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ImmunoChem/PKA Kinase Assay Kits, Type II/96 Assays/Kit/ICP0217
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PKA Kinase Assay Kits, Type II
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DESCRIPTION
Protein kinase A (PKA) is a family ofenzymes whose activity is dependent on cellular levels ofcyclic AMP (cAMP). PKA is also known ascAMP-dependent protein kinase. Protein kinase A has several functions in the cell, including regulation ofglycogen,sugar, andlipidmetabolism. The kinase assay kit (Type II) is a non-radioactive, homogenous, simple, immunoblot type assay. It is designed for kinase solid affinity matrices such as IP kinases or PKAs on GSH beads. It is also useful for the activity analysis of PKA in the solution phase. The principle of the assay is that the PKA kinase phosphorylate the substrate-BSA conjugates (component C) in the presence of ATP. The phosphorylated BSA-substrate is then analyzed using SDS-PAGE resolution and immunoblotting technique.
QUALITY CONTROL
The kits were tested using recombinant PKA.Sensitivity is approximately 5 ng of active /assay in an un-optimized condition.
Assay for activity of kinase using the type II kit (ICP0217)
A,100 ng; B, 50 ng; C,25 ng; D,12 ng; E, 6 ng; F, 0.00 ng
STORAGE AND STABILITY:
The kit is stable for 6 months at 4oC from date of shipment.
KIT COMPONENTS
A.Rabbit anti-phosphoSubstrate (anti-pSubstrate): 250 µg/mL in 200 µL of Tris acetate buffer, affinitypurified rabbit polyclonal, anti-phosphopeptide substrate (pCrebtide) antibodies (catalog# ICP0180). The anti-pSubstrate antibodies specifically recognize the phosphorylated form of the substrate but not the non-phosphorylated form. Dilute the antibody to 0.25-0.5 µg/mL with antibody dilution buffer (B) for working solution (enough to prepare 100 mL of working antibody solution).
B.10 x Antibody Dilution Buffer (AbDB): Catalog# ICP0217b, 2x10 mL. Dilute 10 mL of AbDB to 100 mL with distilled water asworking buffer solution
C.BSA-Substrate Conjugates (BSA-Sub): Catalog# ICP0217c, 250 mg/mL in 500 µL kinase assay dilutionbuffer (D). Approximately 10 molecules of kinase substrate peptide (RPRAATF-NH2) were conjugated to one molecule of BSA. Apparent molecular weight of the major conjugate is 70-80 kDa. The apparent MW for the aggregated form is approximately 150 kDa (enough for more than 100 assays).
D.Kinase Assay Dilution Buffer (ADB): Catalog# ICP0217d, 10 mL. 20 mM MOPS, pH7; 25 mM beta-Glycerolphosphate; 1 mM EGTA; 1 mM sodium orthovanadate; 1 mM DTT; and 2 mM MgCL.
E.Adenosine Triphosphate (ATP): Catalog# ICP0217e, 2x2 mg, Dissolve in 2 mL kinase assay dilution buffer (D) as working solution. Aliquot as 100 mL/vial and store at -20oC if not used all at once.
Additional Reagents Required but not Supplied:
1. Anti-rabbit Ig"s secondary antibodies.
2. PBSt washing buffer
3. 3% BSA or 3% skimmed milk as blocking buffer
4. All reagents and materials for SDS-PAGE, transfer materials, and signal generating system (such as BCIP/NBT or ECL)
PROTOCOL
Stage One: Preparation of kinase
1. Preparation of Kinase in Solution: Prepare the purified or partially purified (fractionated) kinase in 10 µL of the kinase assay dilution buffer (component D) with the required concentration in microcentrifuge tubes. For inhibitor screening, serial dilutions (range from 1000 to 50 ng/assay) of kinase should be tested for the optimal working concentration.
2. Preparation of the Immunoprecipitated Kinase:
Incubate anti-PKA (able to IP native kinase), or anti-tag (for tag-kinase) with 10 to 20 µL of protein A for 1 hr. Then wash away any unbound antibodies. Incubate the cell lysate sample in 250 µL of lysate buffer with the antibody-protein A complex in a rotor shaker at 4oC for 2 hrs. The user should select their own cell lysate buffer that contains protease and phosphatase inhibitors. The cell lysate sample should contain >20 ng of active PKA. Centrifuge and aspirate with PBSt twice then with kinase assay dilution buffer (D) twice. After aspiration, re-constitute the immunoprecipitated matrix in 10 µL of kinase assay dilution buffer (D).
3. Preparation of Kinase Purified with Affinity Matrix (GSH, Ni, maltose, etc.): The user should purify therecombinant kinases, such as PKA, following their own protocol. 10-20 µL of affinity matrix/assay is recommended. Do a final wash and aspiration of the matrix with kinase assay dilution buffer (D) then re-constitute the aspired matrix with 10 µL of the kinase assay dilution buffer.
Stage Two: PKA kinase activity assay
1. Add 2.5-5 µL of the BSA-kinase substrate (component C) to the kinase sample prepared in stage one.
2. Add 5 µL of the ATP (component E) solution to initiate the kinase reaction. Incubate at 37oC for 60 min with constant shaking or hand shake every 5 min.
3. Stop the kinase reaction with 20 µL of SDS-sample loading buffer and boil for 2 min.
Stage Three: Running SDS-PAGE and transfer;
1. Prepare a 8% SDS-acryamide gel.
2. Run the SDS-PAGE until the dye-front is approximately 2-3 cm past entering the separation gel.
3. Perform the normal gel transfer to a nitrocellulose membrane. The membrane only needs to cover between the top of separating gel and the distance to MW marker 60 kDa.
Stage Four: Immunoblotting.
1. Block the membrane with 3% BSA or 3% skimmed milk for 30-60 min
2. Wash the membrane twice with PBSt.
3. Incubate with 10 mL of anti-pSubstrate (component A), 0.25-0.5 µg/mL in antibody dilution buffer (component B) at room temperature for 2-4 hours, or 4oC overnight.
4. Wash the membrane with PBSt 4 times at 5 min intervals.
5. Incubate with anti-rabbit IgG secondary antibodies for 1-2 hours.
6. The user should select their own method (either colormetric or ECL system) for the signal generation
Summary of the Assay:
1.Kinase reaction: BSA-KRREILSRRPSYR + ATP + Kinase -> BSA-RREILSRRPpSYR
2.SDS-PAGE resolution and transfer
3. Specific immunoblotting for detection of the kinase product BSA-KRREILSRRPpSYR probed with anti-pSubstrate antibody
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2017-09-10
www.biozj.com 查看更多
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2017-06-06
上海研生实业有限公司所提供的pH7.2 磷酸盐缓冲液质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-07-29
上海联硕生物科技有限公司在发布的10×HEPES缓冲液/HMF溶液(不含镁)，10×HMF Solution 供应信息，浏览与10×HEPES缓冲液/HMF溶液(不含镁)，10×HMF Solution 相关的产品或在搜索更多与10×HEPES缓冲液/HMF溶液(不含镁)，10×HMF Solution 相关的内容。 查看更多
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2021-07-28
乙醇－醋酸铵缓冲液（pH3.7） 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.0） 取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.1） 取氯化钙0.294g，加0.2mol/L三羟甲基... 查看更多
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2021-09-08
货号：CCS013 查看更多
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2021-09-20
常州贝源鑫生物科技有限公司在发布的DNA凝胶加样缓冲液(6×DNA Loading Buffer)供应信息，浏览与DNA凝胶加样缓冲液(6×DNA Loading Buffer)相关的产品或在搜索更多与DNA凝胶加样缓冲液(6×DNA Loading Buffer)相关的内容。 查看更多
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2021-08-05
规格（核心参数）：125ml/瓶；PH4.00；是PH计/酸度计上面用的试剂，也叫标准缓冲溶液
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2021-09-22
北京生东科技有限公司在发布的柠檬酸钠(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)缓冲液(pH6.0)SDKJ-R00519-500ml供应信息，浏览与柠檬酸钠(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)缓冲液(pH6.0)SDKJ-R00519-500ml相关的产品或在搜索更多与柠檬酸钠(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)缓冲液(pH6.0)SDKJ-R00519-500ml相关的内容。 查看更多
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2017-06-20
上海远慕生物科技公司是国内elisa试剂盒优质供应商，代理销售不同elisa试剂盒品牌的进口/国产elisa试剂盒，专业供应科研实验所需的培养基，抗体，动物血清血浆，标准品对照品，化学试剂，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，金标检测试剂盒，微生物，蛋白质，ELISA种属涵盖广，凭借多年行业经验，完善的售后服务，高质量的产品。欢迎来电咨询。 客户通过生物在线在上海远慕订购PBS磷酸缓冲液 中文名：PBS磷酸缓冲液 英... 查看更多
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2018-12-26
Hippocampal Neuron Cultures (and mixed cortical cultures)Submitted by: Jean Siao, Ph.D.Begin by timing the pregnant mouse at E17-E19 days of gestation. Have re 查看更多
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2017-09-23
TE缓冲液，pH8.0是由北京索莱宝科技有限公司代理或销售的solarbio品牌的试剂，产品来源于北京市通州区马驹桥联东U谷86A。北京索莱宝科技有限公司是中国最权威的TE缓冲液，pH8.0试剂销售服务商之一，在北京等地方销售TE缓冲液，pH8.0试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业TE缓冲液，pH8.0仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的TE缓冲液，pH8.0产品 查看更多
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蛋白质多糖复合物SDSPAGE电泳,求助样品进不了浓缩胶?123
dxy_z22ufdq22017-06-16
0.01mol/L(PH7.0)的磷酸盐缓冲液怎么配制,请详细说明,谢谢 123
zlq02132017-08-15
TE缓冲液(pH 8.0)配制方法 123
风记社六团mfj2017-09-28
10 mmol/LTris-HCl(pH 8.0)
1 mmol/LEDTA(pH 8.0)
因为含有以上两种物质，所以称为TE。
配制分三步：
1)1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制：称取Tris碱6.06 g，加超纯水40 ml溶解，滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0，定容至50 ml。
2)0.5 M EDTA（pH 8.0）50 ml的配制：称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g，加超纯水35 ml，剧烈搅拌，用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0，定容至50 ml。（EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时，才会溶解。）
3)1×TE（10 mM Tris-HCl，pH 8.0；1 mM EDTA，pH 8.0）的配制：
作用：
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 10mMTris-Hcl，pH有7.47.68.0三种。
EDTA调到8.0是为了更好溶解，其他只要调到相应pH就可以。Tris在7－8附近缓冲能力很强，所以加8.0的EDTA下去后，不会改变pH。
1 mmol/LEDTA(pH 8.0)
因为含有以上两种物质，所以称为TE。
配制分三步：
1)1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制：称取Tris碱6.06 g，加超纯水40 ml溶解，滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0，定容至50 ml。
2)0.5 M EDTA（pH 8.0）50 ml的配制：称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g，加超纯水35 ml，剧烈搅拌，用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0，定容至50 ml。（EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时，才会溶解。）
3)1×TE（10 mM Tris-HCl，pH 8.0；1 mM EDTA，pH 8.0）的配制：
作用：
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 10mMTris-Hcl，pH有7.47.68.0三种。
EDTA调到8.0是为了更好溶解，其他只要调到相应pH就可以。Tris在7－8附近缓冲能力很强，所以加8.0的EDTA下去后，不会改变pH。
TE、TAE、TBE缓冲液的区别_技术文章_技术中心_专业生化...123
solarbio_2017-06-14
1、组成成分：
A、1×TE缓冲液：10mmol/LTris.Cl；1mmol/LEDTA，pH8.0。
B、1×TAE缓冲液：40mmol/LTris-乙酸；2mmol/LEDTA，pH8.0。
C、1×TBE缓冲液：45mmol/LTris-硼酸；1mmol/LEDTA，pH8.0。
2、用途：
A、TE缓冲液：一般用作溶解剂或保持剂，常用于溶解DNA，能稳定储存DNA。
B、TAE缓冲液:生物学中使用最广泛的核酸电泳缓冲液，主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
C、TBE缓冲液：生物学中常用的核酸电泳缓冲液，主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
3、TAE和TBE缓冲液的选择：
TAE和TBE缓冲液都可以用于DNA的琼脂糖凝胶电泳，两者各有利弊，应根据实际情况选择不同的缓冲液。
4、注意：
TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物，出现沉淀后应予以废弃。
4xLaemmli缓冲液10ml 1610747123
cindy葉2017-10-02
是sds-page实验用的
SDSpage的上样缓冲液配方哪种比较好?_问答详情_上样缓冲液_...123
miqi9452021-07-24
0.1M TrisEDTA缓冲液 表示什么意思? 生物材料 生物医学基础...123
尉迟布布2021-07-25
选择缓冲溶液的原则是什么? 配制缓冲溶液时,如何选择合适的缓冲对?123
yexiaoyunima2017-10-03
选择缓冲溶液的原则：
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值（PH+POH=14）
配制
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值（PH+POH=14）
配制
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
缓冲溶液与缓冲作用原理 123
悠悠__饨2017-10-02
由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用，是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时，H+离子基本上被A-离子消耗，所以溶液的pH值几乎不变；当加入一定量强碱时，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。
在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶液pH值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。
缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L-1NaAc组成的缓冲溶液，比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。
组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH最小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算：
此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。
弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系pH=pKaφ±1
弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系pOH=pKbφ±1
例如HAc的pKaφ为4.76，所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76～5.76的缓冲溶液，在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大，此时（c（HAc）/c（NaAc）=1。
制备
为了配制一定pH的缓冲溶液，首先选定一个弱酸，它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值，然后计算酸与碱的浓度比，根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。
以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。
缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛，如鉴定Mg2+ 离子时，可用下面的反应：
白色磷酸铵镁沉淀溶于酸，故反应需在碱性溶液中进行，但碱性太强，可能生成白色Mg（OH）2沉淀，所以反应的pH值需控制在一定范围内，因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液，保持溶液的pH值条件下，进行上述反应。
常用缓冲液配制
枸橼酸-磷酸氢二钠
甲液:取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。
乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。
取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml，混合，摇匀，即得。
氨－氯化铵缓冲液
取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml， 再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0，即得。
氨－氯化铵缓冲液
取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氨溶液35ml，再加水稀释至100ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。
醋酸－醋酸铵缓冲液
取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml，即得。
醋酸－醋酸铵缓冲液
取醋酸铵77g，加水约200ml使溶解，加冰醋酸57ml,再加水至1000ml，即得。
醋酸－醋酸铵缓冲液
取醋酸铵100g，加水300ml使溶解，加冰醋酸7ml,摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液
取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，即得。
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液（如HOAc与NaOAc），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲溶液。
参考资料：http://baike.baidu.com/view/901429.htm
在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶液pH值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。
缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L-1NaAc组成的缓冲溶液，比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。
组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH最小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算：
此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。
弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系pH=pKaφ±1
弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系pOH=pKbφ±1
例如HAc的pKaφ为4.76，所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76～5.76的缓冲溶液，在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大，此时（c（HAc）/c（NaAc）=1。
制备
为了配制一定pH的缓冲溶液，首先选定一个弱酸，它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值，然后计算酸与碱的浓度比，根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。
以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。
缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛，如鉴定Mg2+ 离子时，可用下面的反应：
白色磷酸铵镁沉淀溶于酸，故反应需在碱性溶液中进行，但碱性太强，可能生成白色Mg（OH）2沉淀，所以反应的pH值需控制在一定范围内，因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液，保持溶液的pH值条件下，进行上述反应。
常用缓冲液配制
枸橼酸-磷酸氢二钠
甲液:取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。
乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。
取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml，混合，摇匀，即得。
氨－氯化铵缓冲液
取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml， 再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0，即得。
氨－氯化铵缓冲液
取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氨溶液35ml，再加水稀释至100ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。
醋酸－醋酸铵缓冲液
取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml，即得。
醋酸－醋酸铵缓冲液
取醋酸铵77g，加水约200ml使溶解，加冰醋酸57ml,再加水至1000ml，即得。
醋酸－醋酸铵缓冲液
取醋酸铵100g，加水300ml使溶解，加冰醋酸7ml,摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液
取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，即得。
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液（如HOAc与NaOAc），弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲溶液。
参考资料：http://baike.baidu.com/view/901429.htm
跑电泳前,样品与上样缓冲液混匀时,颜色出现变化? 微生物...123
yilikouzi2017-07-24
缓冲溶液有什么特点?_123
2017-10-03
请列条例说明
TBST缓冲液配制及使用方法 123
solarbio_2017-05-12
TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，Tween20这三种物质，是做WESTERNBLOT中常用的一种缓冲液。
TBST缓冲液的配制
1000ml×TBST的配置
先称量NaCl40g，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g，倒入刚才的那个烧杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加（吐温20）5ml,转入1000ml容量瓶中，在定容，转移即可。
TBST缓冲液的应用：
1.主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印。
2.迹膜；
注意事项：
1.TBST缓冲液，PH7.2-7.5；
2.颜色为无色透明液体；
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作；
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