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hypoxyprobe/Hypoxyprobe Biotin MAb Streptavidin GOLD 100 Kit/hp23-100kit
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2018-06-20
Q1：Amicon Ultra超滤管的膜材质是什么？A： AmiconUtra超滤管的膜材质为默克密理博特有的 Ultracet再生纤维素膜，生产工艺严格，截留分子量明确而精准，蛋白吸附损失最小。Q2：如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋蛋白的大小需要相差多少？A：按照经验，建议两个蛋白的分子量要相差一个数量级（10倍）Q3：AmiconUtra超滤管可以用于病毒浓缩么？A：可以。对于慢病毒推荐 Amincono Ultra10... 查看更多
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2021-07-29
北京北方同正生物技术发展有限公司在发布的用于快速平衡透析的RED装置 供应信息，浏览与用于快速平衡透析的RED装置 相关的产品或在搜索更多与用于快速平衡透析的RED装置 相关的内容。 查看更多
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2021-09-15
Microcon离心超滤装置是由默克公司上海办事处代理或销售的品牌的仪器，产品来源于Millipore。默克公司上海办事处是中国最权威的Microcon离心超滤装置销售服务商之一，在上海等地方销售Microcon离心超滤装置已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业Microcon离心超滤装置仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的Microcon离心超滤装置产品 查看更多
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2018-05-19
C、酶-底物复合物 D、酶-抑制剂复合物 E、酶的无活性前体 点击查看答案 2 关于酶的描述正确的是() A、酶都有辅助因子 B、所有的蛋白质都是酶 C、同工... 查看更多
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2021-07-14
装有Ultracel-10超滤膜的AmiconUltra-4离心超滤管AmiconUltra-4，PLGCUltracel-PL超滤膜，10kDa183212上海悦克生物科技有限公司装有 Ultracel-10 超滤膜的 Amicon Ultra-4 离心超滤管 查看更多
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2021-07-28
癌症是世界上最致命的疾病之一，尽管人类已经为之奋战数十年，并取得了较大的进展，但在癌症防治的临床应用上，仍缺少切实有效的新方法。今年《麻省理工学院技术评论》评选出的亚洲35位35岁以下科技创新精英（TR35）中，有一位叫Majid Ebrahimi Warkiani获奖者，他研发的新技术将为癌症的诊断和治疗带来新的希望。Warkiani今年32岁，目前是澳大利亚世界顶尖研究型学府新南威尔士大学（UNSW）的助理教授，他还是UNSW纳米医... 查看更多
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2021-08-04
抗体作为生物学上的一个有用工具已经超过一个世纪。 1 9 世 纪 7 0 年 代 ， Emil vonBehring 和 Shibasaburo Kitasato⑴最先阐述了免疫球蛋白，从那时起，抗体在研究和商业应用方面的使用取得了前所未有的进展。抗体最初是作为治疗病毒性疾病的天然抗血清来使用的。现今，高度工程化的治疗性抗体已被用于治疗多种危及生命的疾病。这一章将介绍纯化抗体的几种方法，尤其是单克隆抗体的纯化，纯化后的单克隆抗体具有多种用途。本章还将介绍抗体纯化前后的鉴定学方法。本章中，我们实验室产生的数 查看更多
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2018-12-26
酶的分离纯化方法简介生物细胞产生的酶有两类：一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶，称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶，如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶，就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高，容易得到；另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外，而在 查看更多
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2018-06-27
外泌小体（Exosome）是一种囊泡结构，直径通常在30-150nm，常见于正常体液和病理样本，培养细胞也可分泌。其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流，影响和调控着多方面的生理功能，包括肿瘤发生、免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现，外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利，成为体外诊断、biomarker研究的新热点。作 查看更多
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2021-08-29
急性失代偿性心衰（ADHF）是 >65 岁的高龄患者主要的住院原因，并且再入院率非常高。ADHF 每年死亡率高达 30% 以上。利尿是传统药物治疗方案的关键，但很多患者存在利尿剂抵抗，疗效不佳。其他新的药物如加压素、腺苷 -A1 受体拮抗剂也未见很好的效果。体外单纯超滤治疗是一项尚存在争议的选择，有利有弊。美国佛罗里达大学医学院 Amir Kazory 教授综述了关于体外单纯超 查看更多
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2018-12-25
For amplification of cognate sequences from different organisms, or for "evolutionary PCR", one may increase the chances of getting product by designing 查看更多
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2017-01-12
使用范围：+ 适用于医疗机构透析前后护理使用；产品特点：+ 托盘、包布、镊子；选用配置：输液贴、棉签、棉球、医用橡胶检查手套、治疗巾、医用透气胶带、碘伏棉球、碘伏棉签、医用垫单、医用中单、一次性薄膜检查手套、医疗器械防护罩；... 查看更多
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【求购】镍柱蛋白纯化试剂盒_问答详情_蛋白纯化试剂盒_蛋白纯化_...123
qinhuan04252021-08-15
如何选择二抗? 生物科学 抗体/Elisa 论坛学术科研互动平台123
Gloriachan2016-11-28
纯化蛋白后去咪唑透析液如何配制？_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】...123
Siliang02122017-08-22
各位大神，本人小白一枚，最近做镍柱纯化His标签蛋白，做到透析一步，不知道透析液该怎么配，在此请教大家！
我纯化蛋白时用的缓冲液是50mMNaH2PO4，300mMNaCl，pH8.0，洗脱缓冲液在这基础上加咪唑；
现在纯化后想透析掉咪唑，透析液是直接用结合缓冲液，还是PBS缓冲液，或是Tris-Hcl缓冲液？我考虑用结合缓冲液和PBS缓冲液是因为离子成分相近（都有NaH2PO4和NaCl），盐离子环境的变化不大，但是结合缓冲液的盐离子浓度是不是高了？PBS缓冲液pH一般是7.4，pH从8.0到7.4的变化会影响蛋白质稳定性吗？我看也有好些人用Tris-Hcl缓冲液，我也不知道该怎么选择了，各位大神能否给些建议？谢谢啦！
【原创】taq酶表达的一些个人经验 实验方法 123
huanglinjoe2008-02-02
最近做了taq酶的表达和纯化，将优化的实验流程和一点心得贴上来，希望对大家有帮助，更希望得到批评和指正
TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化
1.背景
重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组TaqDNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tagcoding序列，是T7的增强子，多克隆位点上有NcoI—Xhol11个酶切位点，载体上还有1个卡那霉素(Kan)的筛选标记。重组的TaqDNA聚合酶基因通过NdeI和Xhol双酶切克隆在表达质粒pET-28a多克隆位点上。
宿主菌为BL21(DE3)。菌株，即宿主菌BL21经噬菌体DE3溶源化后，DE3的lacUV5强启动子及位于其下游的T7RNA聚合酶基因被整合到宿主菌的基因组DNA中。宿主菌在非代谢性乳糖类似物IPTG的诱导作用下能产生大量的T7RNA聚合酶，而T7RNA聚合酶能特异性地识别Pet-28a表达载体中的T7启动子序列，从而高效地表达目的重组蛋白。由于IPTG不会被宿主菌利用，因此向培养液中加入少量的IPTG就能lacUV5强启动子产生持久的诱导作用。
2.材料与方法
1）.TaqDNA聚合酶表达载体构建
Nde1,Sal1双酶切通过pcr引进此双酶切位点taq酶基因，经过T4连接酶连接，将长度为2496bp的taq聚合酶基因，插入同样双酶切的PET28a载体中。
2）.工程菌的转化
通过热击转化的方法，将连接产物转化BL21(DE3)表达菌株，通过菌落pcr,提取质粒酶切鉴定确认taq酶基因已经确实插入PET28a载体，送表达菌株测序验证。
3）.TaqDNA聚合酶基因的诱导表达
取已鉴定的阳性克隆，转接20ml含卡那霉素的LB液体培养基，37℃培养，活化转化细胞。活化后，再取2mL培养液，转接到200mL含卡那霉素的新鲜LB液体培养基，37℃、150r／mim振荡培养3.5h左右，至OD值=1.0时，加入表达诱导剂(IPTG)，至终浓度1．0mmol／L，继续在37℃,150r／min条件下振荡培养，诱导表达，诱导8小时后制备。（转接量、诱导起始时间。诱导用IPTG浓度、诱导时间已经经过系统优化）
4）.10000g/4℃/5min收集菌体，用50ml缓冲液A（20mMTris-HCL,0.2MNaCl,PH8.0）洗涤，10000g/4℃/3min，20ml缓冲液A重悬，4mg/ml终浓度溶菌酶室温处理20分钟，加入DTT使终浓度为1mM,加入吐温-20使体积百分比为0.5%，75℃水浴45分钟，15000g/4℃/20分钟，得到的上清即粗蛋白。上清中加入硫酸铵（4M的母液PH8.0）使其终浓度为1.6M，室温磁力搅拌器搅拌30分钟，12000g/室温/20分钟，用缓冲液B（20mMTris-HCL,100mMKCl,0.5mMEDTA,1mMDTT,0.5℅吐温-20,0.5℅NP-40,50℅甘油，PH8.0）重悬，酶液用缓冲液B4℃透析过夜。
5）.步骤4所得到的酶液即可用于检测实验，为了得到更纯的酶，粗蛋白经中速滤纸过滤后过QsepharoseFF,收集穿透液，再利用工程菌表达的6His作为纯化标记。上清(补足NaCl至终浓度为0.5M)流过已螯合Ni的Ni-NTA柱，该柱先用10倍床体积结合缓冲液（20mMTris-HCL,0.5MNaCl,PH8.0,5mM咪唑）平衡；再用5倍床体积洗涤缓冲溶液（20mMTris-HCL,0.5MNaCl,PH8.0，15mM/30mM咪唑）依次洗涤；最后用洗脱液（20mMTris-HCL,0.1MNaCl,PH8.0,200mM咪唑）洗脱目的蛋白（SDS-PAGE检测蛋白纯度可达到85%以上）。含目的蛋白的洗脱液用sephadexG25脱盐，脱盐缓冲液即步骤4中的缓冲液B。（也可以将洗脱下来的酶液用2M终浓度硫酸铵沉淀后离心，沉淀用酶保存缓冲液溶解，对检测实验没有影响）
反应缓冲液中的镁离子浓度可以根据具体实验需要进行调整
3.检测
纯化后的酶十倍稀释，荧光定量PCR检测活性
SDS-PAGE检测纯度。
4.总结与心得
1）.实验前的准备工作是实验成功的基石，广义的讲：这包括实验大方向的确定、原始文献阅读、基因序列的查找比对、基础工作的准备、每一步实验的分析总结。做好每一步实验的科学分析可以避免后续实验的失败还可以给自己每一小步都成功的感觉，做研发，需要给自己信心。
2）.做好预实验，也就是在实验中做好阳性对照和阴性对照，这有助于我们实验结果的分析。举个例子：做转化时，我们加上质粒转化验证感受态没有问题，加上感受态细胞转化抗生素平板验证感受态没有被污染，这样，无论是什么样的转化结果（包括平板筛选结果）都可以得到很好的分析。
3）.用实验结果证明实验方法的成功与否，在蛋白纯化过程中，特别是在过阴离子柱或者阳离子柱时，凭空想象的离子浓度和PH值是不可取的，只有通过线性的离子浓度和PH值摸索纯化条件、数次重复对比实验，用真实的实验结果来确定所使用的实验条件。
4）.认真原始阅读文献，尽量用最符合生物科学的方法来解决问题，在实验过程中可以参照文献的实验方法，但一切用实验结果说话。
TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化
1.背景
重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组TaqDNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tagcoding序列，是T7的增强子，多克隆位点上有NcoI—Xhol11个酶切位点，载体上还有1个卡那霉素(Kan)的筛选标记。重组的TaqDNA聚合酶基因通过NdeI和Xhol双酶切克隆在表达质粒pET-28a多克隆位点上。
宿主菌为BL21(DE3)。菌株，即宿主菌BL21经噬菌体DE3溶源化后，DE3的lacUV5强启动子及位于其下游的T7RNA聚合酶基因被整合到宿主菌的基因组DNA中。宿主菌在非代谢性乳糖类似物IPTG的诱导作用下能产生大量的T7RNA聚合酶，而T7RNA聚合酶能特异性地识别Pet-28a表达载体中的T7启动子序列，从而高效地表达目的重组蛋白。由于IPTG不会被宿主菌利用，因此向培养液中加入少量的IPTG就能lacUV5强启动子产生持久的诱导作用。
2.材料与方法
1）.TaqDNA聚合酶表达载体构建
Nde1,Sal1双酶切通过pcr引进此双酶切位点taq酶基因，经过T4连接酶连接，将长度为2496bp的taq聚合酶基因，插入同样双酶切的PET28a载体中。
2）.工程菌的转化
通过热击转化的方法，将连接产物转化BL21(DE3)表达菌株，通过菌落pcr,提取质粒酶切鉴定确认taq酶基因已经确实插入PET28a载体，送表达菌株测序验证。
3）.TaqDNA聚合酶基因的诱导表达
取已鉴定的阳性克隆，转接20ml含卡那霉素的LB液体培养基，37℃培养，活化转化细胞。活化后，再取2mL培养液，转接到200mL含卡那霉素的新鲜LB液体培养基，37℃、150r／mim振荡培养3.5h左右，至OD值=1.0时，加入表达诱导剂(IPTG)，至终浓度1．0mmol／L，继续在37℃,150r／min条件下振荡培养，诱导表达，诱导8小时后制备。（转接量、诱导起始时间。诱导用IPTG浓度、诱导时间已经经过系统优化）
4）.10000g/4℃/5min收集菌体，用50ml缓冲液A（20mMTris-HCL,0.2MNaCl,PH8.0）洗涤，10000g/4℃/3min，20ml缓冲液A重悬，4mg/ml终浓度溶菌酶室温处理20分钟，加入DTT使终浓度为1mM,加入吐温-20使体积百分比为0.5%，75℃水浴45分钟，15000g/4℃/20分钟，得到的上清即粗蛋白。上清中加入硫酸铵（4M的母液PH8.0）使其终浓度为1.6M，室温磁力搅拌器搅拌30分钟，12000g/室温/20分钟，用缓冲液B（20mMTris-HCL,100mMKCl,0.5mMEDTA,1mMDTT,0.5℅吐温-20,0.5℅NP-40,50℅甘油，PH8.0）重悬，酶液用缓冲液B4℃透析过夜。
5）.步骤4所得到的酶液即可用于检测实验，为了得到更纯的酶，粗蛋白经中速滤纸过滤后过QsepharoseFF,收集穿透液，再利用工程菌表达的6His作为纯化标记。上清(补足NaCl至终浓度为0.5M)流过已螯合Ni的Ni-NTA柱，该柱先用10倍床体积结合缓冲液（20mMTris-HCL,0.5MNaCl,PH8.0,5mM咪唑）平衡；再用5倍床体积洗涤缓冲溶液（20mMTris-HCL,0.5MNaCl,PH8.0，15mM/30mM咪唑）依次洗涤；最后用洗脱液（20mMTris-HCL,0.1MNaCl,PH8.0,200mM咪唑）洗脱目的蛋白（SDS-PAGE检测蛋白纯度可达到85%以上）。含目的蛋白的洗脱液用sephadexG25脱盐，脱盐缓冲液即步骤4中的缓冲液B。（也可以将洗脱下来的酶液用2M终浓度硫酸铵沉淀后离心，沉淀用酶保存缓冲液溶解，对检测实验没有影响）
反应缓冲液中的镁离子浓度可以根据具体实验需要进行调整
3.检测
纯化后的酶十倍稀释，荧光定量PCR检测活性
SDS-PAGE检测纯度。
4.总结与心得
1）.实验前的准备工作是实验成功的基石，广义的讲：这包括实验大方向的确定、原始文献阅读、基因序列的查找比对、基础工作的准备、每一步实验的分析总结。做好每一步实验的科学分析可以避免后续实验的失败还可以给自己每一小步都成功的感觉，做研发，需要给自己信心。
2）.做好预实验，也就是在实验中做好阳性对照和阴性对照，这有助于我们实验结果的分析。举个例子：做转化时，我们加上质粒转化验证感受态没有问题，加上感受态细胞转化抗生素平板验证感受态没有被污染，这样，无论是什么样的转化结果（包括平板筛选结果）都可以得到很好的分析。
3）.用实验结果证明实验方法的成功与否，在蛋白纯化过程中，特别是在过阴离子柱或者阳离子柱时，凭空想象的离子浓度和PH值是不可取的，只有通过线性的离子浓度和PH值摸索纯化条件、数次重复对比实验，用真实的实验结果来确定所使用的实验条件。
4）.认真原始阅读文献，尽量用最符合生物科学的方法来解决问题，在实验过程中可以参照文献的实验方法，但一切用实验结果说话。
Westernblot一抗和二抗的选择 123
言小郝2021-08-12
我的二抗加显影液在机器里曝光10s的结果，这是不是说明右边这个效价不高了啊
双抗夹心法制备Elisa试剂盒时。怎么确定包被用抗体浓度?123
jeryren2017-10-03
HisTag 表达蛋白纯化原理、方法和问题分析123
lilingrui2006-01-22
请问：我用pet-32表达了我的目标蛋白，想用做抗原制备多克隆抗体。目标蛋白是以包含体的形式表达的融合蛋白，我用8M的尿素进行溶解后上Ni柱进行纯化，但整个过程中遇到了很多的问题，以前没有做过，还是菜鸟。请大家帮帮忙，在此先谢过！我遇到的问题有：
1、溶解效果不好：菌体加含8M的尿素的磷酸缓冲液后用超声波破菌，室温溶解1小时以上，甚至过夜溶解，溶解效果均很理想，虽然溶解了一部分，但是大多数还在沉淀里。我也做过含尿素梯度的缓冲液，我的目标蛋白在0.5M的尿素就有溶解，好像增加尿素的浓度对他的溶解影响不大一样，我想换用盐酸胍溶解，但是后面又要上柱子，不知道有没有影响，此外含盐酸胍的样品不能直接跑SDS-PAGE，所以很是郁闷。
2、Ni柱吸附样品不够好：将溶有我目标蛋白的样品上Ni柱进行纯化，但是上样前后的样品跑SDS-PAGE分析，没有多大的变化。纯化过程发现有很多的非特异性吸附。纯化后样品不够纯，大概只有50%。
3、纯度较高的浓度过低：由于要用于免疫，要求蛋白浓度要达到2mg/ml。但我的纯品很少，并且浓度过低，由于实验条件有限，浓缩样品又是一大难题。实验室没有冷冻干燥的装置，也不能用超滤，打算选用透析来浓缩，但是透析用的PEG会进入到样品中，这对免疫兔子影响是否会很大？会不会导致兔子死亡？有什么方法可以浓缩蛋白后将PEG去除？
4、此外是否可以用包含体的沉淀来免疫兔子？如果沉淀纯度够高的话
恳请高手们指教，盼回！谢谢！
1、溶解效果不好：菌体加含8M的尿素的磷酸缓冲液后用超声波破菌，室温溶解1小时以上，甚至过夜溶解，溶解效果均很理想，虽然溶解了一部分，但是大多数还在沉淀里。我也做过含尿素梯度的缓冲液，我的目标蛋白在0.5M的尿素就有溶解，好像增加尿素的浓度对他的溶解影响不大一样，我想换用盐酸胍溶解，但是后面又要上柱子，不知道有没有影响，此外含盐酸胍的样品不能直接跑SDS-PAGE，所以很是郁闷。
2、Ni柱吸附样品不够好：将溶有我目标蛋白的样品上Ni柱进行纯化，但是上样前后的样品跑SDS-PAGE分析，没有多大的变化。纯化过程发现有很多的非特异性吸附。纯化后样品不够纯，大概只有50%。
3、纯度较高的浓度过低：由于要用于免疫，要求蛋白浓度要达到2mg/ml。但我的纯品很少，并且浓度过低，由于实验条件有限，浓缩样品又是一大难题。实验室没有冷冻干燥的装置，也不能用超滤，打算选用透析来浓缩，但是透析用的PEG会进入到样品中，这对免疫兔子影响是否会很大？会不会导致兔子死亡？有什么方法可以浓缩蛋白后将PEG去除？
4、此外是否可以用包含体的沉淀来免疫兔子？如果沉淀纯度够高的话
恳请高手们指教，盼回！谢谢！
这个去垢剂的单体聚集数 蛋白质和糖学技术讨论版论坛123
颜良2017-01-05
新药研发中HCP那些事(上)123
FDUzhouwb2021-08-09
看了下说明书，上面没有具体说。感觉捕获抗体和酶标抗体需要对HCP有不同的结合位点才能形成稳定的抗体-HCP-抗体复合物。不知道有没有战友熟悉，求解惑，谢谢！
【二抗】二抗是什么_孵育时间_稀释液_标记_稀..._英文,elisa二抗西域123
『帀』2017-10-03
顺手采纳答案
一抗的英语是 resistance No.1，二抗resistance No.2.
一抗的英语是 resistance No.1，二抗resistance No.2.
蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办 蛋白质和糖学论坛123
海风朔语2017-04-20
世界著名抗体公司大全介绍 环球风云 123
—千零一个愿望2017-10-03
是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上最大的二抗和底物显色系统的生产商。其可以提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂，其产品有：亲和纯化的抗体和偶联物、ELISA和杂交底物、蛋白检测和纯化试剂盒、核酸标记和检测试剂以及其它辅助试剂等。
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