肉鸡鸡骨蛋白质酶法水解研究
| 实验方法原理 | 根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。 | ||||||||
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| 实验材料 | PBS 试剂、试剂盒 | 缓冲液 仪器、耗材 | 层析柱高效液相色谱仪 实验步骤 | 1. 腹水10000g离心10min，除去细胞和杂质，在4℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使终浓度为40％饱和硫酸铵搅拌20～30min 2. 离心，沉淀用40％饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS，对缓冲液A（PH8.520mMTris缓冲液）透析除盐4℃过夜 3. 用带有1000μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液A液平衡的TSKDEAESPW离子交换层析柱 4. 洗脱流速1ml/min 0～1min：0→5％缓冲液B（20mMTris，PH8.5，含2.0M醋酸钠） 1～20min（线性梯度洗脱）：5→20％缓冲液B 20～22min：20→0％缓冲液B 5. 洗脱液用紫外280nm进行监测 6. 收集蛋白峰，进行含量、纯度和活性测定 注意事项 | 1. 所用缓冲液和加样粗提物均需0.22μm滤膜过滤。 2. 在本实验条件下，IgG1峰一般在线性梯度洗脱开始11～12min。但不同类和亚类抗体以及不同特异性McAb的存留时间（retentiontime）有所差异。 |
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发布于 ： 2021-08-14
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