movas细胞转染siRNA
2021-08-03
问题描述：
最近在做movas转染siRNA，用的是lipo2000，siRNA终浓度100nM，转染时细胞密度60%，80%，90%都尝试过，转染后6h换液，24h提RNA，效果一直不好，最好的时候沉默效率60%左右，非常崩溃
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东月来星
用户
转染效率如何呢？可以在看看蛋白的沉默效果。也可以将提RNA的时间延长到转染后48h看看
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hbhdaj
用户东月来星转染效率如何呢？可以在看看蛋白的沉默效果。也可以将提RNA的时间延长到转染后48h看看转染的时候每一个板子上有一孔带荧光的，目测转染效率还可以。但是我觉得这个细胞长的实在是太快了，会不会是因为细胞增值太快而siRNA不能随细胞增殖而复制导致的呢，该怎么解决呢
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东月来星
用户hbhdaj转染的时候每一个板子上有一孔带荧光的，目测转染效率还可以。但是我觉得这个细胞长的实在是太快了，会不会是因为细胞增值太快而siRNA不能随细胞增殖而复制导致的呢，该怎么解决呢有一点这个原因，但是也有很多转染试剂是需要细胞密度低于50%在进行转染的，往往48h后提蛋白时细胞也长满了但检测的沉默水平还是很好的。你可以设置个提RNA的时间点，不一定是24h的沉默效果最佳而也有可能在48h达到最佳。做PCR有一个需要注意的就是引物最好是设计在沉默位点的两侧。不要离沉默位点太远了。如果设计的引物离沉默位点太远的话可能会降低了检测的灵敏度，就是实际上沉默效果有80%而因为基因沉默具有一个时效性所以往往扩增区域离沉默位点太远的话会只能检测到60%的沉默效果。
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hbhdaj
用户展开引用东月来星有一点这个原因，但是也有很多转染试剂是需要细胞密度低于50%在进行转染的，往往48h后提蛋白时细胞也长满了但检测的沉默水平还是很好的。你可以设置个提RNA的时间点，不一定是24h的沉默效果最佳而也有可能在48h达到最佳。做PCR有一个需要注意的就是引物最好是设计在沉默位点的两侧。不要离沉默位点太远了。如果设计的引物离沉默位点太远的话可能会降低了检测的灵敏度，就是实际上沉默效果有80%而因为基因沉默具有一个时效性所以往往扩增区域离沉默位点太远的话会只能检测到60%的沉默效果。......非常感谢，我试试
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ding2000yj
用户建议用一下英格恩生物的RNA专用的转染试剂，专门针对siRNA等各种RNA的转染，专用的才好用。毕竟DNA和RNA有所不同，所以转染试剂肯定也要不一样的。
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shaomu738
用户汉恒试剂对各种细胞的转染效率都蛮高的，入门的站友可以申请免费试用装反正不亏免费试用装申请地址http://www.biomart.cn/infosupply/12756533.htm
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QuincyPhD
用户您好，我可以跟您实验室那边要movas细胞吗？可以拿别的细胞交换
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ding2000yj
用户我们实验室用的是英格恩生物的转染试剂，效果挺不错的，是纳米材料的，比lipo好用，之前用lipo做了很多次，但就是做不出来，换了英格恩的，就做出来了。
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