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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit/20-preps/D6922-02
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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit/20-preps/D6922-02
品牌 / 
Omega Bio-Tek
货号 / 
D6922-02
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Overview

The E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit utilizes the convenient spin-column format to deliver high-quality plasmid DNA following a simple “bind-wash-elute” procedure without need for expensive accessories. The yields vary according to plasmid copy number, E. coli strain, and growth conditions. 50-200 mL of bacterial cultures in LB medium typically produces 0.6-1.2 mg of high copy number plasmid DNA. Up to 500 mL of culture may be processed when working with low copy number plasmid. The system uses centrifugation or vacuum technology for plasmid purification and eliminates the time-consuming gravity-flow columns that require alcohol precipitation. Purified plasmid DNA is suitable for automated fluorescent DNA sequencing (typical reads exceed 800 bp), restriction enzyme digestion, ligation, PCR, in vitro transcription, transformation, and other applications.

  • Speed – Purification of plasmid DNA in < 60 minutes
  • Safety – No phenol/chloroform extractions
  • Versatile – Spin and vacuum formats available
  • High quality – DNA is suitable for a variety of downstream applications

Specifications

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

FeaturesSpecifications
Downstream ApplicationCloning, sequencing, transformation, PCR, restriction digestion, ligation, in vitro transcription etc.
Starting material 50-200 mL LB culture with OD600 between 2 and 3; or equivalent
Plasmid typeHigh-copy, low-copy, cosmid DNA
Processing modeManual (centrifugation or vacuum)
Throughput1 - 24
DNA binding technologySilica Maxi Spin Column
Lysate clearance methodCentrifugation
Processing time<60>
Yield600-1200 µg for high copy-number; 50-300 µg for low copy-number

Kit Components

ItemAvailable Separately
HiBind® DNA Mini ColumnsView Product
50 mL Collection Tubes---
Solution IView Product
Solution IIView Product
Solution IIIView Product
HBC BufferView Product
DNA Wash BufferView Product
RNase AView Product
Elution BufferView Product

Protocol and Resources

Product Documentation & Literature

PROTOCOL

D6922 Plasmid DNA Maxi Kit

SDS

D6922 SDS

SALES SHEET

Product Data

Yield and quality of plasmid DNA purified using E.Z.N.A.® Plasmid Midi and Maxi Kits

Figure 1.  pGEM plasmid was purified from 250 mL DH5α cultures harboring the plasmid using Omega Bio-tek’s E.Z.N.A.® Plasmid Maxi Kit following manufacturer’s recommended protocols. Plasmid DNA was quantified using Thermo Scientific’s NanoDrop™ 2000c system.

Citations

View Citations
  • Checco, James W., et al. “Aplysia Allatotropin-Related Peptide and Its Newly Identified d-Amino Acid–Containing Epimer Both Activate a Receptor and a Neuronal Target.” Journal of Biological Chemistry, vol. 293, no. 43, 26 Oct. 2018, pp. 16862–16873, www.jbc.org/content/293/43/16862.short, 10.1074/jbc.RA118.004367. Accessed 1 June 2020.
  • Tan, Xiao, and Samuel G. Awuah. “A Cell-Based Screening System for RNA Polymerase I Inhibitors.” MedChemComm, vol. 10, no. 10, 16 Oct. 2019, pp. 1765–1774, pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2019/md/c9md00227h, 10.1039/C9MD00227H. Accessed 1 June 2020.
  • Zheng, Fang, et al. “Chitosan Nanoparticle as Gene Therapy Vector via Gastrointestinal Mucosa Administration: Results of an in Vitro and in Vivo Study.” Life Sciences, vol. 80, no. 4, 2 Jan. 2007, pp. 388–396, www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0024320506007363?casa_token=zBzVOepd1NkAAAAA:uOnGysv24gs4oWwmkzcB_Cs_9aqgzhFkTGkUmgWOR6ZGh3tl8ZKv6-PvzRfKghxTEmaxspU7-YM, 10.1016/j.lfs.2006.09.040. Accessed 1 June 2020.
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TALENs(transcription activator-like (TAL) effector nucleases)的中文名为转录激活因子样效应物核酸酶,是基因组编辑核酸酶三大类之一。它是实现基因敲除、敲入或转录激活等靶向基因组编辑的里程碑。... 查看更多>
碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了,几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因,我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详细的论述 查看更多>
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泛素蛋白酶体途径是目前己知的所有真核生物体内具有高度选择性的最为重要的蛋白质降解途径。真核细胞中泛素化修饰后的靶蛋白可能被降解、可能被转移到细胞或细胞外的特定部位,也有可能导致靶蛋白的功能发生变化,这主要取决于靶蛋白所加的泛素链的结构,以及泛素链的长短。泛素连接酶E3... 查看更多>
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1. 产品简介  全能核酸酶,又称广谱核酸酶,英文名称Benzonase Nuclease,一种来源于Serratia Marcescen的基因工程酶。它可以降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线状、环状、天然以及变性的核酸,将它们消化成3-8个碱基长度的5-单磷酸寡核苷酸,且不具有碱基识别特异性。另外,全能核酸酶在非常广泛的条件下(6M urea,0.1 M Guanidine HCl,0.4% Triton X100,... 查看更多>
人靶向核糖核酸酶 ELISA人靶向核糖核酸酶 ELISA属人ELISA试剂盒,是ELISA试剂盒中常用检测产品,的检测原理、产品报价及操作事项请咨询上海通善生物工程师,企业QQ 1465907913。属 人ELISA试剂盒规格 96T/48T包装 进口分装储存 2~8℃产品 美国供应商 上海通善生物特别说明 利用ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,**分泌物等,这些样本 查看更多>
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核酸内切酶(endonuclease)在核酸水解酶中,为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶,与核酸外切酶相对应。从对底物的特异性来看,可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶;RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说,大都不具碱基特异性,但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并... 查看更多>
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链3‘-OH末端和,另一DNA链的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。... 查看更多>
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我以质粒为模板进行定点突变,质粒加目的片段一共6.5kb,不知道选用那种高保真聚合酶比较好,想选PfuDNA聚合酶,查了查比较好的公司Promega生产的了,现在又查到TaKaRa生产的PyrobestDNA聚合酶,不知道这两种酶哪个比较好一些。请哪位高手指点一下。
基因工程中聚合酶不是基本酶的原因:DNA聚合酶是将单个的脱氧核苷酸加到原有的DNA片段上的,所以不用!DNA聚合酶是不论何种片段强制连接的,而聚合酶是连接有特定顺序的碱基对片段的DNA。基因工程常见几种酶比较:DNA聚合酶: 在DNA复制时起作用,将多个脱氧核苷酸催化聚合为脱氧核苷酸链(也就是DNA单链),此时形成的化学键是磷酸二酯键。DNA解旋酶: 在DNA复制或转录时起作用,将DNA的双链解开,作用对象是氢键,使氢键断裂 DNA水解酶: 在消化道或细胞内起作用,将DNA水解为脱氧核苷酸,作用对象是磷酸二酯键。DNA连接酶:在DNA修饰过程或基因工程中起作用,将两个DNA片段连接起来,此时形成的化学键是磷酸二酯键。
蒽环类抗肿瘤抗生素药理作用123
ら点点滴滴6272017-10-03
蒽环类药物主要有三种作用机理:
⒈通过嵌入DNA双链的碱基之间,形成稳定复合物,抑制DNA复制与RNA合成,从而阻碍快速生长的癌细胞的分裂。
⒉抑制拓扑异构酶II,影响DNA超螺旋转化成为松弛状态,从而阻碍DNA复制与转录。有研究显示拓扑异构酶II抑制剂(除蒽环类药物还包括依托泊苷等)能够阻止拓扑异构酶II的翻转,而这点对于它从它的核酸底物上脱离是必需的。这就意味着,拓扑异构酶II抑制剂使拓扑异构酶II的复合物在DNA链断裂之后才能更稳定,导致后者催化了DNA的破坏;同时,拓扑异构酶II抑制剂还能阻碍连接酶对DNA的修复。
⒊螯合铁离子后产生自由基从而破坏DNA、蛋白质及细胞膜结构。向左转|向右转
DNA的复制事实上是半不连续复制 即只有一条链的合成是连续的 这听起来很神奇 但确实是这样 连续合成的链叫做前导链 另一条链称为后随链 它的合成是不连续的 以它为模板的合成 需要一段一段地进行 所合成的片段叫做冈崎片段
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶,辅因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型,简称限制酶,分别是第一型(Type I)。根据限制酶的结构、第二型(Type II)及第三型(Type III)不能,又催化非甲基化的DNA的水解。限制酶又称限制性核酸内切酶,专一对DNA起作用。限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列。III型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化;而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解
A、酶的本质是绝大多数酶是蛋白质,所以绝大多数酶是基因转录和翻译的产物,A错误; B、细胞核基因是染色体的组成部分,细胞质基因不是染色体的组成部分,酶不是细胞内染色体的组成成分,B错误; C、基因可以通过控制酶的合成控制代谢进而控制生物的性状,C正确; D、有某种酶的基因,细胞中不一定有相应的酶,因为在细胞中基因是选择表达的,D错误.故选:C.
相关疾病:肿瘤DNA拓扑异构酶Ⅱ与肿瘤药物靶点的研究进展,写得不好,请广大战友包涵

DNA拓扑异构酶Ⅱ与抗肿瘤药物靶点的研究进展.doc(59.5k)
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的.

DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
DNA聚合酶是DNA复制时起作用的酶。DNA复制酶这个说法很少见。
请问,用T4连接酶连接以后,做转化时是否需要酒精纯化一下?还有一个问题,用T4聚合酶补平粘性末端以后,可以直接用来做连接吗?
PromegaM-MLV逆转录酶怎么样啊,有哪位用过的分享一下经验咯,我看了一下他们的价格比较便宜点,但我BOSS以前都用的TakanaM-MLV,但Promega最近有促销,
10000U才246,很诱惑,谢谢咯
反转录酶的注意事项123
灰太狼咳卫2352021-08-01
反转录酶
在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时,要求RNA必须有PolyA,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,所以对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT,引物设计质量影响RT的结果,而且不同引物退火温度本来就不相同,所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择,一般不推荐。向左转|向右转
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