Description
GenJet DNA In Vitro
Transfection Reagent for U2OS cells is pre-optimized for transfecting U2OS cells.
The U2OS cell line, originally known as the 2T line, was cultivated from the
bone tissue of a fifteen-year-old human female suffering from osteosarcoma.
Established in 1964, the original cells were taken from a moderately
differentiated sarcoma of the tibia. U2 OS cells exhibit epithelial
adherent morphology and viruses were not detected in the line during
co-cultivation with WI-38 cells or in CF tests against SV40, RSV, or
adenoviruses. Cells are positive for insulin-like growth factor I (IGF-I) and
insulin-like growth factor II (IGF II) receptors and express a number of
antigens, including blood type A, Rh+, HLA A2, Aw30, B12, Bw35, and B40(+/-).
Refer to the following optimal transfection conditions for maximal transfection
efficiency on U2 OS cells. GenJet reagent, 1.0 ml, is sufficient for 300 to
600 transfections in 24 well plates or 150 to 300 transfections in 6 well plates.
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Summary of
Optimal Transfection Conditions: |
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Storage Condition
Store at 4 °C. If stored properly, the product is stable for 12 months or longer
A Picture Showing Transfection Efficiency of GenJet Reagent on U2 OS Cells
GenJet reagent is optimized for
U2OS. U2OS cells
were grown per ATCC recommended culture medium and transfected with pEGFP-N3 by
GenJet. The efficiency was checked 48 hours post transfection
Data Sheet
ebiomall.com
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目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡；
转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害；
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议：考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统；摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection；对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是，细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利，加油~
不建议你用MDCK细胞，非常难转染。
我转的是7901、7901/DDP两种细胞，前者7901细胞很容易就转上，并且转后，状态良好，可是7901/DDP一转就死，我用的是吉玛慢病毒，转24小时后换液，刚开始一两天，没有异常，但后来细胞慢慢就死了，并且不是漂浮的，很多是贴着壁死，像是瓦解了一样
这是未转时细胞的样子
这是细胞转后，死亡的样子
并且即使是有些细胞未死，细胞后来也变得很脏，感觉有很破碎的细胞碎片
本人实验小白，**园子里大神指点，急，实在不知道怎么回事
但是有在转染前，将细胞进行重新传代的情况，这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1）接种在孔板中，于37℃， 5%CO2 的条件下进行培养，18-24小时（ sf9细胞为3-4小时）后转染。”
本人研究生
细胞状态与密度；转染试剂的类型、用量；DNA的品质、用量；转染复合物的品质、作用细胞的时间长度。
各位版友求助，
我使用Hek293构建转染模型，瞬转5质粒，用lipo2000做转染体系。
转染48h，发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘，比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM，不含FBS。
请各位大神帮忙
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
