不同程度的溶血和脂血标本对ELISA法检测HBsAg结果的影响观察 ...
来自 : 蚂蚁淘
ChromosomalDNAIsolationMETHOD:- Growcellsin2-5mlbrothtolatelogphase.
- Pellet1-2mlcellsinmicrofuge.
- ResUSPendcellsin400µlTES(50mMTris-HCl,10mMNaCl,10mMEDTA,pH7.5).
- Add:17µl30%(w/v)sarkosyl(finalconcentrationof1%)and5µl10mg/mlproteinaseK(finalconcentration100µg/ml).
- Incubateat37ºCfor30-60minutes,oruntilthesolutionclears.
- Add400µl4MNH4OAcandmixwell.
- Extract2Xwith1:1phenol:chloroform.
- Extract1Xwithchloroform.
- PrecipitatewithanequalvolumeofisopropanolatRTfor10minutes.
- Resuspendpelletin400µl0.1MNaOAcpH6.0.Pelletmaynotresuspendcompletely.ReprecipitateDNAwith800µlEtOHfor15minutesatRT.
- Centrifugeat11Kfor15minutestopelletDNA.
- Rinsepelletin1ml70%EtOHfor5minutes.
- Drypelletbyplacingopentubein37Cincubatororonbenchtopfor15-20minutes.
- ResuspendDNAin50ulTE(10mMTrispH8.0,0.1mMEDTA)overnightat4C.Mayadd1µlRNasetohelpDNAdissolve.Yields25-50ugofDNA;use1-5µlperdigest.
TES:5.0ml1MTrispH7.50.2ml5MNaCl2.0ml0.5MEDTA93mlsterileMQwater
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
