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| 实验方法原理 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 已知标准的抗病毒血清(20抗体单位0.1ml) 试剂、试剂盒 | 已知阴性血清(56℃30min灭活）宿主：敏感细胞、敏感动物、鸡胚 仪器、耗材 | 细胞培养板水浴锅细胞培养箱 实验步骤 | （以细胞培养为例）：①用细胞维持液连续10倍稀释病毒分离物10-1~10-8); ②取0.6ml不同浓度的病毒稀释液与0.6ml标准的抗病毒血清混合； ③再取0.6ml不同浓度的病毒稀释液与0.6ml已知的阴性血清混合； ④将混合液置37℃水浴1h,然后取0.2ml混合液分别接种于细胞已长成单层的96孔细胞培养板中，每一稀释度接种5孔，设5孔正常细胞对照； ⑤将细胞培养板置37℃、5%CO2温箱中孵育，每日观察细胞病变效应(CPE)。 ⑥中和试验的病毒CCID50的计算：细胞培养中，通常是以病毒的组织半数感染量(CCID50/单位体积）作为中和反应的终点。而动物试验中，用动物半数致死量(LD50/单位体积）作为中和反应的终点。中和试验中，抗血清组的CCID50与阴性血清组的CCID50之差的对数等于或大于2,才能说明中和试验结果为阳性。 注意事项 | 展开 其他 | 用中和试验方法鉴定病毒时，将不同稀释倍数的病毒与标准的抗血清(20个抗体单位/单位体积）混合、孵育，使二者充分反应，然后将混合液接种到敏感宿主体内，观察试验结果。 |
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发布于 ： 2018-08-10
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