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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit/20-preps/D6922-02_蚂蚁淘,【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall 蚂蚁淘商城
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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit/20-preps/D6922-02
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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit/20-preps/D6922-02
品牌 / 
Omega Bio-Tek
货号 / 
D6922-02
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Overview

The E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit utilizes the convenient spin-column format to deliver high-quality plasmid DNA following a simple “bind-wash-elute” procedure without need for expensive accessories. The yields vary according to plasmid copy number, E. coli strain, and growth conditions. 50-200 mL of bacterial cultures in LB medium typically produces 0.6-1.2 mg of high copy number plasmid DNA. Up to 500 mL of culture may be processed when working with low copy number plasmid. The system uses centrifugation or vacuum technology for plasmid purification and eliminates the time-consuming gravity-flow columns that require alcohol precipitation. Purified plasmid DNA is suitable for automated fluorescent DNA sequencing (typical reads exceed 800 bp), restriction enzyme digestion, ligation, PCR, in vitro transcription, transformation, and other applications.

  • Speed – Purification of plasmid DNA in < 60 minutes
  • Safety – No phenol/chloroform extractions
  • Versatile – Spin and vacuum formats available
  • High quality – DNA is suitable for a variety of downstream applications

Specifications

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
FeaturesSpecifications
Downstream ApplicationCloning, sequencing, transformation, PCR, restriction digestion, ligation, in vitro transcription etc.
Starting material 50-200 mL LB culture with OD600 between 2 and 3; or equivalent
Plasmid typeHigh-copy, low-copy, cosmid DNA
Processing modeManual (centrifugation or vacuum)
Throughput1 - 24
DNA binding technologySilica Maxi Spin Column
Lysate clearance methodCentrifugation
Processing time<60>
Yield600-1200 µg for high copy-number; 50-300 µg for low copy-number

Kit Components

ItemAvailable Separately
HiBind® DNA Mini ColumnsView Product
50 mL Collection Tubes---
Solution IView Product
Solution IIView Product
Solution IIIView Product
HBC BufferView Product
DNA Wash BufferView Product
RNase AView Product
Elution BufferView Product

Protocol and Resources

Product Documentation & Literature

PROTOCOL

D6922 Plasmid DNA Maxi Kit

SDS

D6922 SDS

SALES SHEET

Product Data

Yield and quality of plasmid DNA purified using E.Z.N.A.® Plasmid Midi and Maxi Kits

Figure 1.  pGEM plasmid was purified from 250 mL DH5α cultures harboring the plasmid using Omega Bio-tek’s E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit following manufacturer’s recommended protocols. Plasmid DNA was quantified using Thermo Scientific’s NanoDrop™ 2000c system.

Citations

View Citations
  • Checco, James W., et al. “Aplysia Allatotropin-Related Peptide and Its Newly Identified d-Amino Acid–Containing Epimer Both Activate a Receptor and a Neuronal Target.” Journal of Biological Chemistry, vol. 293, no. 43, 26 Oct. 2018, pp. 16862–16873, www.jbc.org/content/293/43/16862.short, 10.1074/jbc.RA118.004367. Accessed 1 June 2020.
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  • Zheng, Fang, et al. “Chitosan Nanoparticle as Gene Therapy Vector via Gastrointestinal Mucosa Administration: Results of an in Vitro and in Vivo Study.” Life Sciences, vol. 80, no. 4, 2 Jan. 2007, pp. 388–396, www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0024320506007363?casa_token=zBzVOepd1NkAAAAA:uOnGysv24gs4oWwmkzcB_Cs_9aqgzhFkTGkUmgWOR6ZGh3tl8ZKv6-PvzRfKghxTEmaxspU7-YM, 10.1016/j.lfs.2006.09.040. Accessed 1 June 2020.
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T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA,尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外,T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。 查看更多>
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聚合酶的聚合酶分类 123
小超制作6352017-11-05

可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基础上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外,还需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样,上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶,它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物,并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下,在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′,5′-磷酸二酯键,其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105,由5条多肽链组成,分别命名为α,α,β,β′,和γ,全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105,由10~12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外,在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。向左转|向右转
‘控制’这个说法其实是个广泛的表述。实际上,DNA只不过是一个模板,通俗说是没有化学活性意义的母本,要转录翻译成为蛋白质,就要先转录成mRNA,然后mRNA作为最后的模板,翻译出想要得到的蛋白质,这之后,通常对得到的蛋白质进行进一步修饰才会得到最后由化学活性意义的蛋白质产物。当然这个步骤很复杂,远远不是说得这么简单,讨论他们都是化学分子组成的同类这一点没有意义的,就像你的手的行为有大脑控制的,而你的手和大脑都是蛋白质组成的。。。这个逻辑关系实际是宏观和微观的关系,朋友千万不要把这些混淆了去钻牛角尖。如果有兴趣和能力学量子物理,你就都明白了。。。祝学习愉快。
六大类化学修饰:甲基化;去氨基化,硫代(S代替碱基的O分子),碱基的同分异构化(尿嘧啶变构生成假尿嘧啶);二价键的饱和化;核苷酸的替代(用不常见的核苷酸替换常见的核苷酸)核酶
核酶(ribozyme)是指一类具有催化功能的RNA分子,通过催化靶位点RNA链中磷酸二酯键的断裂,特异性地剪切底物RNA分子,从而阻断基因的表达.
核酶的催化功能与其空间结构有密切关系,目前已知有多种特殊结构的核酶:
RNaseP的RNA碱基(M1 RNA)、锤头型、发夹型丁型肝炎病毒RNA、1类内含子和2类内含子,大多有hammerhead structure。
不同的核酶可分为两类:
1 剪切型核酶:只剪不接,如M1 RNA
2 剪接型核酶:该酶具有序列特异的内切核酸酶、RNA连接酶等多种酶活性,如1类和2类内含子向左转|向右转
合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素。选择最合适的耐热聚合酶,是进行PCR实验首先要考虑的问题。许多耐热DNA聚合酶的主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。
下面是六种不同耐热聚合酶的比较:
Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus:集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq:经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下,活性被化学基团封闭,要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应,避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增,提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq:具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对于简单模板可扩增长达40kb的模板,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum:热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高,而用Pfu扩增有难度,可选用TaqPlatinum,一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶,

克隆普通长度的目的DNA片段:Taq、TaqPlus
保真度要求较高,片段比较短,如点突变、基因筛选等:Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等:LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板,需要降低背景:HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板:TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应:Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段:Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带:2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix
问题刁钻啊......   原则说毕竟酶起催化作用所酶促反应都能自反应(能量要给)反面讲若没酶反应变慢(些酶加速5000倍)所些反应都变极慢相于没反应   DNA复制连接没酶能半才连根磷酸二酯键能断掉细胞高度序集合根本没间让DNA悠闲自我复制说没酶现细胞序集合   所我给结论:
相关疾病:心力衰竭与传统的提供较长时间蛋白表达的传统DNA投递方法相比,一种采用修饰RNA的治疗方法通过限制治疗蛋白表...
我用的是CLONTECH公司的反转录试剂盒,他分两步进行,以便为接下来的RACE作基础。试剂盒提供的有阳性对照MRNA,我的实验样本和对照一起做下去(反转录—RACE)。电泳结果是阳性对照扩出了预期大小的片段,我的标本没东西出来。我有几点想不清楚,请各位指教:1如何判断我的样本反转录是否成功,即反转录酶能到达5’或3‘的末端。2如果5’或3‘末端GC含量高,是不是要换用可耐高热的反转录酶,有这种酶吗?3是不是5’或3‘末端二级结构很复杂,高温也打不开,有什么其他的办法吗?4对于扩增全长,各位有什么好方法吗?眼看就要开题了,实验还毫无结果,真不知道是不是要延期毕业了!!!
人工合成基因的方法主要有两条途径:一是以目的基因转录成的mRNA为模板,逆转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因;二是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的 mRNA序列,然后按碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学的方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。
逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。是RNA病毒的复制形式,需逆转录酶的催化。艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。
逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别,但是逆转录是RNA类病毒自主行为,在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程;反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工合成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程,但地点不同,相对性的来说,逆转录在体内,反转录在体外。
RT-nPCR实际叫做反转录-巢式PCR,反转录PCR就是把RNA提取后反转录成cDNA,并以其为模板进行的PCR反应,通常用于检测某种RNA是否被表达,或者比较其相对表达水平巢式PCR(nested PCR),是指利用两套PCR引物(巢式引物)对进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性。所以反转录-巢式PCR就是以cDNA为模板进行的巢式PCR,它和简单的反转录PCR一样是用于检测某种RNA是否被表达,或者比较其相对表达水平,但是特异性更高,可靠性更强。
慢病毒的复制是不是需要它们自身生产的RNA聚合酶?和其他细胞里存在的RNA聚合酶II或III有什么不同吗?如果没什么不同,那么即使插入宿主细胞基因组内,还是可以借助宿主细胞的RNA聚合酶来进行转录的,是吗?大家多多指教!多谢!
酶主要属于蛋白质,少量为RNA,RNA水解酶就属于蛋白质.目的在于说明RNA水解酶带“RNA”但其实质是蛋白质而不能理解为是RNA.
同学,首先要理解,含有RNA病毒繁殖方式主要有以下几个:RNA病毒,一旦病毒颗粒中的RNA进入寄主细胞,就直接作为mRNA,翻译出所编码的蛋白质,其中包括衣壳蛋白和病毒的RNA聚合酶。然后在病毒RNA聚合酶的作用下复制病毒RNA,最后病毒RNA和衣壳蛋白自我装配成成熟的病毒颗粒。这类病毒很多,如ssRNA噬菌体、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、TMV等。另一类ssRNA病毒,它们的复制特点是病毒颗粒中的ssRNA病毒为负链,进入寄主后不能直接作为mRNA,而是先以负链RNA为模板由转录酶转录出与负链RNA互补的RNA,再以这个互补RNA作为mRNA翻译出遗传密码所决定的蛋白质。这类病毒称之为负链非侵染型病毒,如滤泡性口腔炎病毒、流感病毒、副流感病毒、莴苣坏死黄化病毒等。最后,还有一类特殊的ssRNA病毒即反转录病毒。该类病毒通常引起人和动物的肿瘤,其中包括造成人免疫性缺陷症的艾滋病病毒、白血病病毒、肉瘤病毒等。在它们的髓核中携带反转录酶,能使RNA反向转录成DNA,丰富和发展了分子生物学的中心法则。它们的复制有其特有的特点,一是单链RNA的基因组必须反转录成双链DNA;二是随后这种DNA必须整合到细胞DNA中;三是整合状态长期持续下去并传给子代细胞,也可能转录RNA,生产子代病毒或使细胞转化;四是感染细胞不会死亡,分裂不停止。也就是说这类病毒的潜伏期很长,有时可以终身带毒而不发病。所以说,RNA病毒种类如此多,有的用不着逆转录酶,有的自带逆转录酶,有的则直接利用细胞内现成的逆转录酶。明白了吗?
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