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Sciencell
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ThedeliveryofforeignDNAintoeukaryoticcellsisoneofthemostcommonmolecularBIOLOGytechniquestostudybiologicalmechanisms.However,unliketransformedcelllines,theefficienttransfectionofprimarycellscanbeaproblem.MesenFectagenisacationicpolymer-basedtransfectionsystemspecificallydesignedandoptimizedforefficienttransfectionofprimarymesenchymalstemcells.TransfectionwithMesenFectagencanbecarriedoutinthepresenceofantibioticsandserum.Insteadofnormaltwo-daytransfection,anoptimizedone-daytransfectionprocedurecanbeperformedfortime-savingandhighlyreproducIBLetransfection.OnemlofMesenFectagenreagentissufficientforupto250transfectionsperwellin96-wellplate.

Specifications:

CatalogNo.0933
CountryofManufactureUnitedStates
ProductCodeMesenF
Size/Quantitykit
ProductUseTHESEPRODUCTSAREFORRESEARCHUSEONLY.Notapprovedforhumanorveterinaryuse,forapplicationtohumansoranimals,orforuseinclinicalorinvitroprocedures.
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PurposeThe main purpose of the flow chamber assay is to visualize and measure interactions between flowing cells expressing a given adhesion molecule on their 查看更多>
细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的技术。随着分子生物学的发展,转染已经成为研究和控制细胞基因功能、实现基因调控的常规工具。市场上各种转染试剂琳琅满目,各有千秋,然而没有任何一种转染试剂可以能够适用于所有细胞种类、满足所有实验需求和目的,成分控认为转染试剂的成分及作用机理对转染效果及细胞生理作用影响显著,是转染试剂选择的重要依据,选试剂时要留意成分哦。严格来讲,转染的方法可以基于化学法、物理法(电穿孔、显微注射等)以及病... 查看更多>
上海通善生物科技有限公司是qiagen DNA转染试剂盒专业供应商,价格低,质量好,批次最新,免费技术指导,免费产品代测,免运费,服务周到,是国家重点实验室及国内各大院校长期指定供应商。qiagen DNA转染试剂盒品牌的核心供应商——上海通善生物公司简介如下:依托复旦大学,集研发、销售、实验室技术服务于一体的高科技企业。产品领域:分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域。qiagen 查看更多>
预优化DNA转染试剂是由上海新睿生物科技有限公司代理或销售的SignaGen品牌的试剂,产品来源于美国。上海新睿生物科技有限公司是中国最权威的预优化DNA转染试剂试剂销售服务商之一,在上海等地方销售预优化DNA转染试剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业预优化DNA转染试剂仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的预优化DNA转染试剂产品 查看更多>
上海中乔新舟生物科技有限公司在发布的星形胶质细胞转染试剂盒供应信息,浏览与星形胶质细胞转染试剂盒相关的产品或在搜索更多与星形胶质细胞转染试剂盒相关的内容。 查看更多>
相关专题 脂质体介导是目前条件下最方便的转染方法之一,适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,其转染率高,优于磷酸钙法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时,首先需优化转染条件,应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等,对每批LR都要做:第一,先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细 ... 查看更多>
脂质体介导的真核细胞转染实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。用脂质体将DNA导人各种真核细胞的效率比其他转染方法更高,重复性更好。 查看更多>
汉恒生物科技(上海)有限公司在发布的汉恒生物LipoFiter转染试剂供应信息,浏览与汉恒生物LipoFiter转染试剂相关的产品或在搜索更多与汉恒生物LipoFiter转染试剂相关的内容。 查看更多>
SignaGen 是一家专注于开发和生产基因转导工具的企业,服务于生物医学研究领域。借助我们独有的技术平台(美国专利商标局号码为 072308 和 61135606),SignaGen 已经成功开发出三大类 DNA/siRNA 转染试剂,经验证我们的产品比市场上主导产品效率更高,细胞毒性更低。更重要的是我们提供一个合理的价位。 查看更多更新引用文献 more info Recent Product & Service Cit... 查看更多>
上海伟进生物科技有限公司在发布的In vivo-jetPEI转染试剂;活体DNA和siRNA转染试剂供应信息,浏览与In vivo-jetPEI转染试剂;活体DNA和siRNA转染试剂相关的产品或在搜索更多与In vivo-jetPEI转染试剂;活体DNA和siRNA转染试剂相关的内容。 查看更多>
转染试剂选择与介绍在选择转染方法时,需考虑您希望输送的运载物(DNA、RNA或蛋白质)以及您希望转染的细胞类型。您可通过下表选择Life Technologies™的各类阳离子脂质体转染试剂和Neon®转染系统.我们提供了各种DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA输送选择,让您可以对自己的结果更加自信. 卓越的输送效果—可转染多种类型的细胞 无毒性作用—您之所以能看到结果,是因为核酸存在,而不是因为试剂 需要的优化工作更少—针对大多数... 查看更多>
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各位版友求助,

我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。

转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。

同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。


请各位大神帮忙

腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV,(2)rAAV的低产出,(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中,rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外,有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。

用lip3000转染HAC15细胞,目的把质粒转入细胞,现阶段把带EGFP的质粒转进去就难,荧光显微镜下荧光很少,可以数清,按照lip3000说明书转染的(剂量有适当调整),求转染高手指点方法!!


转染6孔板后,一般长到十的六次方级别就可以提蛋白了
可以用移液器将细胞吸出来并高速离心,沉淀重悬于PBS中洗涤,接着就可以裂解提取蛋白了。可以用超声,酶解等等,裂解后离心收集上清。
我目前遇到的瞬时转染,没有专门做细胞同步化的。

但是有在转染前,将细胞进行重新传代的情况,这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1)接种在孔板中,于37℃, 5%CO2 的条件下进行培养,18-24小时( sf9细胞为3-4小时)后转染。”
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,做的比较好的,还是上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
细胞转染可以:(1)真核细胞可以掺入外源DNA而获得新的遗传标志;(2)应用于转基因动植物;(3)应用于生物制药、基因治疗、RNA干扰。
脂质体介导法
实验原理

上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。

上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
个人经验,BHK、CHO是很常用的转染用细胞,而且跟抗体非特异性反应也不高。一般来说,大多数可传代细胞的转染效率都是可以的,还要考虑所用转染剂的类型。

不建议你用MDCK细胞,非常难转染。
最近在做movas转染siRNA,用的是lipo2000,siRNA终浓度100nM,转染时细胞密度60%,80%,90%都尝试过,转染后6h换液,24h提RNA,效果一直不好,最好的时候沉默效率60%左右,非常崩溃
细胞转染 实验方法 123
一直攀爬的蜗牛2021-07-31
本人最近正在做质粒DNA的293T细胞转染,请问各位大神,有没有用过sigma的转染试剂,我们实验室买了,但是是凝胶状,不知道怎么用,请指教!
转染试剂有的毒性很大,要准时换液。可以换个低毒性的试试。或者你转染的东西有致死性。
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