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Signagen/ATRIP Adenovirus/Category: Ready to Package Adenovirus/
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Signagen/ATRIP Adenovirus/Category: Ready to Package Adenovirus/
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Signagen
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SL109200
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ProductInformation
ProductName:ATRInteractingProtein,clonedintoourAd
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Promoter:CMV
StorageBuffer:DMEMwith2.5%BSA,2.5%glycerol
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GeneInformation
GeneName:ATRInteractingProtein
NCBIAcc.#:BC014153.2
GeneSymbol:ATRIP
GeneID:84126
GINumber:33991486
FusionTag:No

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目前,大多数癌症治疗(化疗,放射和免疫治疗)是通过称为细胞凋亡的过程杀死癌细胞而起作用,即通过激活蛋白质半胱天冬酶,致死细胞。细胞凋亡是指细胞自发的死亡过程,对于多细胞机体来说,它是维持机体完整性和自身稳定状态所需要的固有重要生物学过程。半胧天冬酶是细胞凋亡途径中的关键酶,半胱天冬酶通过接受死亡信号、启动凋亡或激活下游的分子及降解细胞骨架、蛋白质、核酸等发挥作用。但是在细胞凋亡治疗中,通常不能杀死所有的癌细胞,进而会导致癌症复发,也可能产生副作用,甚至促进癌症发展。科学家希望开发一种 查看更多>
AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是由陕西脉元生物科技有限公司代理或销售的MYbiotetch品牌的试剂,产品来源于国产。陕西脉元生物科技有限公司是中国最权威的AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒试剂销售服务商之一,在西安等地方销售AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒产品 查看更多>
罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序(In situ cell death detection kit-POD法)一、 原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端,并与连接辣根过氧化酶(HRP,horse-radish pero 查看更多>
美国Trevigen公司细胞凋亡、侵袭、彗星试剂、3D细胞培养等产品火热促销中,最低5折起,还有精美小礼品,欢迎选购,Trevigen中国总经销商----深圳市纽邦生物公司为答谢广大客户一直以来的支持与厚爱,特对旗下细胞凋亡、侵袭、彗星试剂、3D细胞培养等产品推出促销活动,限时不限量,欢迎选购!想要了解更多产品信息,请登录trevigen官方网站或者联系其授权总经销商--深圳市纽邦生物科技有限公司,咨询具体产品价格及货期。 查看更多>
2017-02-22
在实验中经常需要检测细胞的凋亡情况,这里总结了几种常见的凋亡检测方法,希望能够帮到你。一:细胞凋亡的形态学检测 发生凋亡的细胞在形态上有一定的特征。 >>>>光学显微镜和倒置显微镜 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 >>>> 查看更多>
Annexin V 与PI双染检测细胞凋亡改进方案标本:肺泡灌洗液标本:外周血溶血后标记检测 查看更多>
买CCK-8试剂盒送细胞凋亡检测试剂盒       Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)细胞活力检测试剂中含有WST-8,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。生成的甲瓒物的数量与... 查看更多>
Characteristics of the procedure Preparation of isolated nuclei - procedure Preparation of radioactive labeled nuclei Material Characteristics of the procedure 查看更多>
七、凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析   TFAR19(PDCD5)是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因 查看更多>
发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。一、材料与试剂凋亡细胞;蛋白酶K(500μg/ml 查看更多>
早期凋亡细胞及活细胞的胞膜正常,DNA染料碘化丙锭(PI)拒染,但可被另外一种DNA染料Hoechst342(Ho342)染色;而坏死细胞的胞膜完整性受到破坏,细胞不需固定即可被PI染色。凋亡细胞的胞膜成分亦发生改变,在凋亡早期,原来位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至脂双层外侧。 另外,细胞凋亡时核酸内切酶被激活,首先将D 查看更多>
biotium公司提供的细胞凋亡、坏死、细胞活性检测常见方法,内含实验数据及图片等,适合于准备做细胞凋亡坏死及细胞定量的同志们下载学习。 ... 查看更多>
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最近在用流式测加药后细胞凋亡情况,但加的药物是自发红光的柔红霉素,用常用的凋亡试剂盒,annexinV-fitc和PI双染的测流式,干扰比较大,想问问有人遇到过类似情况吗?请教一下有没有什么解决方法。

CCK8试剂盒细胞凋亡检测的创举,MTT法被彻底抛弃,现附上一篇应用engreen生物的CCK8试剂盒研究黄酮和单宁通过通过线粒体和p53信号通路诱导人肺腺癌细胞凋亡的文献,以供参考。



hinaL.RhizomeInduceApoptosisViaMitochondrialPathwayandMDM2-p53SignalinginHumanLungAdenocarcinomaCells.pdf(8891.03k)

请问一下大家,如果想做流式细胞仪检测细胞凋亡情况,请问细胞应该接种在多大的孔板上

主要是:细胞变圆,染色质凝聚、分块,胞质皱缩.之后整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一些 球形的突起,并在其基部绞断而脱落形成大小不等的内含胞质、细胞器及核碎片的凋亡小体,然后被周围细胞所吞噬.
其他的特征是:1.由基因控制,2,不引起炎症.3.质膜不破裂,4,染色质DNA的有控裂
一、形态学观察方法
  1、HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。
  2、丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
  3、台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。
  4、透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

  二、DNA凝胶电泳
  (一)检测原理
  细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180-200bpDNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。

  (二)结果判断
  正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状(LADDER)条带;坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。

  三、酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定
  凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由ELISA法检测。

  (一)检测步骤
  1、将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;
  2、在微定量板上吸附组蛋白体;
  3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合;
  4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合;
  5、加酶的底物,测光吸收制。

  (二)用途
  该法敏感性高,可检测5*100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器,适合基层工作,但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。

  四、流式细胞仪分析
  (一)检测原理
  细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。

  (二)应用价值
  流式细胞仪检测具有以下特点:
  1)、检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确
  2)、可以做许多相关性分析
  3)、结合被检测细胞的DNA含量的分析,可确定凋亡的细胞所处的细胞周期

  ■检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法
  细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性液增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间,利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
  利用Hoechs-PI染色法,正常细胞对染料有抗拒性,荧光染色很浅,凋亡细胞主要摄取Hoecha染料,呈现强蓝色荧光,而坏死细胞主要摄取碘化丙啶(PI)而呈强的红色荧光。

  ■DNA片断原位标记法
  凋亡细胞DNA片断原位末端检测技术是指在细胞(或组织)结构保持不变的情况下,用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸(deoxyuridinetriphate,DUTP)和末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)相反应与凋亡细胞裂解后3.的羟基(-OH)端结合,经显色反应后检测DNA裂解点的技术。

  DNA片段原位标记法有二种:
  1、原位缺口转移(in situ nick-translation,ISNT)技术,它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸连接到断裂DNA的3-OH端
  2、原位缺口末端标记技术(in situ end labelling technique,ISEL),即TUNEL法,它是利用TdT将标记的DUPT接到3-OH端。研究证明,TUNEL法的敏感性远高于ISNT,尤其对早期凋亡的检测,TUNEL为合适。

  ■检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法
  1、原理:在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V(Annexin V)是钙依赖性的磷脂结合蛋白,它于PS具有高度的结合力。因此,Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V,将Annexin V标记上荧光素(如异硫氰酸荧光素FITC),同时结合使用PI拒染法(因坏死细胞PS亦暴露于细胞膜外测,且对PI高染)进行凋亡细胞双染法后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。

  2、结果判断:正常活细胞Annexin V 、PI均低染;凋亡细胞Annexin V高染、PI低染;坏死细胞Annexin V/PI均高染。

  3、应用价值:细胞发生凋亡时,膜上的PS外露早于DNA断裂发生,因此Annexin V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。又Annexin V联合PI染色不需固定细胞,可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此,Annexin V联合PI法更加省时,结果更为可靠,是最为理想的检测细胞凋亡的方法。
受环境影响;
凋亡虽是自主的但一般有外界因素刺激,致使信号传导,近而控制基因表达
生物性状是外界环境与基因共同决定的
比如,正常的杨树在北方到秋天会落叶,这是细胞凋亡,程序化的。但是,在南方,它不会在秋天凋亡.因此,细胞凋亡受环境影响。
之前一直做的是四氯化碳引起的小鼠肝组织急性损伤石蜡切片,买的是50t的试剂盒,做了四组重复,中间有一组结果较不好,又买了20t的试剂盒做重复,但是再也做不出来,后面换了DAB,结果还是不理想,DAB显色已经延长至8个小时,才有细微的显色,所有实验条件跟之前保持一样!求大神
Kerr( 1972)最先提出凋亡的概念,与细胞坏死的区别是:①细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体;②凋亡小体内有结构完整的细胞器; ③不引起炎症;④线粒体无变化,溶酶体活性不增加;⑤内切酶活化,DNA有控降解,凝胶电泳图谱呈梯状;⑥凋亡通常是生理性变化,而细胞坏死是病理性变化。
  细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)是一种基因指导的细胞自我消亡方式。PCD和细胞凋亡的区别在以下方面:PCD是功能性概念,凋亡是形态学概念;PCD的最终结果是细胞凋亡,但细胞凋亡并非都是程序化的;PCD存在于胚胎发育过程中。
细胞凋亡的速率与它们的功能是有关系的。向左转|向右转
凋亡是多基因严格控制的过程。这些基因在种属之间非常保守,如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等,随着分子生物学技术的发展对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识,但是迄今为止凋亡过程确切机制尚不完全清楚。而凋亡过程的紊乱可能与许多疾病的发生有直接或间接的关系。如肿瘤、自身免疫性疾病等,能够诱发细胞凋亡的因素很多,如射线、药物等。
其实从严格的词学意义上来说,细胞程序性死亡(PCD)与细胞凋亡是有很大区别的。细胞程序性死亡的概念是1956年提出的,PCD是个功能性概念,描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的,并受到严格程序控制的正常组成部分。例如蝌蚪变成青蛙,其变态过程中尾部的消失伴随大量细胞死亡,高等哺乳类动物指间蹼的消失、颚融合、视网膜发育以及免疫系统的正常发育都必须有细胞死亡的参与。这些形形色色的在机体发育过程中出现的细胞死亡有一个共同特征:即散在的、逐个地从正常组织中死亡和消失,机体无炎症反应,而且对整个机体的发育是有利和必须的。因此认为动物发育过程中存在的细胞程序性死亡是一个发育学概念,而细胞凋亡则是一个形态学的概念,描述一件有着一整套形态学特征的与坏死完全不同的细胞死亡形式。但是一般认为凋亡和程序性死亡两个概念可以交互使用,具有同等意义。细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。
常用细胞凋亡检测方法123
dxy_8mvqw9762017-06-21

细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。


一、细胞凋亡的形态学检测


根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。


1光学显微镜和倒置显微镜


(1)未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。

贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。


(2)染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割

成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。


2荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜


一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。


常用的DNA特异性染料有:HO33342(Hoechst33342),HO33258(Hoechst33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。


Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。


DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5~1mg/ml。


结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(图1)。


3透射电子显微镜观察


 结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosisnuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。

做CCK8很多次了,每次96孔板五个梯度的药物浓度OD值波动很大,同一块板子不同时间1.2.3.4h趋势都不同,浓度梯度和结果很乱,很是困惑,MTT做出一次,这个是6个复孔取平均值做的趋势图,五个点从左到右是由高浓度到低浓度,希望大神帮忙,

方式不同:凋亡是突然死亡,程序性死亡是渐进性死亡。
诱因不同:凋亡是受外因,细胞程序性死亡是受内因。
意义不同:凋亡是为了机体健康,意义积极。程序性死亡是顺应基因突变,意义消极。