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101Bio HRP Substrate Kit
Name | 101Bio HRP Substrate Kit | |||||||||
Cat. # | P5W1 How to pay with  Also can buy from :   | |||||||||
Application | Western Blot Ready to use, strong and long-lasting signal (>4h), low background. This product is for research use only. | |||||||||
Product Size | 30 ml / 30 ml | |||||||||
Description | 101Bio HRP substrate kit provides high intensity signal and low background detection of low abundance endogenous proteins. This highly sensitive ECL substrate is available in a two-bottle format for Western blotting with horseradish peroxidase (HRP) enzyme conjugates.This high-performance substrate will pick up your most difficult-to-detect proteins in Western Blots.The ECL substrate is compatible with different membranes, blocking reagents and a wide range of antibody dilutions. 101Bio HPR substrate kit provides excellent performance, versatility and long-lasting signal for high quality data.
| |||||||||
Shipping / Storage | Ship at room temperature.Store at 4℃ | |||||||||
Shelf Life | 12 months | |||||||||
Manual (protocol) |  | |||||||||
Components |
|
Protein Analysis Reagents
| Name | Cat. # | Size | ||
|---|---|---|---|---|
| 101Bio HRP Substrate Kit | P5W1 | 30 ml /30 ml | ||
| 101Bio Antibody Enhancer | P5W2 | 30 ml | ||
| 101Bio WB Stripping Solution | P5W3 | 250 ml | ||
| 101Bio Ponceau S Stain | P5W4 | 250 ml | ||
| 101Bio Peroxidase Suppressor | P5W5 | 30 ml | ||
| 101Bio High Efficiency Protein Precipitation kit | P5W6 | 30 ml /30 ml | ||
| 101Bio Red Blood Cell Lysis Buffer | P5W7 | 250 ml | ||
| 101Bio WB Blocking Solution | P5W8 | 250 ml | ||
| 101Bio Denaturing Protein Solubilization Reagent | P5W9 | 10 ml | ||
| 101Bio Non-Denatured Protein Solubilization Reagent | P5W10 | 10 ml | ||
| 101Bio Protein Solubilization Reagent for MS | P5W11 | 2 ml | ||
| 101Bio SDS-Remover | P5W12 | 10 ml | ||
| 101Bio Albumin Depletion Reagent for Plasma and Serum | P5W13 | 10 ml | ||
| 101Bio Protein A+G Agarose Beads | W0349 | 1 ml | ||
| 101Bio Protease Inhibitor Cocktail (100x) | W2200 | 1 ml | ||
| 101Bio Yeast Total Protein Extraction Kit for SDS-PAGE | Y203-50 | 50 rxn |
How to pay with
 | Exosome Isolation | Purity > 95% |
| Protein Extraction | 1 min total protein, 40 min membrane protein |
| 3D Cell Culture Gel | 30% < mkt=""> |
| PCR Kits | 50% < mkt=""> |
| Beta-Hexosaminidase Activity Colorimetric Assay | Fast and sensitive, High-throughput |
| Endotoxin-Free Plasmid Kits | maxi, midi and mini-prep |
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公司简介
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该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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2021-08-28
北京拜尔迪生物技术有限公司在发布的脱氧核糖核酸酶I（2000ku/mg）供应信息，浏览与脱氧核糖核酸酶I（2000ku/mg）相关的产品或在搜索更多与脱氧核糖核酸酶I（2000ku/mg）相关的内容。 查看更多
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Promega 原装RNasin® 核酸酶抑制剂现货促销！，promega N2511现货促销 查看更多
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特性
可在高温条件下，连接 DNA 链上的切刻位点
具有极高的耐热性，与 PCR 反应条件兼容
可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测
可通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变
概述9oNTM DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5 -磷酸末端和 3 -羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在 45 ℃-90 ℃ 范围内均有活性。
来源纯化自重组 E. coli 菌株，其携带有从极度耐热的海底超嗜热古菌（Therm 查看更多
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2021-09-13
人抗DNA酶B抗体 ELISA人抗DNA酶B抗体 ELISA属人ELISA试剂盒，是ELISA试剂盒中常用检测产品，的检测原理、产品报价及操作事项请咨询上海通善生物工程师，企业QQ 1465907913。属 人ELISA试剂盒规格 96T/48T包装 进口分装储存 2~8℃产品 美国供应商 上海通善生物特别说明 利用ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血液(指血，静脉血)，尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，**分泌物等，这些 查看更多
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2021-09-04
北京嘉美纽诺生物科技有限公司在发布的Fermentas公司连接酶供应信息，浏览与Fermentas公司连接酶相关的产品或在搜索更多与Fermentas公司连接酶相关的内容。 查看更多
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北京百泰克生物技术有限公司在发布的Thermo M-MLV 反转录酶供应信息，浏览与Thermo M-MLV 反转录酶相关的产品或在搜索更多与Thermo M-MLV 反转录酶相关的内容。 查看更多
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2019-02-27
在健康人的DNA复制和DNA修复过程中，会形成具有单链末端的分枝或瓣状DNAs。这些单链瓣状DNA可通过FEN1（瓣状核酸内切酶）而被切除，以修复DNA其双链状态的完整性。在临床预后更差的癌细胞中，已经观察到了更高水平的FEN1，并且当缺乏其他支持性的DNA损伤反应蛋白时，这些细胞更加依赖于这个修复酶。这些细胞是敏感的，并且会在FEN1被阻断的时候死亡——一个术语叫做合成致死。防止FEN1此类酶的作用，也许是一种选择性地杀死这些癌细胞的 查看更多
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2021-07-27
上海沪震实业有限公司在发布的聚磷酸肌醇磷酸酶4A抗体供应信息，浏览与聚磷酸肌醇磷酸酶4A抗体相关的产品或在搜索更多与聚磷酸肌醇磷酸酶4A抗体相关的内容。 查看更多
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2018-12-24
分析 分析题图:图示为一种表达型质粒的结构示意图,该质粒含有E、F、H三种限制酶的酶切位点;含有抗生素A抗性基因,可作为标记基因;含有“逆转录病毒序列”,该序列... 查看更多
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2018-01-20
C.DNA聚合酶 D.DNA连接酶 E.限制性核酸内切酶查看答案您可能感兴趣的试题 消化道内最重要、消化能力最强的消化液是 A.唾液 B.胃液 C.胰液 D.胆汁 E.小... 查看更多
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2021-08-08
内切酶，即限制性核酸内切酶。亦称限制性核酸酶。它是一种能催化多核苷酸的链断裂的酶，只对脱氧核糖核酸内一定碱基序列中某特一定位置发生作用，把这位置的链切开。通过内切酶可以把某一个遗传基因切下来，若再连在别的细胞的遗传基因上，便可使这细胞具有新的遗传特性。内切酶的发现和... 查看更多
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2021-07-17
限制性内切酶的主要功能是保护细菌不受噬菌体的感染，这一观点已被人们广泛接受。它们作为微生物免疫机制的一部分行使其功能。当一个没有限制性内切酶的细菌被病毒感染时，大部分病毒颗粒都能成功地进行感染。然而一个有限制性内切酶的同种细菌被成功感染的比率显著下降。出现更多的限制性内切酶将会起到多重保护作用；而一个拥有4到5种各自独立的限制性内切酶将会使细胞坚不可摧。限制性内切酶常常伴随一到两种修饰酶（甲基化酶）出现。后者的作用是保护细胞自身的DNA... 查看更多
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【求助】反转录酶必须要引物吗_问答详情_反转录酶_核酸酶类_...123
jinhoucong2021-08-18
我提取的RNA反转录，用的是0ligdT为引物，但是我能用反转录为模板扩出18S的rRNA来。我查了下反转录需要引物，我用的引物是0ligdT，本来只能反转录mRNA的啊，拿扩18S rRNA中间片断的引物不应该能从我的反转录产物中扩出18S中间片断来啊？
逆转录四个大步骤热点千牛作业网123
碎裂v42018-03-26
1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s
2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL
3、65℃保温5min，然后冰浴5min；
4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份
RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL
10×M-MLVReactionBuffer2μL
DTT（200mM）1μL
逆转录酶（M-MLV）1μL
5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；
6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；
7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。向左转|向右转
2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL
3、65℃保温5min，然后冰浴5min；
4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份
RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL
10×M-MLVReactionBuffer2μL
DTT（200mM）1μL
逆转录酶（M-MLV）1μL
5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；
6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；
7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。向左转|向右转
基因工程试题A123
fxj6082021-07-25
扩增病毒基因组中2kb的片段，选用哪种反转录酶比较合适？AMV？MLV？
而且保真性要高一点的，因为今后要用来做表达
而且保真性要高一点的，因为今后要用来做表达
观察以下dna结构图,判断dna聚合酶能够与哪一个结合123
啊姗痚2017-11-05
观察以下dna结构图，判断dna聚合酶能够与哪一个结合
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。
逆转录酶的特点及其应用谢谢_123
daisongbai092018-02-19
谢谢
逆转录酶的功能是什么？rna到rna还是dna？_123
慕容凉若20142017-10-02
逆转录酶种功能酶具RNA模板RNA聚合酶DNA模板DNA聚合酶兼RNaseH性
【求助】反转录后如果没有把酶灭活会怎么样 核酸基因技术讨论版...123
shuixiao19852021-08-21
好多酶的试剂说明书上都要求反应结束后灭活，如fermentas的MLV就是写着，反应结束后70度10分钟灭活，如果反转完了没有这个灭活，直接放冰箱中储存备用，会怎么样？影响后面PCR的扩增吗？
冷诱导RNA结合蛋白的生物学功能研究进展123
kwcswgs2012-12-03
来自瑞士日内瓦大学的J?rgMorf及其同事发现冷诱导的RNA结合蛋白（CIRP）的周期性积累会受到体温的调控，他们还发现CIRP赋予了昼夜节律振荡器的健壮性。
详情：http://www.bioku.cn/201212/science-cirp-circADIan-gene-clip-posttranscriptional-modification-fibroblast/
在哺乳动物组织中，节律基因的表达受到局部的振荡器或视交叉上核中生物钟主钟控制的系统信号的调控。本研究发现是受刺激的体温循环而不是外周振荡器，控制纤维母细胞中的冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）的节律性表达。反过来，功能缺失性实验表明CIRP是高振幅的节奏基因表达所需的。利用基于生物素-链亲和素的交联和免疫沉淀反应（CLIP），本研究对CIRP结合的RNA进行了全转录组分析，发现了一些编码昼夜节律振荡器蛋白的转录物，包括CLOCK蛋白。此外，在CIRP缺失的纤维母细胞中，CLOCK的含量大大减少。因为在这些细胞中，CLOCK的异位表达提高了节律基因的表达水平，因此我们猜测CIRP通过调节CLOCK的表达水平赋予了昼夜节奏振荡器的健壮性。
详情：http://www.bioku.cn/201212/science-cirp-circADIan-gene-clip-posttranscriptional-modification-fibroblast/
在哺乳动物组织中，节律基因的表达受到局部的振荡器或视交叉上核中生物钟主钟控制的系统信号的调控。本研究发现是受刺激的体温循环而不是外周振荡器，控制纤维母细胞中的冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）的节律性表达。反过来，功能缺失性实验表明CIRP是高振幅的节奏基因表达所需的。利用基于生物素-链亲和素的交联和免疫沉淀反应（CLIP），本研究对CIRP结合的RNA进行了全转录组分析，发现了一些编码昼夜节律振荡器蛋白的转录物，包括CLOCK蛋白。此外，在CIRP缺失的纤维母细胞中，CLOCK的含量大大减少。因为在这些细胞中，CLOCK的异位表达提高了节律基因的表达水平，因此我们猜测CIRP通过调节CLOCK的表达水平赋予了昼夜节奏振荡器的健壮性。
Taq DNA Polymerase 和rTaq酶有什么区别？作业慧海网123
小月哈哈0312017-11-27
Taq DNA Polymerase 和rTaq酶有什么区别
第一代热启动Taq酶是一种DNA聚合酶。 第一代指的是直接从Taq（这是一种细菌）体内提取的天然聚合酶，没有进行化学修饰的，为了达到更好的聚合催化效果，往往需要经过酶工程处理，得到的聚合酶催化效率更高。 热启动是指这种酶的反应温度条件
Taq DNA polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经过柱纯化分离出来的一个约94 KD的重组蛋白。无外源核酸酶和细菌DNA污染，稳定性好，特异性强，适用于常规PCR扩增。
第一代热启动Taq酶是一种DNA聚合酶。 第一代指的是直接从Taq（这是一种细菌）体内提取的天然聚合酶，没有进行化学修饰的，为了达到更好的聚合催化效果，往往需要经过酶工程处理，得到的聚合酶催化效率更高。 热启动是指这种酶的反应温度条件
Taq DNA polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经过柱纯化分离出来的一个约94 KD的重组蛋白。无外源核酸酶和细菌DNA污染，稳定性好，特异性强，适用于常规PCR扩增。
SplintR 连接酶工具酶_价格厂家供应商_北京百奥莱博科技有限公司...123
晚枫秋竹00332017-09-28
它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。
连接酶有T4噬菌体DNA连接酶、T4噬菌体RNA连接酶、大肠埃希菌DNA连接酶等。DNA连接酶可连接平端，也连接粘端。反应需有Mg2+和ATP存在，pH7.5-7.6。最适温度37℃，30℃以下活性明显下降，但考虑到被连接DNa 的稳定性和粘性末端的退火温度，一般平端连接用20-25℃，粘端连接用12℃左右。
聚合酶有DNA聚合酶（以DNA为模板合成DNA大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ，大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow大片段），T4或T7噬菌体DNA聚合酶等）；RNA聚合酶（以DNA为模板合成RNA，T7或T3噬菌体RNA聚合酶）；逆转录酶（以RNA为模板合成DNA，除RNA病毒中发现外，发现大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ和Taq DNA聚合酶都有逆转录活性）。
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′，3′→5′外切酶活性。Klenow片段是DNA聚合酶Ⅰ被枯草杆菌酶作用产生的一个大片段，有5′→3′聚合酶和3′→5′外切酶活性，无5′→3′外切酶活性。可用于缺口翻译（Nick translation）法标记核酸，也可用于DNA序列测定，修补DNA链等。向左转|向右转
连接酶有T4噬菌体DNA连接酶、T4噬菌体RNA连接酶、大肠埃希菌DNA连接酶等。DNA连接酶可连接平端，也连接粘端。反应需有Mg2+和ATP存在，pH7.5-7.6。最适温度37℃，30℃以下活性明显下降，但考虑到被连接DNa 的稳定性和粘性末端的退火温度，一般平端连接用20-25℃，粘端连接用12℃左右。
聚合酶有DNA聚合酶（以DNA为模板合成DNA大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ，大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow大片段），T4或T7噬菌体DNA聚合酶等）；RNA聚合酶（以DNA为模板合成RNA，T7或T3噬菌体RNA聚合酶）；逆转录酶（以RNA为模板合成DNA，除RNA病毒中发现外，发现大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ和Taq DNA聚合酶都有逆转录活性）。
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′，3′→5′外切酶活性。Klenow片段是DNA聚合酶Ⅰ被枯草杆菌酶作用产生的一个大片段，有5′→3′聚合酶和3′→5′外切酶活性，无5′→3′外切酶活性。可用于缺口翻译（Nick translation）法标记核酸，也可用于DNA序列测定，修补DNA链等。向左转|向右转
限制酶和DNA连接酶作用的部位是哪里？_123
2017-10-03
限制性内切酶:可以切割磷酸二酯键
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
[原创]亚硫酸氢盐修饰DNA步骤& lt;& lt;DNA methylation& gt;& gt;译稿 ...123
doctoryangjp2021-08-03
亚硫酸氢盐修饰DNA步骤
一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26gaugeneedle5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中，搅拌混匀，短暂离心。
3.37℃孵育15min。（有的资料介绍说可以42度20min）
4.90℃孵育2min（95度5nin也可），置于冰上，短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0（BDH）。（加7.6gNa2S2O5到15ml水，加464ul新鲜配制的10MNaOH）
6.加12ul10mM氢醌（55mg加水50ml氢醌），混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.55℃孵育4-16h（水浴）。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连，（注意连接紧）用吸管吸到注射器，底加2ml的离心管；轻轻加压，不要弄破膜；②加2ml80％的异丙醇洗涤，离心10000rpm，30s，底换管；柱子换到新1.5ml尖EP管，弃注射器；③加50ul预热水（60-70℃）放2-3min；离心（柱子与离心管一起，10000rpm，30s，DNA到EP管，弃柱子；
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液，弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原（10mg/ml）
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷（-20℃）100％乙醇，充分混匀
18.－20℃过夜（或者－70℃30min）
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清，加70％乙醇洗涤，4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中，室温下静置～2h，间隔旋涡振荡
22.－20℃保存DNA
hotstar酶做PCR，或者做Q-PCR
一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26gaugeneedle5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中，搅拌混匀，短暂离心。
3.37℃孵育15min。（有的资料介绍说可以42度20min）
4.90℃孵育2min（95度5nin也可），置于冰上，短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0（BDH）。（加7.6gNa2S2O5到15ml水，加464ul新鲜配制的10MNaOH）
6.加12ul10mM氢醌（55mg加水50ml氢醌），混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.55℃孵育4-16h（水浴）。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连，（注意连接紧）用吸管吸到注射器，底加2ml的离心管；轻轻加压，不要弄破膜；②加2ml80％的异丙醇洗涤，离心10000rpm，30s，底换管；柱子换到新1.5ml尖EP管，弃注射器；③加50ul预热水（60-70℃）放2-3min；离心（柱子与离心管一起，10000rpm，30s，DNA到EP管，弃柱子；
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液，弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原（10mg/ml）
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷（-20℃）100％乙醇，充分混匀
18.－20℃过夜（或者－70℃30min）
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清，加70％乙醇洗涤，4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中，室温下静置～2h，间隔旋涡振荡
22.－20℃保存DNA
hotstar酶做PCR，或者做Q-PCR
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