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Gentarget/Hela-TetR stable cells (Puro)/SC035-Puro/1 Ea
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Gentarget/Hela-TetR stable cells (Puro)/SC035-Puro/1 Ea
品牌 / 
Gentarget
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SC035-Puro
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TransformedfromHelacellsexpress tetracyclinerepresser(TetR)gene. TetRwasexpressedundersuCMVpromoter.APuromycin antibioticMarkerwasexpressedunderRSVpromoter.see ProductManual fordetailsThe followingexpressioncassettewasinsertedintocellline’sgenome.

cmv-tetr-puro

TheTetRstablecelllinescanbeusedtogetherwithinducIBLeexpressionlentivirusforthe inducibletargetexpressionorgenerationofthetargetspecificinducibleexpressioncelllines.

SeeHowinducibleexpressionworks.

Soldat: 1vialx(>2 x106cells)/vial 

Cat#SC035-Puro

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蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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上海钰博生物科技有限公司在发布的TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stably Transfected HEK 293 Cells、TLR4 稳转HEK 293细胞株供应信息,浏览与TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stably Transfected HEK 293 Cells、TLR4 稳转HEK 293细胞株相关的产品或在搜索更多与TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stabl 查看更多>
★服务描述 shRNA稳转株是指能持续稳定表达干扰特定基因shRNA的细胞。RNA干扰是基因功能研究中最常用的手段之一。我公司利用慢病毒将shRNA序列整合入细胞基因组,并通过慢病毒载体携带的抗性基因(通常为新霉素,嘌呤霉素,潮霉素)筛选出稳定转染shRNA的细胞,使其成为shRNA稳定转染细胞系。★服务内容 1:shRNA干扰靶点序列的设计; 2:shRNA 慢病毒质粒的构建; 3:shRNA慢病毒包装与病毒滴度测定; 4... 查看更多>
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surface marke 查看更多>
江苏吉锐生物技术有限公司在发布的稳转细胞株构建(过表达、沉默)--稳定遗传,优于慢病毒供应信息,浏览与稳转细胞株构建(过表达、沉默)--稳定遗传,优于慢病毒相关的产品或在搜索更多与稳转细胞株构建(过表达、沉默)--稳定遗传,优于慢病毒相关的内容。 查看更多>
2021-07-17
简介:【HeLa/DDP 拜力细胞】,细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,最好的细胞售后,为老师们提供放心科研细胞。详细说明:  【HeLa/DDP 拜力细胞】产品特点:【HeLa/DDP 拜力细胞】,细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,最好的细胞 查看更多>
2021-07-22
实验周期太长?实验室条件受限,不准用病毒?夏季来临了,想去度假!别担心,都交给我们吧!过表达慢病毒稳转株促销大行动已开始。和元生物倾情回馈新老客户!还等什么,赶紧行动吧! 活动时间: 2015年5月15日—2015年10月30日活动内容: 针对同一基因、同一载体:1个稳转株12800元;2个稳转株15800元;3个稳转株17800元;服务流程: 注:如果您提供的感染细胞的MOI值过高,价格和周期上会有变动哦! 本次活动最终解释权归和元生... 查看更多>
检验科独立只是美丽的误解最近一篇网文火爆全国,就是检验科将被独立出医院的传闻。说是传闻也不完全正确,国家卫计委确实下发了文件,不过解读人不同可能有不同的理解。而且文中提到的实验室不包括医院的检验科,所以检验科独立成为法人短时间内还是不可能的。所以对于文件,大家一定要亲自看全文,而且也要看附件信息,微信传的东西看看就好,包括笔者这篇 查看更多>
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上海麒盟生物科技有限公司在发布的基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKD-Stable)供应信息,浏览与基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKD-Stable)相关的产品或在搜索更多与基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKD-Stable)相关的内容。 查看更多>
2021-09-08
武汉金开瑞生物工程有限公司在发布的稳转细胞株构建供应信息,浏览与稳转细胞株构建相关的产品或在搜索更多与稳转细胞株构建相关的内容。 查看更多>
北京英茂盛业生物科技有限公司在发布的线粒体定位EGFP稳转细胞系(Hela)供应信息,浏览与线粒体定位EGFP稳转细胞系(Hela)相关的产品或在搜索更多与线粒体定位EGFP稳转细胞系(Hela)相关的内容。 查看更多>
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磷酸钙细胞转染技术 123
肥沙褐匀0012021-08-15
转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好. 顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也能看到. 稳转的话一般需要在质粒上构建某个抗性基因,如嘌呤霉素抗性.这样用抗性培养基多次筛选就可以筛选出稳转的细胞株,但是比较难.
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
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病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.

最近因工作需要,欲购进一些生产用的细胞株和瞬转、稳转质粒,大家有什么推荐的品系和公司或网站,谢谢!!!

主要需求:

1.生产或生物制药用的,稳定细胞株如CHO-K1、GS和HEK293/HEK293T,以及与之对应的瞬转、稳转(重组整合)质粒(需详细图谱)。

2.原始或改造细胞株,以及对应质粒,改造细胞株请详述细节,原因,优缺点,安全性等。

3.希望大家积极推荐,实验用、生产用均可,原核、真核都行,网站或品系名称也行,只要大家觉得常用、稳定、安全、高产就行。

4.请有意向的同仁回帖或将详细资料发至我163邮箱:wangqiang23mars@163.com,万分感谢。

转染或PEI转染293的细胞后,一种方式加筛选压力(puromycinorhygromycin),筛选后少量细胞存活,扩大培养后,发现没有阳性,另一种方式,转染后分单克隆,扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%,大部分可能是瞬转,但不会一个都没有整合到基因组吧,以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株,但是最近一段时间都失败,有遇到类似情况的吗?想和大家交流交流
瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上,结果是短暂的高水平表达,可在外源基因导入细胞24~96h内检测表达效果,表达水平与位置无关,不会受到周围染色体元件的影响。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。
对于瞬时转染的检测:如果有报告基因,就通过报告基因的表达看转染成功与否;没有报告基因的话,就在24~96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始
① 在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量
③ 细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠卵巢细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大,如果经费充足可以直接找公司包毒的。
自己操作的难度比较大。一般有一定经验的外科医生才会打这个麻醉,打不好是没有效果的。最好去专业医疗机构医院或者诊所,那里会比较专业。效果也比较好.
构建稳转细胞系123
gleb7532017-10-02
稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系,这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说(由细胞类型决定),形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染(transient transfection)的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的中分离出稀少的稳定转染物
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。