
Description
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TransfectionReagentfor C6Cells(GliomaCells,CCL-107)
- Twocomponentformulationenhanceslipidmediatedtransfectionefficiency
- Optimizedeasy-to-usetransfectionprotocolprovidedfortransfectionofsiRNA,DNA,mRNA,andmicroRNA
- KitincludesTransfectionEnhancerreagentandrecommendedtransfectionprotocol
- Hightransfectionefficacyinthe presenceofserum
- ExpandyourRNAiapplicationwithareagentoptimizedfordeliveryofbothsiRNAandplasmid
- ReproducIBLetransfectionresults
- Workswellforstandardreversetransfectionandhigh-throughputapplications
- DownloadinvitroC6 transfectionprotocol:[PDF]
- Download C6CRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforC6cellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast94%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsC6TransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
C6 CellLine:
Whileglioblastomaisnotthemostcommontypeofbraincancer,itisthemostaggressiveanddeadliest.Glialcellsareresponsibleforprovidingnourishmentandmechanicalsupporttonervecellsinthebrain.Gliomasaretumorsthatoriginatedinglialcellsandarecharacterizedbasedonlocation.AccordingtotheBrainTumorCenteratJohnsHopkins,malignantgliomascompriseabout70%ofallnewcasesofbraintumorsandtendtorecurdespiteaggressivecombinatorialtreatment.Newtherapiesaredesperatelyneededtoconqueranypotentialchallengesinthetreatmentofthemalignantbraintumorandimprovethesurvivalrateofpatients.Researchatthecellularlevelisahelpfultooltogatherinformationoncellsthatrapidlymetastasizesuchascancerousglialcells.TheC6gliomacelllinewasderivedfromthenervoustissueofarat(Rattusnorvegicus)glialtumorandhasproventobeareliabletransfectionhostforthestudyofbraintumors.ThisstrainofcellsisisolatedbyN-nitrosomethylureabyBendaetal.,exhibitingfibroblastmorphology.Inadditiontobeinganappropriatehostinmammalianbraintumorsstudies,theC6celllineisemployedforpreclinicalresearchworldwideaswellasincellularandmolecularBIOLOGyapplications.C6cellshavebeenknowntoshowglucocorticoidreceptors,andtheyalsomakeforagoodtransfectionresearchmodel.AltogenBiosystemsprovidestwo-componenthigh-efficiencytransfectionreagentkitsfortheC6gliomacellline.
Data:
Figure1.siRNAstargetingLaminA/CmRNAornon-silencingcontrolsiRNAweretransfectedintoC6cellsfollowingtherecommendedprotocol.At48hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyqRT-PCRforLaminA/Cgeneexpressionlevels.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheLaminA/Cdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataaremeans±SD(n=4).
Figure2.ProteinexpressionofLaminA/CinC6cells.DNAplasmidexpressingLaminA/CorsiRNAtargetingLaminA/CweretransfectedintoC6cellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
C6TransfectionReagent
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsprovidespre-optimizedtransfectionkitsandelectroporationproductsforlifesciencesandcancerresearch.Transfectionprotocolsareoptimizedforindividualcancercelllines.AltogenBiosystemsdevelopedtwotypesofinvivodeliverykits(animaltransfection):1)Tissue-targetedreagents(deliveryofproteins,DNA,andRNAintoliver,pancreas,orkidneytissues),and2)Broadrangeinvivobiodistributionreagents(PEG-Liposomebasedreagent,Nanoparticle-basedinvivoreagent,Lipid-basedtransfectionkit,andPolymer-basedkit).Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovideefficientintracellulardeliveryofproteins,DNA,mRNA,shRNA,siRNA,andothernegativelychargedbiomoleculesinvitroandinvivo.Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’sTransfectionResource.
AltogenLabsResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BiologyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#6345)
- 1.5ml(Catalog#6346)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2121)
- 8.0ml(Catalog#7026)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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其次要看下你选择单位的规模如何,做的比较好的,还是上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
不建议你用MDCK细胞,非常难转染。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!
可以用移液器将细胞吸出来并高速离心,沉淀重悬于PBS中洗涤,接着就可以裂解提取蛋白了。可以用超声,酶解等等,裂解后离心收集上清。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了:
1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。
2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大。
转染分2种,一种是瞬时转染,即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白,提一次蛋白,转染一次,这种方式一般不传代;
另一种转染为稳定转染,转染后加入一定选择压力进行筛选,没有转染的细胞不能存活,只留下转染的细胞,这种情况下可以筛选单个转染细胞,构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。

