通过沉淀进行部分纯化
用硫酸铵沉淀蛋白质是抗体部分纯化中最古老的方法之一。将饱和硫酸铵加入血清或者腹水中来沉淀抗体。通过离心分离沉淀与未沉淀的蛋白质。当用水溶剂将沉淀重悬后，所得的溶液即为富含抗体的液体。
相比之下，使用辛酸沉淀，大多数沉淀的蛋白质不是免疫球蛋白。此操作结束后，抗体存在于上清中。
标准试剂的准备[如IX磷酸盐缓冲液（PBS)]在本书其他章节已有介绍（参见第8、9、11章）。

一、硫酸铵沉淀

1.准备一份饱和硫酸铵(AS)溶液(4.lmol/L)(向血清或者腹水中加入等量的饱和AS溶液，此时溶液的饱和度达到50%，抗体将会被沉淀）。

2.沉淀前，2500r/min离心腹水或血清15〜30min，使原液澄清，将血清或腹水转入一个清洁的烧杯中，放入一个磁力搅拌子，将其放置在磁力搅拌器上搅拌。

3.加人与原液等体积的饱和AS溶液。缓慢加人硫酸铵使其与腹水或血清混合。等出现的沉淀溶解后再加入更多的AS。当已经要基本加完所有的AS时将会出现不溶解性沉淀。继续加完所有的AS。让溶液在4°C继续混合6〜24h。

4.沉淀完成后，3000g离心溶液30min，弃上清（保留弃液样品作为后期的检测）。缓慢加入150mmol/LPBS溶液于沉淀中，用移液枪轻柔搅拌混匀。加入足够的PBS，其体积相当于原液的25%〜50%。

5.将溶解的预处理抗体用20倍体积的PBS溶液透析。由于AS的高盐浓度，建议至少每2h更换一次透析缓冲液，更换3次。

6.对终产物进行蛋白质浓度测定、区带电泳、密度扫描以及特异性检测（7.3节）。这些检测结果将显示抗体的纯化水平及活性。

7.纯化抗体应该小份量分装并一70°C保存。

二、辛酸沉淀

1.称量并记录腹水或血清的体积，将其转移到一个清洁的烧杯或烧瓶中。加入磁力搅拌子并放置在磁力搅拌器上搅拌。

2.加入2倍体积的pH4.0,60mmol/L的乙酸缓冲液，调节pH至4.8。

3.缓慢地将辛酸(辛酸原液）滴加人腹水或血清并轻轻搅拌溶液。IOml稀释后的腹水或血清中加入0.4ml的辛酸。室温下，搅拌30min。

4.5000g离心lOmin。取出上清并保留。

5.如前所述，富含抗体的上清在保存前应该对20倍体积的PBS溶液进行透析。
这些方法获得的产量不超过50%，纯度通常也不超过70%。因为这些方法无法产生高纯度的初制抗体，还需要进一步的纯化。策略之一是对腹水进行二次沉淀以产生中等纯度的抗体纯化物。在我们实验室，我们先进行硫酸铵沉淀，再进行辛酸沉淀。硫酸铵沉淀后，抗体初提物在PBS溶液中复性，然后在60mmol/L的乙酸盐缓冲液中透析。透析后，在进行辛酸沉淀前应将pH调至4.8。无论是通过硫酸铵沉淀，或者辛酸沉淀，或者通过两者，所得抗体都是有用的。用沉淀方法纯化的抗体能被成功应用于实验操作，如酶免疫试验、免疫沉淀、免疫印迹及斑点杂交。
经过硫酸铵或者辛酸沉淀的抗体纯度可通过区带电泳凝胶来检测（图7.1)。通过此分析，我们通过硫酸铵（泳道1)、辛酸，以及二者的联合沉淀步骤（泳道3)从腹水中纯化出单克隆抗体。单克隆抗体的浓度经AS沉淀后由原液的16.3%增加至23.0%，经二步沉淀后浓度增至32.75%。单独应用AS沉淀提高了单克隆抗体的浓度，但联合沉淀操作使得抗体的纯度得到了更喜人的提高。尽管如此，即使应用二步沉淀，抗体的纯度也还是只能达到75%〜80%。