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2019-04-07
脂质体介导的真核细胞转染实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。用脂质体将DNA导人各种真核细胞的效率比其他转染方法更高,重复性更好。 查看更多
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2018-07-21
货号:SL100499 查看更多
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2019-08-28
脂质体介导的真核细胞转染实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。用脂质体将DNA导人各种真核细胞的效率比其他转染方法更高,重复性更好。 查看更多
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2018-12-27
上海中乔新舟生物科技有限公司在发布的星形胶质细胞转染试剂盒供应信息,浏览与星形胶质细胞转染试剂盒相关的产品或在搜索更多与星形胶质细胞转染试剂盒相关的内容。 查看更多
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上海中乔新舟生物科技有限公司在发布的平滑肌细胞转染试剂盒供应信息,浏览与平滑肌细胞转染试剂盒相关的产品或在搜索更多与平滑肌细胞转染试剂盒相关的内容。 查看更多
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2021-06-03
原代细胞核酸转染仪所采用的技术是德国amaxa公司的Nucleofector™ 专利创新技术,其原理是采用独特的电场参数与细胞类型特异的转染溶液相结合的方法,直接将DNA转到细胞核内,即使是原代细胞(包括不分裂的血细胞或神经元),转染后2-4小时就能检测到转染基因的表达。转染效率高,操作简单方便。... 查看更多
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2018-12-25
VigoFect.pdf 查看更多
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2021-08-05
上海权阳生物科技有限公司在发布的siRNA 转染试剂供应信息,浏览与siRNA 转染试剂相关的产品或在搜索更多与siRNA 转染试剂相关的内容。 查看更多
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2021-08-01
Promega FuGENE® 转染试剂优惠不断,促销时间:截止2017.12.31FuGENE® 6 和 FuGENE® HD 转染试剂:均为非脂质体制剂,用于将DNA转染到多种细胞系中,高效低毒。该方案无需去除血清或培养基,导入试剂/ DNA复合物后,也无需洗涤或更换培养基。FuGENE® HD转染试剂不含任何动物来源成分。FuGENE® 转染试剂的特点1. 更具生物相关性:毒性更低,对生理过程影响更小。2. 操作简单:无需更... 查看更多
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2019-07-04
磷酸钙法细胞转染试剂是由上海前尘生物科技有限公司代理或销售的Yeasen品牌的试剂,产品来源于Yeasen。上海前尘生物科技有限公司是中国最权威的磷酸钙法细胞转染试剂试剂销售服务商之一,在浦东新区等地方销售磷酸钙法细胞转染试剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业磷酸钙法细胞转染试剂仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的磷酸钙法细胞转染试剂产品 查看更多
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2019-06-02
汉恒生物科技(上海)有限公司在发布的Lipo系列高效低毒细胞转染试剂供应信息,浏览与Lipo系列高效低毒细胞转染试剂相关的产品或在搜索更多与Lipo系列高效低毒细胞转染试剂相关的内容。 查看更多
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2021-07-19
河南佰柯生物科技有限公司在发布的Transfection Reagent(DNA/RNA)(转染试剂)供应信息,浏览与Transfection Reagent(DNA/RNA)(转染试剂)相关的产品或在搜索更多与Transfection Reagent(DNA/RNA)(转染试剂)相关的内容。 查看更多
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脂质体介导DNA转染法 实验方法 123
冷泪轩_韝2021-07-30
请教做过DNA 脂质体法转染细胞的高手
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
细胞转染 实验方法 123
一直攀爬的蜗牛2021-07-31
沉淀DNA的实验——乙醇沉淀法123
寂寞哥_05022017-10-02
可能有多种原因:目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;细胞贴壁转染之后没有正常换液。建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection; 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
转染前细胞长到多少比较合适做实验 123
蘑菇头丌Nj6R2021-08-18
细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。
signagen_signagen【价格,厂家,图片,批发,采购】_123
粉爱天晴2021-07-22
我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!
为什么转染的时候有细胞密度的要求呢? 实验室综合讨论区 干细胞...123
妮露LJB2017-10-02
大致是两个因素:转染对细胞有一定损伤,细胞密度大些,有利于减少平均损伤;转染试剂、DNA用量与细胞量有关。
请教siRNA细胞转染效率问题 细胞技术讨论版论坛123
齐宗献2021-08-10
细胞转染,为什么有许多孔的细胞死了?_123
qingwudarao2021-07-27
...Reagent/MIR 2704/ 0.4 ml _细胞转染_细胞研究_细胞相关_免疫在线123
医疗092017-10-02
看了一篇文献说,某某干预对SV40转染的人成纤维细胞有细胞毒性。不明白他想说明什么。#细胞生物学#
【求助】真核表达,基因克隆时是否要考虑3·端非翻译序列。123
sen4042021-08-09
细胞转染可以:(1)真核细胞可以掺入外源DNA而获得新的遗传标志;(2)应用于转基因动植物;(3)应用于生物制药、基因治疗、RNA干扰。
脂质体介导法
实验原理
上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
脂质体介导法
实验原理
上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
【求助】大鼠的什么细胞转染效率较高阿?急急急123
加菲9日1512021-08-06
个人经验,BHK、CHO是很常用的转染用细胞,而且跟抗体非特异性反应也不高。一般来说,大多数可传代细胞的转染效率都是可以的,还要考虑所用转染剂的类型。
不建议你用MDCK细胞,非常难转染。
不建议你用MDCK细胞,非常难转染。
转染后,细胞发生死亡怎么回事 123
KyoyaRB352017-10-02
可能有多种原因:
目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~

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