
TransformedfromHelacellsexpress tetracyclinerepresser(TetR)gene. TetRwasexpressedundersuCMVpromoter.APuromycin antibioticMarkerwasexpressedunderRSVpromoter.see ProductManual fordetails. The followingexpressioncassettewasinsertedintocellline’sgenome.
TheTetRstablecelllinescanbeusedtogetherwithinducIBLeexpressionlentivirusforthe inducibletargetexpressionorgenerationofthetargetspecificinducibleexpressioncelllines.
SeeHowinducibleexpressionworks.
Soldat: 1vialx(>2 x106cells)/vial
Cat#SC035-Puro
ebiomall.com






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一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
最近因工作需要,欲购进一些生产用的细胞株和瞬转、稳转质粒,大家有什么推荐的品系和公司或网站,谢谢!!!
主要需求:
1.生产或生物制药用的,稳定细胞株如CHO-K1、GS和HEK293/HEK293T,以及与之对应的瞬转、稳转(重组整合)质粒(需详细图谱)。
2.原始或改造细胞株,以及对应质粒,改造细胞株请详述细节,原因,优缺点,安全性等。
3.希望大家积极推荐,实验用、生产用均可,原核、真核都行,网站或品系名称也行,只要大家觉得常用、稳定、安全、高产就行。
4.请有意向的同仁回帖或将详细资料发至我163邮箱:wangqiang23mars@163.com,万分感谢。
对于瞬时转染的检测:如果有报告基因,就通过报告基因的表达看转染成功与否;没有报告基因的话,就在24~96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
① 在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量
③ 细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠卵巢细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。

