pathway activity.
- Screen for activators or inhibitors of the GATA3 signaling pathway.
Culture conditions:
Cells should be grown at 37oC with 5%CO2using DMEM medium (w/ L-Glutamine, 4.5g/L Glucose and Sodium Pyruvate) supplemented with 10% heat-inactivated FBS and 1% Pen/Strep, plus 3µg/ml of Puromycin(Note: Puromycin can be omitted during the reporter cell assays).
It is recommended to quickly thaw the frozen cells upon receipt or from liquid nitrogen in a37oCwater-bath, transfer to a tube containing 10 ml of growth medium without Puromycin, spin down cells, resuspend cells in pre-warmed growth medium without Puromycin, transfer resuspended cells to T25 flask and culture in37oC-CO2incubator.
Leave the T25 flask in the incubator for 1~3 days without disturbing or changing the medium until cells completely recover viability and become adherent. Once cells are over 90% adherent, remove growth medium and passage the cells through trypsinization and centrifugation. At first passage, switch to growth medium containing Puromycin. Cells should be split before they reach complete confluence.
To passage the cells, detach cells from culture vessel with Trypsin/EDTA, add complete growth medium and transfer to a tube, spin down cells, resuspend cells and seed appropriate aliquots of cells suspension into new culture vessels. Subcultivation ration = 1:10 to 1:20 weekly.To achieve satisfactory results, cells should not be passaged over 16 times.
Functional validation:
A. Response of GATA3 Leeporter™ – HEK293 cells to phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA).
1. Harvest GATA3 Leeporter™ – HEK293 cells and seed cells into a white solid-bottom 96-well microplate in 100µl of growth medium at 5 x 10^4 cells/well.
2. Incubate cells at 37oC in a CO2 incubator for overnight.
3. The next day, stimulate cells with different concentrations of PMA.
4. Incubate at 37oC in a CO2 incubator for 16 hours.
5. Equilibrate the plate to room temperature for 10 minutes.
6. Add 50µl of luciferase assay reagent (Abeomics, Cat #17-1101; Refer to the reagent datasheet for the detailed luciferase assay protocol) per well.
7. Read the plate in 1-5 minutes to measure luminescence using a microplate luminometer.
LIMITED USE RESTRICTIONS:
THIS PRODUCT IS SOLELY FOR IN VITRO RESEARCH USE ONLY. NOT FOR DIAGNOSTIC OR THERAPEUTIC USE.
By use of this product, user agrees to be bound by the terms of this limited use statement.
This product issolely for Internal Research Purposesandnot for Commercial Purposes. Commercial Purposes include, but are not limited to (1) use of the cell line in manufacturing; (2) use of the cell line to provide a service, information or data; (3) use of the cell line for therapeutic, diagnostic or prophylactic purposes; or (4) resale of the cell line whether or not such cell lines are resold for use in research.The buyer cannot sell, give or otherwise transfer this product to a third party.
Commercial License Agreement is available for non-research use if applicable. Please contact Abeomics (info@abeomics.com).
For Research Use Only. Not for use in diagnostic/therapeutics procedures.
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2021-09-09
上海钰博生物科技有限公司在发布的TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stably Transfected HEK 293 Cells、TLR4 稳转HEK 293细胞株供应信息，浏览与TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stably Transfected HEK 293 Cells、TLR4 稳转HEK 293细胞株相关的产品或在搜索更多与TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stabl 查看更多
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2021-07-24
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2021-08-31
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2021-08-21
厦门安提海拉生物科技有限公司在发布的稳转细胞株构建技术服务供应信息，浏览与稳转细胞株构建技术服务相关的产品或在搜索更多与稳转细胞株构建技术服务相关的内容。 查看更多
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2021-08-19
服务名称：稳转细胞系构建 查看更多
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hES media has a two week shelf life.hES cells should be cultured in 4, 6, 24, 48, 96 well plates. Growing cells in flasks is not recommended because it is very 查看更多
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2021-08-18
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2021-07-19
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2021-08-07
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2021-08-26
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2021-08-06
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商品咨询
如何在构建敲除细胞株时利用好CRISPR/Cas9技术? 实验方法123
xsssaber3112017-10-02
可以，除了单靶点外，该技术也可以进行多靶点基因敲除。
siRNA干扰常见问题123
有恃无恐03502021-07-31
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
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【专题讨论】慢病毒转染后筛选稳定株 细胞技术讨论版论坛123
黑白的无奈鷤禩2017-10-02
1.将外源基因插入慢病毒载体
2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合,共转染靶细胞
3.收集病毒液
4.用病毒液感染靶细胞
5.用载体上带的抗生素进行筛选,如果没有,可以用无限稀释法
6.获得稳转株
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3.收集病毒液
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5.用载体上带的抗生素进行筛选,如果没有,可以用无限稀释法
6.获得稳转株
构建好的稳转过表达细胞株,为什么又不表达目的基因了 123
惊叹号7522021-07-24
转入目的基因但为什么不表达mRNA
先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.
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正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.
详解构建稳定细胞株实验流程123
苦也不太差°琼2021-07-30
稳定细胞系构建后可以开展哪些实验
建立稳定细胞株,一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶...专注整体实验·服务生命科学已开展了数千个实验外包项目
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四种转染试剂对H9C2细胞转染效率的比较 道客巴巴123
银妈E07GG2021-07-21
首先你得明确这个h9c2细胞的培养是否好做，操作是否稳定。
然后你得确定，这个细胞株对于你得研究来说不可或缺，具有明确的代表性。
上面两个都没有问题的话，祝你顺利。
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上面两个都没有问题的话，祝你顺利。
整理)慢病毒稳转细胞株步骤.pdf原创力文档123
l小呆2021-07-28
【求助】瞬转、稳转? 细胞技术讨论版论坛123
zjliuzj2021-08-01
行阶梯形矩阵_123
zf30272021-08-07
如题，我用PIRES2-EGFP（带/不带目的基因）转染HCT-116，G418筛选，筛选浓度为800µg/ml,两周后发现克隆要么不带荧光，要么荧光很淡，几乎看不出细胞的轮廓，估计挑出来也没用，请问这是什么原因，我下一步该怎么办？
转染细胞的稳定筛选 实验方法123
流年ノ01072017-10-02
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
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病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
细胞转染筛选问题 生物科学 123
面忻2021-08-13
如何构建重组质粒转染后稳定表达的细胞系 分子生物 ...123
元超瞄2021-08-02
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
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