牛的细胞培养传代试验是什么?
来自 : 蚂蚁淘
Triton-PrepMethodforbacterialDNAPurification
- Grow5(largescale-15mlculture).HarvestinsingleEppendorftube(or15mldisposabletube).
- ResUSPendpelletwith300ulSTETbuffer(900ul).Afterresuspendingadd30ulRNase/lysozymemixture(100ul).
- Boilforoneminute15seconds(oneminute45seconds).
- Spininmicrofugeforatleast15minutes.
- Takesupernatantandphenolextractwith150ul(500ul)STET-saturatedphenol.
- Spinandtakesupernatant.Add1/10volume4Mlithiumchloride(autoclaved).Letsitonicefor5-10minutes.
- Spinandtakesupernatant.Addequalvolumeisopropanol.RTfor5minutes.
- Spin.NopelletwillbevisIBLe.Don"tpanic,DNAisstucktosideallthewayuptube.
- Important:Washwith80%ethanol(95%willcausetheresidualTritontoprecipitate)
- Resuspendpelletin50-200ul.
Lysozyme/RNasemixture- 10mg/mllysozyme
- 1mg/mlRNase(usecheapgrade(BMB)ratherthanRNaseA,whichistooexpensive)
- 50mMTris-HClpH8.0
- Storeat-20oCinsmallaliquots.Donotrefreezeafterthawing.
STET
- 8%sucrose
- 5%TritonX-100
- 50mMTris-HCl(pH8.0)
- 50mMEDTApH8.0
- Filtersterilize.Storeat4oC
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