
Name | Ultra SYBR Green qPCR Master Mix (2X, with ROX I) | ||||||||||||||||
Cat. # | W2601-1 $ 79.00 (1 mL, 100 rxn) order from Fisher (Fisher Cat.# NC1492024) $279.00 (5 mL, 500 rxn) How to pay with ![]() Also can buy from : ![]() ![]() | ||||||||||||||||
Application |
This product is for research use only. | ||||||||||||||||
Specifications |
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Description and features | UltraSYBR Mixture (With ROX) provides a convenient real-time PCR specific reagent by intercalater method using SYBR Green I for detection. It is a 2x concentrated premix of GoldStar Taq DNA polymerase, dNTPs, Mg2+, SYBR Green I dye (detection), ROX reference dye and PCR buffer components. The product utilizes an enzyme for hot start, GoldStar Taq DNA polymerase, which confers a significant reduction in non-specific PCR amplification. As the enzyme buffer system is optimized for real time PCR, the product offers high amplification efficiency and high detection sensitivity in real-time PCR. In light of the fact that the qPCR instruments can vary from user to user, Cowin offers the UltraSYBR Mixture in a range of formulations, each of which has been carefully optimized to confer the best performance according to the make and model of a qPCR machine. Please use the following table as a guide for selecting the UltraSYBR Mixture that will be most compatible with your choice of a particular instrument/model. | ||||||||||||||||
Shipping / Storage | Ship at 4℃.Store at -20℃ for up to 1 year and avoid freeze-thaw cycles. Stored at 4℃ if it is frequent used within short time. | ||||||||||||||||
Key features | |||||||||||||||||
Manual (protocol) | ![]() | ||||||||||||||||
Components |
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PCR reaction system | ![]() Note: The recommended primer concentration for PCR is between 0.1-1.0 µM of each primer. A final primer concentration of 0.2 µM is likely to yield good results. Adjust the primer concentraction as necessary. |
![]() | Exosome Isolation | Purity > 95% |
![]() | Protein Extraction | 1 min total protein, 40 min membrane protein |
![]() | 3D Cell Culture Gel | 30% < mkt=""> |
![]() | PCR Kits | 50% < mkt=""> |
![]() | Beta-Hexosaminidase Activity Colorimetric Assay | Fast and sensitive, High-throughput |
![]() | Endotoxin-Free Plasmid Kits | maxi, midi and mini-prep |
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似乎都是鉴定目的基因是否导入受体细胞 没有鉴定是否成功导入质粒的 鉴定目的基因是否导入受体细胞有四个层次 1 直接鉴定受体细胞中是否有目的基因 用DNA分子杂交 2 鉴定目的基因是否转录 分子杂交(mRNA) 3 目的基因是否表达 抗原-抗体 (蛋白质) 4 看受体细胞发育成的个体是否表现出相关性状
各种系统都可以使用,AlleleID7.0没搞的定
本软件只作为学习研究之用,研究完后马上删除,支持正版。。。
感谢ddd198599及其他司机的信息及启发
http://www.stemcell8.cn/thread-20673-1-1.html
AlleleID6破解版.rar(44952.85k)
本人,大学本科生小白,想问一下各位老师,sirna设计出来之后,用snapgene吧sirna与靶mrna进行序列对比为什么没有同源序列,还有如果我想检验sirna是不是脱靶,是不是可以将sirna序列与相关影响的非靶基因序列对比确定哪。
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
《血管紧张素转换酶抑制剂在心血管病中应用的中国专家共识》.PDF(242.69k)
请教大家一个问题,不同厂家cIEF的Marker能混合使用吗?另外,如果我对其它厂家pI值为6.0的marker进行cIEF测定,那测得的pI值会等于6.0吗?谢谢!
当然,确定miRNA与mRNA之间的互作,我们还有更直接的方法,那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物(RISC)中的Argonaut(AGO)蛋白的抗体进行免疫共沉淀(co-IP)。生物通 www.ebiotrade.com
目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物,然后开展深度测序以鉴定发现的RNA,这种方法被称为紫外交联免疫沉淀结合高通量测序(HITS-CLIP),或CLIP-seq。利用这种方法来寻找miRNA的靶基因,能够明显降低miRNA结合位点的假阳性预测率,并且缩小miRNA结合位点的空间范围,可在全基因组范围内鉴定AGO蛋白与不同RNA上的结合。现在有多家公司提供CLIP-seq服务,如锐博生物。
Clontech公司(Takara旗下)也推出了一种新工具,能协助鉴定细胞中的miRNA靶点。这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体,允许miRNA与其目标结合,但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中,并“锁定”miRNA-目标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK(FLAG表位)标签有助于整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其目标的免疫沉淀,从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。生物通
整个过程大致如下:
1. 创建miRNA模拟物。生物通 www.ebiotrade.com
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞,并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。生物通 www.ebiotrade.com
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物(其中包括靶标mRNA)进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA,鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。
Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后,细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞,它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样,研究人员只需投入很少,就能实现大范围的筛选。
靶基因的验证
预测终归是预测,miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似,也就是抑制或过表达miRNA,然后检查mRNA或蛋白水平的反应。生物通 www.ebiotrade.com
目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先,构建荧光素酶表达载体,将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中,然后将构建好的重组载体转染到细胞中,并改变miRNA的表达水平,最后检测荧光素酶的表达情况,以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。
目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pmirGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因,其中萤火虫荧光素酶(luc2)作为主要报告基因,其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合;海肾荧光素酶/新霉素基因(hRluc-neo)作为对照报告基因,既能实现归一化处理,又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。
就目前而言,预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少,但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展,这种现状有望改变。让我们拭目以待吧。(生物通 余亮)

