【请教】请问抗原制备至这一步可以对动物免疫了吗？

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2021-07-30

问题描述：

我想请教一个问题，还望有人能指点一下。
我在准备制备壬基酚（nonylphenol,NP，分子量220.35)的多克隆抗体。现在合成人工抗原NP-BSA，合成过程用到的试剂有：NP、二甲亚砜、BSA、碳酸盐缓冲液、甲醛。现在化学合成已完成，也用PBS进行了透析。我分析透析液中应有NP—BSA，但还可能有BSA之间的交联产物以及甲醛与BSA的交联产物等，且各自能有多大量不能弄清，我想问现在可以用这种透析液对家兔进行免疫了吗？如果可以的话，免疫量每次应为多少？

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小善人

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顶一下。别沉下去，着急呢！

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oceansummer

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建议把合成后的交联物冷冻干燥进行动物免疫。透析后的产物里面小分子的NP应该都透析掉了，二甲亚砜和甲醛应该也应该可以透析掉，你的合成反应中控制好BSA和NP的反应比例，让NP过量的话，最后的反应物中BSA应该也会很少。如果你觉得自己的抗原不纯，可以通过凝胶电泳看看条带是否很多。反正是做多抗，抗原也不需要太纯，当然越纯越好了。我在免疫的时候，是把自己合成的抗原冻干了，然后称量，家兔免疫剂量在2mg左右/只，另外半抗原的免疫，初免和次免最好间隔时间长些，初免用完全佐剂，次免用不完全佐剂。加强一次后可以试血，如果有抗半抗原的抗体，那就证明你的完全抗原没有问题！

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小善人

用户

感谢oceansummer，我查文献也说冻干后再称量免疫的，但我根据反应前的BSA的浓度及体积和透析完后的总体积粗略算出了透析液中BSA浓度，约为8mg/ml,现准备对其用PBS进行等体积稀释，然后乳化再免疫，不知行不行。

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