Cellartis Definitive Endoderm Cells (from ChiPSC18) are human definitive endoderm (DE) cells derived from the human induced pluripotent stem cell line ChiPSC18. The hiPS cells have been differentiated into definitive endoderm cells in vitro to generate a population of >90% SOX17 protein-expressing cells; they are then dissociated into a cell suspension and cryopreserved. These DE cells are suitable for further differentiation into hepatocytes or pancreatic endoderm cells.
Cellartis Definitive Endoderm Cells (from ChiPSC18) are human definitive endoderm (DE) cells derived from the human induced pluripotent stem cell line ChiPSC18. The hiPS cells have been differentiated into definitive endoderm cells in vitro to generate a population of >90% SOX17 protein-expressing cells; they are then dissociated into a cell suspension and cryopreserved. These DE cells are suitable for further differentiation into hepatocytes or pancreatic endoderm cells. To differentiate the DE cells into hepatocytes, use the Cellartis Hepatocyte Differentiation Kit (Cat. # Y30050).
During the differentiation process that creates Cellartis Definitive Endoderm Cells (from ChiPSC18), the mRNA expression profile—as measured by RT-qPCR—shows the expected temporal expression of endodermal markers SOX17, FOXA2, FZD5, CXCR4, HHEX, and SOX7; mesoendodermal marker Brachyury; and pluripotency marker OCT4.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
其次要看下你选择单位的规模如何，做的比较好的，还是上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
不建议你用MDCK细胞，非常难转染。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级，因此只要这个结构仍然保持着，就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定，一些版本的GFP蛋白（如EGFP）甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性，因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的，一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构，即便细胞被固定了，仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！
可以用移液器将细胞吸出来并高速离心，沉淀重悬于PBS中洗涤，接着就可以裂解提取蛋白了。可以用超声，酶解等等，裂解后离心收集上清。
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了：
1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。
2，最后洗脱时最好使用无内毒素的水，我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的，并没有刻意用转染级的，因为转染量大，去内毒素的操作太麻烦，损失太大。
转染分2种，一种是瞬时转染，即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白，提一次蛋白，转染一次，这种方式一般不传代；
另一种转染为稳定转染，转染后加入一定选择压力进行筛选，没有转染的细胞不能存活，只留下转染的细胞，这种情况下可以筛选单个转染细胞，构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。
