Product Name | Biotin - ACTH (1 - 39), humanBiotin - SYSMEHFRWGKPVGKKRRPVKVYPNGAEDESAEAFPLEF |
Size | 0.5 mg |
Catalog # | AS-23968 |
US$ | $232 |
Purity | % Peak Area By HPLC ≥ 95% |
This C-terminally labeled biotin ACTH (1-39) has been used in ELISA assays. Adrenocorticotropic hormone (ACTH), also known as corticotropin, is a cleavage product from a larger precursor proopiomelanocortin (POMC). This 39 amino acid-peptide hormone is produced in the anterior pituitary gland upon stimulation by the corticotropin releasing hormone from the hypothalamus in response to stress. It stimulates the secretion of steroid hormone, specifically glucocorticoids in the adrenal cortex by acting through a cell membrane receptor (ACTH-R). In mammals, the action of ACTH is limited to those areas of the adrenal cortex in which the glucocorticoid hormones cortisol (hydrocortisone) and corticosterone are formed. ACTH has little control over the secretion of aldosterone, the other major steroid hormone from the adrenal cortex. | |
Detailed Information | Material Safety Data Sheets (MSDS) |
Storage | -20°C |
References | Moreno-Guzmán, M. et al. Biosensors Bioelectronics 35, 82 (2012). doi: 10.1016/j.bios.2012.02.015Stewart, PM. et al. Clin Endocrinol 40, 199 (1994)Elias, LL. and AJ. Clark, Braz J Med Biol Res 33, 1245 (2000)Latronico, AC. Braz J Med Biol Res 33, 1249 (2000) |
Molecular Weight | 4767.6 |
Biotin-SYSMEHFRWGKPVGKKRRPVKVYPNGAEDESAEAFPLEF | |
Sequence(Three-Letter Code) | Biotin - Ser - Tyr - Ser - Met - Glu - His - Phe - Arg - Trp - Gly - Lys - Pro - Val - Gly - Lys - Lys - Arg - Arg - Pro - Val - Lys - Val - Tyr - Pro - Asn - Gly - Ala - Glu - Asp - Glu - Ser - Ala - Glu - Ala - Phe - Pro - Leu - Glu - Phe - OH |
Product Citations | Moreno-Guzmán, M. et al. (2012). Ultrasensitive detection of adrenocorticotropin hormone (ACTH) using disposable phenylboronic-modified electrochemical immunosensors. Biosensors Bioelectronics 35, 82. doi: 10.1016/j.bios.2012.02.015. |
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平常都是用超声破清洗器水浴超声破碎大约20分钟,然后上样的
但是一方面,常温超声不知道会不会造成蛋白降解破坏,因为发现加冰以后超声会变得非常弱,所以都么加冰。另一方面,因为水浴超声声强是不均匀的,如果样品多的话,会发现有些已经超碎DNA,但有些还是一团。
不知道是否有其他更好的方法?
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净,晾干,用胶带将两端的开口封好,放在水平的工作台上,插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中,(按0.3-1.5%的琼脂糖含量,1-25kb大小的DNA用1%的凝胶,20-100kb的DNA用0.5%的凝胶,200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶)置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化(不要加热至沸腾),取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后,在电泳槽内加入电泳缓冲液,然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品(DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的)与加样缓冲液按4:1混匀后,用微量移液器将混合液加到样品槽中,每槽加10-20μl,记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线,点样孔一端接负极,另一端接正极,打开电源,调电压至3-5V/cm,电泳1-3hr,当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时,停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶,放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min,即可在254nm的紫外灯下观察,有橙红色荧光条带的位置,即为DNA条带,或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂,操作时要小心,必须戴手套。
问:1如才能提高柱子吸附蛋白量?
2样品中的核酸对吸附有无太大影响?
3我拟采用阴离子交换树脂,问pH8.0条件下除去核酸可否?
4怎么提高样品的澄清度?
1.少量表达时用玻璃珠振荡的方法破碎细胞,跑胶时蛋白量总是很低,有什么好的方法进行少量酵母细胞的破碎吗?
2.好像有一种试剂加到玻璃珠振荡破碎的酵母细胞样品中来镜鉴细胞是否破碎的,是什么试剂啊?
多谢指点!
以DNA凝胶电泳为例,电泳的操作步骤如下:
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净,晾干,用胶带将两端的开口封好,放在水平的工作台上,插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中,(按0.3-1.5%的琼脂糖含量,1-25kb大小的DNA用1%的凝胶,20-100kb的DNA用0.5%的凝胶,200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶)置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化(不要加热至沸腾),取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后,在电泳槽内加入电泳缓冲液,然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品(DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的)与加样缓冲液按4:1混匀后,用微量移液器将混合液加到样品槽中,每槽加10-20μl,记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线,点样孔一端接负极,另一端接正极,打开电源,调电压至3-5V/cm,电泳1-3hr,当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时,停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶,放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min,即可在254nm的紫外灯下观察,有橙红色荧光条带的位置,即为DNA条带,或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂,操作时要小心,必须戴手套。
扩展知识:
在外加直流电源的作用下,胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动,这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离,这种技术也叫做电泳。
凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。
琼脂糖 ( Agarose ) 是一种线性多糖聚合物 , 系从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的 电泳介 质 , 其密 度是由 琼脂 糖的浓 度决 定的。经过化学修饰的低熔点 (LMP) 的琼脂糖 , 在结构上比较脆弱 , 因此在较低的温度下便会熔化 , 可用于DNA片段的制备电泳。
聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式 : 一是用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离 DNA的缺点是DNA的迁移 率受碱 基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常 , 故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA片 段的变性聚丙烯 酰胺凝 胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂 ( 尿素或甲酰胺 ) 的存在下聚合而成 , 变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关 , 故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。
我按照分子克隆上的步骤:
1.菌体称重为0.4g,加PBSbuffer3ml(PH=8.05),充分混匀。
2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升,至终浓度4mg/ml。冰置3小时。
3.超声400w,10s,10s,40次,结果目测还是乳白色,镜检很多菌体。
为什么破不开,搞不懂,我前几天做预实验的时候,还能变澄清???
注:预实验的步骤与现在的一样,只是菌体重量是0.1g加PBS3ml,再加溶菌酶至1mg/ml,超声400w,10s,10s,20次。
麻烦大家能给以帮助,先谢谢了...
另外还想问一下,还有其他可行的破碎方法吗
谢谢