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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
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Load both sides of the hemacytometer with the cell suspension - covering both counting grids. Count the number of cells in 5 out of 9 squares from each countin 查看更多
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上海笃玛生物科技有限公司在发布的精子细胞冻存液进口原装供应信息，浏览与精子细胞冻存液进口原装相关的产品或在搜索更多与精子细胞冻存液进口原装相关的内容。 查看更多
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2021-08-12
心肌细胞培养体会作者：windboy77记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了，换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题，大家都是公用的血清。当时我很迷惑，后来我向老师如实反映问题，他听完我的叙述后 查看更多
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2021-07-14
小生刚开始做细胞培养不久，对于一个细胞培养的新手来说，最怕的就是细胞受污染。所以本人翻阅了一些园子里的关于细胞培养过程中的污染问题的贴子，结合平时查阅资料以及这些天的细胞培养的一些心得，整理出一些关于细胞污染的东东与大家一起分享。希望能对刚踏入细胞培养的同仁们有些帮助，也希望各位达人作出补充，大家共同进步。 概述 凡混入细胞培养环境 查看更多
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2019-03-03
北京华迈科生物技术有限责任公司在发布的细菌冻存液供应信息，浏览与细菌冻存液相关的产品或在搜索更多与细菌冻存液相关的内容。 查看更多
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2019-02-09
上海觅拓生物科技有限公司在发布的 ZENOAQCELLBANKER 2(无血清型细胞冻存液)供应信息，浏览与 ZENOAQCELLBANKER 2(无血清型细胞冻存液)相关的产品或在搜索更多与 ZENOAQCELLBANKER 2(无血清型细胞冻存液)相关的内容。 查看更多
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2019-03-23
赛业（广州）生物科技有限公司在发布的神经元细胞无蛋白非程序冻存液供应信息，浏览与神经元细胞无蛋白非程序冻存液相关的产品或在搜索更多与神经元细胞无蛋白非程序冻存液相关的内容。 查看更多
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2021-08-15
由于申请名额有限，申请者需下载“无血清快速细胞冻存液0元试用反馈表” ，填写完整相关信息（除实验结果外），并将表单发送至邮箱：sale01@bio-tool.com，才能申请成功。 资料下载：无血清快速细胞冻存液0元试用客户反馈表.docx (下载12次) 领取必拓®无血清快速细胞冻存液(2mL*5支)细则：1.运费：运费由试用申请客户承担，顺丰到付或预付20元，一个月内反馈实验结果，邮费... 查看更多
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2019-03-07
冻存和复苏的原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序1. 标准程序：采用细胞冻存器当温度在-25 ℃以上时， 1~2 ℃/min；当温度达-25 ℃以下时， 5~10 ℃/min；当温度 查看更多
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天津卫凯生物工程有限公司在发布的人骨髓间充质干细胞冻存液供应信息，浏览与人骨髓间充质干细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与人骨髓间充质干细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2020-04-23
重庆市寰宇安泰生物科技有限公司在发布的STEM-CELLBANKER 细胞冻存液供应信息，浏览与STEM-CELLBANKER 细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与STEM-CELLBANKER 细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2021-08-17
您是否也经常有这些困扰？每次冻存细胞都需要现配冻存液，太麻烦程序降温(4℃~-20℃~-80℃~液氮)，太繁琐太耗时90%血清+10%DMSO冻存，成本太高细胞比较娇贵，细胞冻存后复苏率太低日本A/B品牌无血清冻存液好用，价格太高…………那是时候换一款无需程序降温的细胞冻存液了~~特别配方有效提高细胞冻存活率和复苏活力不含血清，不含动物来源性蛋白能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染... 查看更多
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【求助】ELISA测细胞培养上清液蛋白浓度 细胞技术讨论版 ...123
佐至夏2021-08-01
lps刺激raw264.7细胞 生物科学 细胞科学论坛学术科研...123
破碎的儵2017-09-29
RAW264.7细胞为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5－10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看，我养的挺好的！
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5－10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看，我养的挺好的！
样品进入无菌室的管理123
_DJ___IXfrj°2021-07-29
进入前肯定是要进行消毒的，穿戴好衣服鞋帽，下面给你介绍下一些实验室要注意的安全事项吧。 1、加入试剂之前，把它混匀一下，以免放置时间长了浓度不均。冻存的试剂更是要等全部融化后才能使用。
做ELISA实验前,事先收集好的标本该如何处理?123
zhanyc852021-08-09
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。
7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的：
【标本处理办法】
1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离
心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）
保存。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。
注：样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
希望可以给您提供帮助，祝您科研顺利！
做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。
7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的：
【标本处理办法】
1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离
心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）
保存。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。
注：样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
希望可以给您提供帮助，祝您科研顺利！
【求助】冻存组织用EP管好还是用细胞冻存管好啊? 实验室建设与...123
长地久◇2021-08-13
1. 新鲜组织标本放入液氮要用冻存管，EP管密封性不好，液氮容易漏进去，而且也耐受不了-198°的低温，容易爆管
2. 普通冻存管就可以，不用特意再去灭酶处理，因为RNA酶污染主要是内源性的，外界的很少，主要来自于人的皮肤、呼吸，戴好口罩手套就可以了，冻存管这些，影响很小忽略不计
3. 组织在液氮里冻硬了就可以拿到-80°保存，随时取用，不用长期在液氮里。当然我们是不会长期保存的，没有试过在-80°里呆一年。不过话说回来，除非是几千例标本的大型课题，一般都很少需要保存标本保存1年以上的吧，几十例一百例的东西，两三个月最多半年就处理掉了，所以我们做小课题的都是取到组织后立马放液氮，再转移到-80°
（仅供参考）
2. 普通冻存管就可以，不用特意再去灭酶处理，因为RNA酶污染主要是内源性的，外界的很少，主要来自于人的皮肤、呼吸，戴好口罩手套就可以了，冻存管这些，影响很小忽略不计
3. 组织在液氮里冻硬了就可以拿到-80°保存，随时取用，不用长期在液氮里。当然我们是不会长期保存的，没有试过在-80°里呆一年。不过话说回来，除非是几千例标本的大型课题，一般都很少需要保存标本保存1年以上的吧，几十例一百例的东西，两三个月最多半年就处理掉了，所以我们做小课题的都是取到组织后立马放液氮，再转移到-80°
（仅供参考）
原则上,细胞能在也液氮中冻存多久_问答详情_冻存试剂_细胞培养_...123
代号HQ22017-09-29
使用了可靠有效的保护剂恰当冻存的细胞可永远保存在液氮中而保持活力。至少已证明的历史有30-50年了。不管是在液态液氮中，还是在液氮的气相中，过了几十年细胞活力没有明显下降。
但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞，活力下降很快，当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽，小鼠的细胞可到6个月。
但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞，活力下降很快，当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽，小鼠的细胞可到6个月。
脂质体转染试剂20℃冻存以后会怎样? 细胞技术讨论版 专业...123
与其不如果2021-07-23
哪些人需要做精液冷冻保存呢?精液保存生殖男科/四川省人类精子...123
2021-08-18
只有医院生殖中心和精子库才有资格做吧，自己好像不允许也没那个条件
凝血酶时间测定试剂盒怎么用,注意事项123
dcfq0042017-09-29
凝血酶时间测定试剂盒(凝固法) 使用说明书 产品名称 1.通用名称：凝血酶时间测定试剂盒 2.英文名称：TT 包装规格 10×2ml，10×4ml，5×2ml，10×10ml 预期用途 本试剂盒用于检测人血浆的凝血酶时间。 该产品可辅助用于高分子量肝素的监控治疗以及纤维蛋白溶解治疗监控，初步筛选纤维蛋白原机能不良及一些严重的纤维蛋白原缺乏病症，可粗略用于检测干素抗凝的治疗。 （1）TT延长的临床意义：超过正常对照3s以上为TT延长：①纤维增多或肝素抗凝物质存在以及AT-III显著提高；②纤维蛋白原降解物的增加；③纤维蛋白原减少；④纤维蛋白原机能障碍；⑤纤维蛋白原分子异常。 （2）TT缩短的临床意义：①高FIB血症；②钙离子存在时或标本有微小凝结块及PH呈酸性。 检验原理 适量的凝血酶将血浆样品中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，从而使血浆凝固。凝固所需的时间即为凝血酶时间(TT)。 主要组成成份 凝血酶 28.5IU/ml Hepes缓冲液 60mM 储存条件及有效期 2-8℃可保存12个月，未开封试剂有效期内稳定。开封复溶后37℃下试剂可稳定7天。 适用仪器 适用于SYSMEX CA-50半自动血凝仪，SYSMEX CA-1500全自动血凝仪， STAGO COMPACT全自动血凝仪。 样本要求 新鲜静脉血与0.109M的柠檬酸钠按9:1混合均匀，以3000rpm离心15分钟(建议使用低温离心机)，收集上层液体(血浆)，在2小时内进行实验。如果样品2小时内不能检测，血浆应冻存。-20℃以下冷冻保存两周，-70℃以下冷冻可保存一个月。冻存的样品检测前必须37℃迅速解冻，不可反复冻融。 检验方法 1.半自动血凝仪将 TT试剂平衡至室温，轻轻倒置混匀。 2.全自动血凝仪 操作参照仪器操作手册。 血浆/试剂比例请按检验方法1操作要求。 3.质量控制 各实验室应建立自己的正常和异常质控范围，以核定仪器和试剂的操作。 4.结果显示 凝血酶时间测定结果以秒显示。 参考区间 9.0～16.0秒。 以上值仅供参考。由于仪器、实验室、当地人群之间都可能有差异，建议建立自己的参考范围。 检验结果的解释 可能影响检验结果的因素： 1.血凝仪未按要求定期维护保养出现异常。 2.质控品未按说明书正确使用操作。 3.加样器等移液器具未定期校验，出现异常。 检验方法的局限性 1.本试剂仅用于体外诊断。 2.本实验结果仅作为临床诊断辅助参考。 产品性能指标 1.批间差：用质控血浆重复测试不同批号试剂，所得结果变异系数（CV）应不超过10%。 2.重复性：用质控血浆重复测试所得结果的变异系数（CV）应不超过5%。 注意事项 1.样本避免出现泡沫。样本采集和凝血试验必须使用一次性塑料或硅化玻璃容器。 2.用浊度法测定终点的血凝仪，溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果，此时宜用 手工或电子机械血凝仪测定。 3.红细胞比容在20-55%范围之外时，应调整抗凝剂用量。 抗凝剂用量(ml)=0.00185×血液体积(ml)×(100-比容) 4.样本不宜采用草酸盐、EDTA和肝素做抗凝剂。 5.测定温度为37℃±0.5℃，需经常检查加热元件的温度。 6.实验器具必须清洁，不能有去垢剂存在。测定操作时佩戴一次性手套。
细胞冻存 123
血刺怪怪482021-08-06
细胞冻存注意事项：
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质，冻存液：10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗，NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度：
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混匀，分装于无菌冻存管中，1 ml/vial，悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16～18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质，冻存液：10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗，NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度：
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混匀，分装于无菌冻存管中，1 ml/vial，悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16～18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。
分装试剂用冻存管好还是离心管好_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】...123
乔爱熙4142017-09-29
冻存管存好 这样子便于试剂在合理的条件下储存 以后还能继续使用哈
细胞冻存的方法与步骤 123
央央优耄Iy5M02017-09-29
（一）仪器
1. 净化工作台
2. 离心机
3. 恒温水浴箱
4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5. 倒置相差显微镜
6. 培养箱
7. 液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1. 吸管（弯头、直头）
2. 培养瓶
3. 玻璃瓶（250ml、100ml）
4. 废液缸
（三）塑料器皿
1. 吸头
2. 枪头
3. 胶塞
4. 移液管（10ml）
5. 15ml离心管
6. 冻存管（1～2ml）
（四）其他物品
1. 微量加样枪
2. 红血球计数板
3. 记号笔
4. 医用橡皮膏
5. 移液枪
（五）试剂
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培养液
4. 双抗（青霉素、链霉素）
5. 胰蛋白酶（0.08%）
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油 （一）细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中；
3. 离心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
（二） 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；
3. 离心， 1000rpm，5min；
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5. 次日更换一次培养液，继续培养。 1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液；
2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；
3．冻存和复苏最好用新配制的培养液。向左转|向右转
1. 净化工作台
2. 离心机
3. 恒温水浴箱
4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5. 倒置相差显微镜
6. 培养箱
7. 液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1. 吸管（弯头、直头）
2. 培养瓶
3. 玻璃瓶（250ml、100ml）
4. 废液缸
（三）塑料器皿
1. 吸头
2. 枪头
3. 胶塞
4. 移液管（10ml）
5. 15ml离心管
6. 冻存管（1～2ml）
（四）其他物品
1. 微量加样枪
2. 红血球计数板
3. 记号笔
4. 医用橡皮膏
5. 移液枪
（五）试剂
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培养液
4. 双抗（青霉素、链霉素）
5. 胰蛋白酶（0.08%）
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油 （一）细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中；
3. 离心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
（二） 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；
3. 离心， 1000rpm，5min；
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5. 次日更换一次培养液，继续培养。 1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液；
2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；
3．冻存和复苏最好用新配制的培养液。向左转|向右转
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