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TransfectionReagentforBHK-21Cells(KidneyCells,CCL-10)
- Abiodegradablepolymerbasedtransfectionagent–onceinsidethecell,thepolymerdegradesintosmallerlesstoxiccomponentsreducingcelltoxicity,facilitatingreleaseofthetransgene,andimprovingtransfectionefficiency
- OptimizedforintracellulardeliveryofplasmidDNA,siRNA,microRNA,andmRNA
- HightransfectionefficiencyofbothsiRNAandplasmidDNAwithoutcompromisingcellviability
- AchieverobustsiRNAuptakefordependablegenesilencing
- Effectivetransfectionunderconditionsofupto40%serum
- TransfectionkitincludesTransfectionEnhancerreagent
- Gentleenoughtobeusedforsinglecellanalysis
- DownloadinvitroBHK-21transfectionprotocol:[PDF]
- Download BHK-21CRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforBHK-21 cellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast86%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsBHK-21TransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
BHK-21 CellLine:
Chronickidneyfailureisalossofkidneyfunctionoverthetimethatisconsideredasignificantpublichealthproblemworldwide.Developmentofnovelkidneytherapeuticsandinnovativetreatmentsoftendependsonpreclinicalstudiesthatcanhelptogaintheunderstandingoftheetiologyofthedisease.TheBHK-21celllinewasestablishedin1961from1-day-oldhamsterbyI.A.MacphersonandM.G.P.Stoker.Thiscelllineexhibitedfibroblastmorphologyandwastakenfromthekidneysofhealthygoldenhamster(Mesocricetusauratus).ThesecellsaresusceptIBLetohumanadenovirus25,poliovirus2,andreovirus3,amongothers.BHK-21cellsarebeneficialforstudyingmammaliankidneycellsBIOLOGy.
Adenovirusesbelongtoafamilyofvirusescharacterizedbythepresenceofnonenvelopeddouble-strandedDNAandtheabilitytoinfectawidevarietyofhumancells.Adenovirusespreferablytargetupperrespiratoryregionofthebody,andthesymptomsmanifestthemselvesintheformofhighlycontagiousdiseasessuchasconjunctivitis.Theyarealsoresponsibleformoresevereillnessessuchasmeningitis.Hamsterfibroblastswerefoundtobehighlypronetoinfectionadenoviruses,andthus,theBHK-21cellline.OvertimetheBHK-21hasproventobeareliabletransfectionhostduringpreclinicalstudiesinvolvingnotonlyadenovirusesbutotherpotentialpathogenssuchasreoviruses.AltogenBiosystemsprovidesbiodegradablepolymer-basedhighefficiencytransfectionreagentkitsthathaveexhibitedlowcytotoxicityandhighsiRNAuptakebyhostcells.
Data:
Figure1.siRNAstargetingLaminA/CmRNAornon-silencingcontrolsiRNAweretransfectedintoBHK-21cellsfollowingtherecommendedprotocol.At48hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyqRT-PCRforLaminA/Cgeneexpressionlevels.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheLaminA/Cdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataaremeans±SD(n=4).
Figure2.ProteinexpressionofLaminA/CinBHK-21cells.DNAplasmidexpressingLaminA/CorsiRNAtargetingLaminA/CweretransfectedintoBHK-21cellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
BHK-21TransfectionReagent
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsisalifesciencescompany thatoffers celltype-specificandpre-optimizedtransfection products, electroporationkits,and invivo deliveryreagents.Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovideefficientintracellulardeliveryofprotein,DNA,mRNA,shRNA andsiRNAmolecules.Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’s TransfectionResource.
Selected invivo transfectionproductcitations(ALTOGEN® INVIVO TransfectionKits usedinthefollowingpublications):
- Hypertension.201259(1):158-66.Roleofuncoupledendothelialnitricoxidesynthase…Gaoetal[PDF]
- JounalofBiologicalChemistry.2012287(4):2907.Chaperoningofmutantp53protein…Gognaetal [PDF]
- PLoSPathogens.20128(8)Uridinecompositionofthepoly-U/UCtractofHCVRNA…Schnelletal[PDF]
- JProteomeRes.2012(11) Retinalproteomeanalysisinamousemodelofoxygen-induced…Kimetal[PDF]
- J TranslMed.201015;8:133.Preventionofhyperglycemia-inducedmyocardialapoptosis…Zhangetal[PDF]
- MolCellBiol.201333(7).SCO2inducesp53-mediatedapoptosisbyThr845phosphorylation…Madanetal[PDF]
- Hypertension.2015 65(2):430-9.Neurokinin3receptorandphosphocholinetransferase…Parchimetal [PDF]
- Gastroenterology.2011141(2) Differential typeIinterferon-mediatedautophagictrafficking…Desaietal[PDF]
- PLoSPathog.201410(10)ExosomesfromhepatitisCinfectedpatientstransmitHCV…Bukongetal[PDF]
AltogenResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BiologyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#6175)
- 1.5ml(Catalog#6176)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2115)
- 8.0ml(Catalog#6177)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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但是有在转染前,将细胞进行重新传代的情况,这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1)接种在孔板中,于37℃, 5%CO2 的条件下进行培养,18-24小时( sf9细胞为3-4小时)后转染。”
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!
目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
转染分2种,一种是瞬时转染,即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白,提一次蛋白,转染一次,这种方式一般不传代;
另一种转染为稳定转染,转染后加入一定选择压力进行筛选,没有转染的细胞不能存活,只留下转染的细胞,这种情况下可以筛选单个转染细胞,构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。
各位版友求助,
我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。
转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。
请各位大神帮忙
不建议你用MDCK细胞,非常难转染。
做的比较好的,一般都是上海地区的,你可以看下基尔顿生物。

