Type:Protein
SpeciesReactivity:H
B=Bovine;Ca=Cat;Ch=Chicken;D=Dog;EQ=Equine;GP=GuineaPig;H=Human;M=Mouse;P=Porcine;Pr=Primate;R=Rat;Rb=Rabbit;Y=Yeast;Xe=Xenopus;Ze=Zebrafish;;;;NA-NotApplicable;STP=Step-TactinProteins;All
ACDNAencodingfulllengthhumanUCHL1wasinsertedintoaeukaryoticexpressionvectorwithaC-terminalHis-Tagandsubsequentlytransformedinto E.coli BL21cells.CellsweregrowninLBmediumsupplementedwithampicillinat37°C.Cellswereharvestedafterinducedproteinexpressionfor6hrs.Solubleproteinwaspurifiedusingimmobilizedmetalaffinitychromatography.YieldsofsolubleUCHL1proteinwereestimatedbyperformingSDS-PAGEandstainingwithCoomassieBlueR250.PurifiedproteinwasconcentratedfollowingextensivedialysisinPBSto1mg/mL,andstoredat-70°C(recommendedforlongtermstorage).Forthesubsequentanalyses,theconcentrationofUCHL1wasobtainedusingtheBradfordmethodandconfirmedwithadensitometry-basedImageJquantification.
Image:His-tagged-UCHL1,wasexpressedandpurifiedfromE.coliBL21usingimmobilizedmetalaffinitychromatography.ProteinconcentrationwasdeterminedusingBSAProteinBradford,andconfirmedwithadensitometry-basedImagJquantificationusingBSAasstandard.PictureshowstheCoomassiegelofUCHL1andBSAatserialdilution.UCHL1runsat~37kDa.
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一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。
抗原是指一种能刺激人或动物机体产生抗体或致敏淋巴细胞,并能与这些产物在体内或体外发生特异性反应的物质。抗原的基本能力是免疫原性和反应原性。免疫原性又称为抗原性,是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。反应原性是指能与由它刺激所产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应。具备免疫原性和反应原性两种能力的物质称为完全抗原,如病原体、异种动物血清等。只具有反应原性而没有免疫原性的物质,称为半抗原,如青霉素、磺胺等。半抗原没有免疫原性,不会引起免疫反应。但在某些特殊情况下,如果半抗原和大分子蛋白质结合以后,就获得了免疫原性而变成完全抗原。
抗原注射进入动物体内后,因为不是一个单独的分子,会随血液循环输送到各处,也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力激活一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆
由于动物个体差异的存在,同一抗原免疫同一种系不同个体的动物,产生的抗体的效价有很大的差异.与动物的年龄和营养状况密切相关.免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体.
先饲养观察7天其实就是等于隔离检疫,观察一下兔子的身体状况和是否带有其他传染病,淘汰体质多病的个体,防止在免疫过程中死亡或免疫应答不灵敏而不产生抗体.

