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题目所给内容不完整，条件不足，无法解答

各位大虾，我现在需要用两种细胞核标记物标记活细胞，应经用了DAPI，是蓝色荧光的，除外还能用哪种标记物呢？万分感谢啊！

急求！请教各位站友，我准备标记成纤维细胞，移植体内后2月再切片观察，请问可以用什么标记？同时还要测移植后存活的细胞数量，万分感谢！

荧光蛋白
第一批用于细胞生物学的荧光蛋白包括藻胆蛋白（phycobiliproteins）和从蓝藻（cyanobacteria）中提取的触角光合色素（photosynthetic antenna pigments）。这些生物大分子都含有多种胆汁三烯生色基团（bilin chromophores）。这些生色基团都包裹在一种基质结构中，这样就能将它们的淬灭作用降至最小，因此这些藻胆蛋白的荧光亮度要比小分子荧光染料的亮度高出两个数量级。不过这些藻胆蛋白的“个头（分子量高达200KD）”也限制了它们在细胞内的扩散，因此，它们也只能与抗体联用，在流式细胞术试验或ELISA试验中用来检测细胞表面的蛋白质分子。
自从科学家从维多利亚发光水母（jellyfish Aequorea victoria）中发现了绿色荧光蛋白（GFP）之后，生物成像领域就发生了革命性的改变。单独表达绿色荧光蛋白或与其它蛋白融合表达就可以在细胞内发出绿色荧光了，使用这种方法除了需要氧气O2之外，不再需要任何其它的试剂参与，因为生色基团是通过自发环化作用形成的，需要对深埋在直径约2.4纳米至4纳米的β桶（beta barrel）核心里的三个氨基酸（丝氨酸-酪氨酸-氨基乙酸）进行氧化才能发出荧光。绿色荧光蛋白只是荧光蛋白大家族中的一员，这些荧光蛋白大部分都来自海洋腔肠动物，因为各自含有共价结构不同以及非共价环境不同的生色基团，所以可以发出不同颜色的荧光。在实验室中对这些荧光蛋白进行遗传修饰之后可以进一步的丰富它们的特性，比如增加亮度和折叠效率、减少寡聚体形成等。突变既可以增加荧光蛋白的光稳定性，还可以赋予荧光蛋白光操控性，比如控制荧光发射与否，或者发出哪种荧光。这种光操控性既可以是可逆的也可以是不可逆的，可以用于监测蛋白的弥散过程、运输过程和老化过程等。虽然荧光蛋白在生色基团形成的过程中会生成H2O2，但似乎没有产生太多的活性氧簇（ROS），这一点也并不奇怪，因为荧光蛋白在进化过程中都是暴露在阳光下的。不过我们也可以对荧光蛋白进行改造使其能够形成ROS。荧光蛋白发出的荧光一般对它们所处的生化环境都不太敏感，但是酸性环境或变性剂的存在可以淬灭荧光。不过现在我们已经有了经过改造的、能耐受酸性环境或者能对金属离子、卤化物离子和巯基二硫化物氧化还原剂起反应的荧光蛋白。展开

大部分的T细胞上的TCR都是alpha或者β，TCR GD是用来标记γδ T细胞的。这类细胞数量很少，主要见于肠道的淋巴组织

（1）死/活细胞染色法 ： 使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等，通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单，方便，价廉；但灵敏度和精确性差。
（2）荧光标记法 ： 使用二乙酸荧光素（FDP）、碘化丙啶（PI）或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育，用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是（1）法的“荧光”版，但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。
（3）硝酸镧(La)示踪法： 在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙，但不能穿过具有1~ 2nm 微小间隙的细胞膜性结构(包括细胞膜和细胞器膜)，也不能穿过细胞间的紧密连接。在膜性结构通透性增高时， 镧微粒则可进入细胞、细胞器和紧密连接内， 并在电镜下显示， 镧盐标记技术被认为是一种有效的监测细胞膜通透性变化的标记技术。
（4）LDH释放法： 在正常情况下，细胞内大分子物质LDH 是不能通过细胞膜的， 但在细胞膜受损伤而通透性增加时，可通过受损的细胞膜释放出来。LDH 能较好地反映细胞膜损伤程度。类似的还有检测细胞外K+的漏出率等。

目的初步筛选出肝母细胞瘤(HB)中的肿瘤干细胞(NSC)相关表面标记组合,并了解NSC的分布。方法选择入住江西省儿童医院并接受手术的HB患儿,采用免疫组织化学染色的方法,观察干细胞相关标记物CD34、Thy-1、c-kit、CD56和干细胞生长因子(SCF),在HB组织及距肿瘤组织边缘3cm以外的正常肝脏组织的表达和分布。结果
Thy-1、c-kit散在分布于HB组织中,主要集中在汇管区,而正常肝脏组织中不表达;CD34及SCF在HB中的表达明显高于正常肝脏组织(P0.05),其中CD34主要在血管内皮系统中分布,SCF主要表达在汇管区;CD56表达于成簇的神经纤维组织中,在HB及正常肝脏组织中表达差异无统计学意义(P0.05)。结论不同干细胞相关表面标志物分布于HB组织中,并且集中表达在特定区域。表达Thy-1/c-kit阳性细胞可能对HB的发生起一定作用。

是的，每一种细胞几乎都有其特异性标志。先说人的吧：T细胞（CD3+CD19-）、B细胞（CD3-CD19+）、辅助T细胞（CD3+CD4+）、NK细胞（CD3-CD56+）、细胞毒性T细胞（CD3+CD8+CD28+）、DC细胞（CD80等）。。。小鼠某些免疫细胞和人分子编号相同，但功能有所差别，详见下述：B细胞 CD45R/B220（相应mAb为RA3- 6B2）是小鼠全B细胞最常用标记，也表达于活化T细胞、活化NK细胞和NK祖细胞。CD19是B细胞较特异的标记。2. T细胞 小鼠重要的T细胞标记有Thy- 1(CD90)和成熟T细胞标记CD3e。CD4和CD8可用于区别辅助性T细胞和杀伤性T细胞。CD161（NK1.1，又称Ly59和NKR- P1C）是小鼠第三群T细胞的标记，即NK1.1+T细胞,可有Th和Tc的性质。小鼠记忆T细胞标记有CD44、CD62L和CD45RB。活化T细胞标记有CD152（CTLA- 4）、CD154(gp39)、CD134（OX- 40）、CD95L、CD45R/B220以及Ly- 6E(TSA,Sca- 2)。3.NK细胞 小鼠最为常用的全NK标记是CD161，但此标记只表达在某些小鼠品系如C57BL/6、NZB、CE等，此外CD161在某些T细胞亚群中也有表达。小鼠CD56 mAb并不与小鼠NK细胞反应。最近报道有一新的mAb DX5可与所有品系NK细胞反应。此外，CD122（IL- 2Rb ）、CD161a和Ly49家族（Klra,Killer cell lectin- like receptor）等标记也可用于NK的鉴定。4.Mf /Mo和DC细胞 抗Ly- 71 mAb F4/80广泛应用于小鼠组织中Mf 的分布和功能研究，此mAb与Eo、DC也有反应。小鼠CD14（rmC5- 3）在静止血Mo几乎测不到。其它MOMA- 1、MOMA- 2、Mac- 2、Mac- 3和巨噬细胞scavenger受体的mAbs也可应用于Mf /Mo的鉴定。Ly- 75(DEC- 205)抗原和CD11c是DC较限制的标记。其它用于DC有用的标记还有Ly- 79和Ly- 74（Ep- CAM,gp40）。

目前标记干细胞的MRI 对比剂主要有两类： 一类是以Gd3+对比剂即所谓顺磁性对比剂，主要产生T1 正性对比效应，目前有关的应用报道不多，主要是因为在目前MRI 场强下Gd3+的量需要达到相当程度，这在技术上尚有难度。
　　当然也有几项研究成功地应用Gd3+复合物通过胞饮作用或细胞内吞作用进入细胞内而后行MRI 的报道。Modo 等应用右旋糖酐聚合物连接的Gd-DTPA 与若丹明颗粒(gadolinium rhodamine dextran,GRID )可同时提供MRI 和荧光组织显像，将之标记永生化小鼠神经干细胞MHP36 细胞后移植至脑缺血大鼠的海马后进行4.7 T MR 离体成像， 证实MRI 能可靠分辨移植细胞以及示踪细胞迁移。
　　另一类是通过葡聚糖生物高分子包裹Fe3O4 晶体形成核壳式结构的超顺磁性氧化铁(superpara-magnetic iron oxide，SPIO) 纳米材料对比剂， 主要产生较强的T2 负性对比效应。其特点是粒径小、穿透力强且弛豫率约为同样 564 国际医学放射学杂志International Journal of Medical Radiology 2009 Nov; 32(6) 条件下Gd3+的7～10 倍，在很低浓度(nmol)时即可在 MRI 上形成对比且具有生物可降解性，能被细胞代谢后进入正常血浆铁池与红细胞血红蛋白结合或用于其他代谢过程。
　　以上特点使氧化铁类对比剂更受关注，是目前较理想的磁共振示踪剂。近年来，间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSCs)磁标记后MRI 示踪已成功应用于中枢神经系统和心脏等器官。Jendelova 等[21]将SPIO 和BrdU 双重标记的MSCs 经对侧脑半球局部移植入大鼠脑皮质损伤模型， 术后28 d 常规1.5 T MRI 显示MSCs 从注射点向对侧脑损伤区域迁移，脑损伤区域内见特异性低信号分布持续至术后50 d。
　　切片BrdU 免疫组化分析显示移植的MSCs 分化为神经元细胞，术后大鼠的神经功能改善，因此认为损伤组织可产生丰富的化学因子促使移植的MSCs 进行靶向迁移性修复。Kraitchman 等[22]利用Feridex 标记MSCs 经导管注入犬心肌梗死模型周边区域， 术后持续8 周，1.5 T MRI 明确观察到移植部位发出一条低信号线指向心肌梗死区域，心肌梗死面积逐渐减小。活体MRI 示踪磁标记MSCs 在骨关节领域也显示出重要的应用前景。
　　Mayer-Kuckuk 等应用与荧光基团结合的氧化铁粒子标记7F2 细胞和MC3T3-E1#4 细胞， 从股骨干骨骺端注射30 μL 含1×105 个磁标记细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)至小鼠股骨髓腔，7 T MR 活体成像显示骨髓腔内见特异性低信号持续至术后第9 天，此后髓腔内信号增高，提示移植MSCs 在股骨髓腔内部分丢失。
　　居等应用磁性氧化铁纳米粒子和多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine, PLL) 的偶联物 Fe2O3-PLL , 有效地标记了人脐血间充质干细胞,成功地进行了磁共振标记细胞成像， 且对细胞的活力、凋亡等生物学特性无明显影响。
　　国内一些研究者进行的实验室结合前期间充质干细胞的磁标记工作，正在进行肝干细胞、神经干细胞的磁探针标记， 评价其对细胞活力增殖与凋亡代谢分化的影响，评价MRI 不同序列上不同浓度标记细胞的信号特点，并将标记后的肝干细胞进行正常及肝衰大鼠体内移植，神经干细胞标记后进行正常及大脑半球缺血大鼠体内移植，用MRI 动态示踪移植细胞分析移植细胞的生存状态，总结MRI 示踪干细胞的理论依据、技术方法及影像学表现特征，达到活体下追踪干细胞存活迁移的目的[24-27]。虽然MRI 示踪干细胞已经显示出了良好的应用前景，但磁标记会随着细胞分裂而稀释，在监测移植后干细胞的分化方面尚存在不足[28]，有待进一步改进。
　　综上所述，有关干细胞标记和活体示踪方面的研究虽然取得了重要进展，但尚有许多问题需要解决，目前应用的各种标记示踪方法都有自己的优缺点， 但是随着科技的发展以及相关实验的不断深入，各种标记示踪方法目前存在的问题必定能够得到解决，其中尤其以MRI 活体示踪磁标记干细胞技术值得期待。利用无创伤性影像学技术活体示踪干细胞的研究将会取得重大突破。

台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。

红绿两种荧光蛋白分别标记人、鼠细胞表面蛋白，然后二者细胞融合。最终发现红绿相间，表明细胞膜具有一定的流动性，细胞膜表面的蛋白也有流动性

请问各位战友，用CFDA标记活细胞的具体方法是怎样的呢？一般在实验前多长时间标记呢？谢谢了……